本發(fā)明屬于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)，特別涉及一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、細(xì)菌內(nèi)毒素是注射劑藥品中主要污染物質(zhì)，它是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的特有結(jié)構(gòu)，主要化學(xué)物質(zhì)為脂多糖。細(xì)菌內(nèi)毒素是外源性致熱源，它可以激活中性粒細(xì)胞等，使其釋放出一種內(nèi)源性熱原質(zhì)，作用于體溫調(diào)節(jié)中樞引起發(fā)熱、白細(xì)胞反應(yīng)、內(nèi)毒素休克及擴(kuò)散性血管內(nèi)凝血等。因此，對(duì)注射劑及注射用原料藥細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行檢測(cè)及控制是非常必要的。

2、目前檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的方法為：凝膠法和光度法。其中，光度法可以定量檢測(cè)藥品中細(xì)菌內(nèi)毒素含量，已逐漸被廣泛使用。

3、舒必利（sulpiride），屬于苯甲酰胺類(lèi)抗精神病藥，具有激活情感作用和很強(qiáng)的中樞性止吐作用。舒必利對(duì)淡漠、退縮、木僵、抑郁、幻覺(jué)和妄想癥狀的效果較好，適用于精神分裂癥單純型、偏執(zhí)型、緊張型及慢性精神分裂癥的孤僻、退縮、淡漠癥狀；對(duì)抑郁癥狀有一定療效；還可用于治療嘔吐、酒精中毒性精神病、智力發(fā)育不全伴有人格障礙、胃及十二指腸潰瘍等。

4、舒必利可注射給藥，其原料藥中細(xì)菌內(nèi)毒素的含量須進(jìn)行嚴(yán)格的控制。在原料藥的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)中，通常先將原料藥用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解并稀釋?zhuān)瞥晒┰嚻啡芤骸Ｓ捎谑姹乩勰┎蝗苡诩?xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，內(nèi)毒素不能有效釋放，易造成檢測(cè)結(jié)果偏差，故須研究開(kāi)發(fā)一種準(zhǔn)確適宜的檢測(cè)方法對(duì)舒必利進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素含量測(cè)定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，可有效解決舒必利在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水中難溶，不能有效釋放細(xì)菌內(nèi)毒素的問(wèn)題。

2、本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，包括如下步驟：

4、s1、將細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（bet水），梯度稀釋?zhuān)孟盗袠?biāo)準(zhǔn)品溶液；

5、s2、將舒必利樣品溶于有機(jī)溶劑，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋定容，得供試品原液；使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)一步稀釋供試品原液，得供試品溶液；

6、s3、將舒必利樣品溶于所述有機(jī)溶劑，加入細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，再使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋?zhuān)霉┰嚻逢?yáng)性對(duì)照溶液；

7、s4、將所述有機(jī)溶劑溶于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，稀釋得干擾試驗(yàn)溶液；

8、s5、將所述系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入鱟試劑，采用動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；再將供試品溶液、供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液、干擾試驗(yàn)溶液分別加入鱟試劑，采用動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程計(jì)算舒必利樣品中的細(xì)菌內(nèi)毒素含量；

9、其中，所述有機(jī)溶劑為二氯亞砜（dmso）。

10、本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)方案為：

11、s1中，將細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，梯度稀釋制成濃度為1eu/ml、0.1eu/ml、0.01eu/ml?的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

12、進(jìn)一步地，s2中，精密稱(chēng)取舒必利樣品50mg溶于2ml二氯亞砜，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋定容，制成舒必利濃度為1mg/?ml的供試品原液；再將所述供試品原液使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)一步稀釋10倍，制成舒必利濃度為0.1mg/?ml的供試品溶液。

13、進(jìn)一步地，s3中，精密稱(chēng)取舒必利樣品50mg溶于2ml二氯亞砜，加入濃度為10eu/ml細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液2支混勻，在使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋50倍，制成細(xì)菌內(nèi)毒素濃度為0.1eu/ml的供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液。

14、進(jìn)一步地，s4中，將二氯亞砜溶于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，制成濃度為4%的溶液；再使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)一步稀釋?zhuān)瞥蓾舛葹?.4%-2%的干擾試驗(yàn)溶液。

15、進(jìn)一步地，s5中，所述鱟試劑靈敏度為10-0.01eu/ml。

16、有益效果

17、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下明顯優(yōu)點(diǎn)：

18、一、本發(fā)明使用二氯亞砜溶解舒必利樣品，解決舒必利在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水中難溶，不能有效釋放細(xì)菌內(nèi)毒素的問(wèn)題；再使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)一步稀釋?zhuān)频霉┰嚻啡芤海山档投葋嗧繉?duì)細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生的干擾作用，避免其對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果的影響。

19、二、本發(fā)明采用光度法中的動(dòng)態(tài)濁度法，對(duì)舒必利中細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行定量檢測(cè)。相比于凝膠法，光度法具有靈敏度更高，重復(fù)性更好，能大范圍定量，數(shù)據(jù)具有可追溯性等優(yōu)點(diǎn)，可避免主觀因素影響結(jié)果的判斷，更適用于生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)供試品質(zhì)量的監(jiān)控，更好地滿(mǎn)足細(xì)菌內(nèi)毒素質(zhì)量管控要求。

20、三、本發(fā)明提供方法簡(jiǎn)便易操作，適合推廣應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，其特征在于：s1中，將細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，梯度稀釋制成濃度為1eu/ml、0.1eu/ml、0.01eu/ml?的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，其特征在于：s2中，精密稱(chēng)取舒必利樣品50mg溶于2ml二氯亞砜，加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋定容，制成舒必利濃度為1mg/?ml的供試品原液；再將所述供試品原液使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)一步稀釋10倍，制成舒必利濃度為0.1mg/?ml的供試品溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，其特征在于：s3中，精密稱(chēng)取舒必利樣品50mg溶于2ml二氯亞砜，加入濃度為10eu/ml細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液2支混勻，在使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋50倍，制成細(xì)菌內(nèi)毒素濃度為0.1eu/ml的供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，其特征在于：s4中，將二氯亞砜溶于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，制成濃度為4%的溶液；再使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)一步稀釋?zhuān)瞥蓾舛葹?.4%-2%的干擾試驗(yàn)溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，其特征在于：s5中，所述鱟試劑靈敏度為10-0.01eu/ml。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種舒必利細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法，包括如下步驟：依次配制系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液、供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液和干擾試驗(yàn)溶液；將所述系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入鱟試劑，采用動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；再將所述供試品溶液、供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液、干擾試驗(yàn)溶液分別加入鱟試劑，采用動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程計(jì)算舒必利樣品中的細(xì)菌內(nèi)毒素含量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明使用二氯亞砜溶解舒必利樣品，再使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)一步稀釋?zhuān)频霉┰嚻啡芤海山鉀Q舒必利在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水中難溶，不能有效釋放細(xì)菌內(nèi)毒素的問(wèn)題。

技術(shù)研發(fā)人員：王蘭,陳杰,戴維菊,張文寶,張文凱,楊潔,朱笑,劉文麗,林玲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/28