本申請涉及中藥制劑檢測，特別是涉及一種益母草制劑的指紋圖譜的構建方法和應用。

背景技術：

1、益母草，為唇形科植物益母草leonurus?japonicas?houtt.的新鮮或干燥地上部分，鮮品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季莖葉茂盛、花未開或初開時采割，曬干，或切斷曬干；廣泛分布于全國各地。益母草含有硒和錳等多種微量元素，硒具有增強細胞免疫力、提高機體防御功能、緩解動脈硬化的作用，錳能防衰老，抗疲勞，抗氧化，還可以抑制癌細胞增長。同時，益母草有利尿消腫、收縮子宮的作用，是歷代醫家用來治療婦科病的要藥。目前以益母草為原料的制劑主要有益母草注射液、益母草顆粒、益母草膠囊、益母草口服液、益母草片、益母草膏和鮮益母草膠囊，其中，益母草顆粒是臨床上常見的制劑，其有效性和安全性在長期的臨床實踐中得到認可，并且方便攜帶和服用，因此備受青睞。

2、益母草可全草入藥，有效成分為益母草素，益母草含益母草堿、水蘇堿、益母草定、益母草寧等多種生物堿及苯甲酸、氯化鉀等，成分眾多，現有的益母草制劑的指紋圖譜并不能全面反映益母草制劑的內在質量。因此，需要建立能表征其主要化學成分的益母草制劑的指紋圖譜，可為益母草制劑的質量控制提供較為全面、有效的評價，進而確保其用藥安全。

技術實現思路

1、基于此，本申請的目的包括提供一種益母草制劑的指紋圖譜的構建方法和應用。

2、本申請的技術方案如下：

3、本發明的一個方面，提供一種益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟：

4、使用提取溶劑對益母草制劑進行提取，制備供試品溶液；

5、對所述供試品溶液進行高效液相色譜檢測，構建益母草制劑的指紋圖譜；

6、所述高效液相色譜檢測的條件包括：流動相a為甲酸水溶液，流動相b為乙腈，采用梯度洗脫。

7、在其中一個實施例中，所述梯度洗脫的程序包括：

8、0~20min，所述流動相b的體積百分比由2%上升至5%；

9、20min~30min，所述流動相b的體積百分比由5%上升至12%；

10、30min~56min，所述流動相b的體積百分比由12%上升至21%；

11、56min~65min，所述流動相b的體積百分比由21%上升至26%。

12、在其中一個實施例中，所述甲酸水溶液中，甲酸的體積百分比為0.1%~0.3%。

13、在其中一個實施例中，所述高效液相色譜檢測滿足如下條件中的至少一個：

14、（1）檢測波長為250nm~350nm；

15、（2）流速為0.5ml/min~2ml/min；

16、（3）進樣量為0.5μl~5μl；

17、（4）柱溫為25℃~35℃。

18、在其中一個實施例中，提取步驟滿足如下條件中的至少一個：

19、（1）提取的方式為超聲提取或回流提取；

20、（2）提取的時間為15min~60min；

21、（3）提取溶劑包括甲醇或甲醇水溶液。

22、在其中一個實施例中，所述甲醇水溶液中，甲醇的體積百分比為25%~75%。

23、在其中一個實施例中，所述益母草制劑的指紋圖譜的構建方法還包括如下步驟：

24、使用溶解試劑將對照品溶解，制備對照品溶液；

25、對所述對照品溶液進行高效液相色譜檢測，獲得對照圖譜；

26、根據所述對照圖譜對所述益母草制劑的指紋圖譜的色譜峰進行共有峰指認；

27、其中，所述對照品包括阿魏酸、鹽酸益母草堿、鹽酸水蘇堿蘆丁、槲皮素和金絲桃苷中的一種或多種。

28、在其中一個實施例中，所述益母草制劑的指紋圖譜包含15個共有峰，其中，指認的2個特征峰包括：9號峰為鹽酸益母草堿，13號峰為阿魏酸。

29、在其中一個實施例中，所述益母草制劑包括益母草顆粒、益母草膠囊或益母草片。

30、本發明的又一方面，提供如上所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法在益母草制劑的質量控制中的應用。

31、與現有技術相比較，本申請具有如下有益效果：

32、本申請根據益母草制劑中所含有成分的特點，通過對益母草制劑采用特定的高效液相色譜條件進行檢測分析，構建了含有多個特征峰的益母草制劑的指紋圖譜，所述益母草制劑的指紋圖譜的構建方法簡便、可靠、客觀性強，且精密度、重復性、專屬性和穩定性良好。

33、進一步地，所述益母草制劑的指紋圖譜各特征峰分離度較好，包含15個共有峰，能較全面地反映益母草制劑的主要化學成分特征，且指認阿魏酸和鹽酸益母草堿等2個特征峰；且不同批次益母草制劑的檢測結果相似度較高，生成的對照指紋圖譜可作為益母草制劑的物質基礎的總體相似度評價使用，可為益母草制劑的質量標準提供整體質控依據。

技術特征：

1.一種益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述梯度洗脫的程序包括：

3.根據權利要求1所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述甲酸水溶液中，甲酸的體積百分比為0.1%~0.3%。

4.根據權利要求1所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測滿足如下條件中的至少一個：

5.根據權利要求1所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，提取步驟滿足如下條件中的至少一個：

6.根據權利要求5所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述甲醇水溶液中，甲醇的體積百分比為25%~75%。

7.根據權利要求1所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述益母草制劑的指紋圖譜的構建方法還包括如下步驟：

8.根據權利要求1~7任一項所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述益母草制劑的指紋圖譜包含15個共有峰，其中，指認的2個特征峰包括：9號峰為鹽酸益母草堿，13號峰為阿魏酸。

9.根據權利要求1~7任一項所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述益母草制劑包括益母草顆粒、益母草膠囊或益母草片。

10.權利要求1~9任一項所述的益母草制劑的指紋圖譜的構建方法在益母草制劑的質量控制中的應用。

技術總結
本發明涉及一種益母草制劑的指紋圖譜的構建方法和應用，該方法包括以下步驟：使用提取溶劑對益母草制劑進行提取，制備供試品溶液；對所述供試品溶液進行高效液相色譜檢測，構建益母草制劑的指紋圖譜；所述高效液相色譜檢測的條件包括：流動相A為甲酸水溶液，流動相B為乙腈，采用梯度洗脫。本發明根據益母草制劑中所含有成分的特點，構建了含有多個特征峰的益母草制劑的指紋圖譜，所述益母草制劑的指紋圖譜的構建方法簡便、可靠、客觀性強，且精密度、重復性、專屬性和穩定性良好。進一步地，所述益母草制劑的指紋圖譜各特征峰分離度較好，能較全面地反映益母草制劑的主要化學成分特征，可為益母草制劑的質量標準提供整體質控依據。

技術研發人員：黃德歡,莫慧貞,楊銀鳳,吳俊偉
受保護的技術使用者：廣州諾金制藥有限公司
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28