專利名稱：一種香椿樹無性系組培苗高效培養(yǎng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物組培苗快速培養(yǎng)繁殖技術(shù)，具體是提供一種香椿樹無性系組培苗組織培養(yǎng)繁殖獲得大量香椿苗木的方法。
背景技術(shù)：
香椿，又名香椿芽、香椿頭等，原產(chǎn)于中國，生長于東亞與東南亞地區(qū)，北從北朝鮮南至泰國、印尼等地，很耐干旱、瘠薄、不耐水濕，能耐中度鹽堿土，在中性、酸性、鈣質(zhì)土均生長良好。樹長可至25米高，樹干直徑可達(dá)70厘米，其羽狀復(fù)葉約為50-70厘米長、30-40 厘米寬，葉片約為9-15厘米長、2. 5-4厘米寬，10-11月果實成熟，種子橢圓形，上有木質(zhì)長翅，種粒小，發(fā)芽率低。香椿的葉片有獨特濃厚的味道，嫩葉可以食用，干燥后磨成細(xì)粉，素食者時常拿來當(dāng)調(diào)味料。嫩芽食用，木材紋理細(xì)，是高檔家具、造船和建筑材料，木屑及根可提芳香油，國外用作雪茄煙的賦香劑；種子可榨油，含油量38. 5%;根皮及果入藥，有收斂止血去濕止痛的功效。樹皮含川楝素，圖醇，鞣質(zhì)；葉含胡蘿卜烴，維生素B，維生素C。香椿全身都是寶，具有重要的經(jīng)濟價值和社會效益。發(fā)展香椿種植有利于增加用材林、提高椿芽的產(chǎn)量，降低供需矛盾，提供人民的生活水平具有重大意義。目前生產(chǎn)香椿苗的方法為采用的根蘗育苗和枝條扦插育苗，其方法簡便易行，管理也比較容易，但繁殖系數(shù)小，難以迅速大量提供種苗；種子繁殖培育，種粒小，發(fā)芽率低， 也不能滿足大量種植的需要；組織培養(yǎng)，研究較少，在實際生產(chǎn)中還未真正投入使用，因而迫切需要研究香椿樹優(yōu)良無性系高效組培技術(shù)。組織培養(yǎng)技術(shù)具有繁殖速度快、方法簡單，不受季節(jié)限制，同時子代能夠獲得母本的優(yōu)良遺傳特性，并獲得脫毒苗的特點。因此，研究香椿組織培養(yǎng)技術(shù)，并應(yīng)用到實際生產(chǎn)過程中對緩解香椿苗木緊張、推動山區(qū)經(jīng)濟和提高山區(qū)人民的生活水平意義重大。周玉玲等的紅香椿組織培養(yǎng)和快速繁殖研究以“紅香椿一號”的莖段為外植體進行植物組織培養(yǎng)，采用四因素三水平正交設(shè)計法試驗篩選出生根、誘芽的適宜培養(yǎng)基， 以不同培養(yǎng)基的生根數(shù)為鑒定指標(biāo)，篩選出適宜紅香椿一號莖分化苗生根的培養(yǎng)基，以不同培養(yǎng)基的增芽數(shù)為鑒定指標(biāo)，篩選出適宜紅香椿一號莖分化叢生芽的培養(yǎng)基，進而掌握不同生長素之間的適宜配比。通過試驗研究表明在9個培養(yǎng)基中生根最佳的培養(yǎng)基是(MS+6-BA0. lmg/L+NAAl. Omg/L+IBAl. 0mg/L+ZT0. 2mg/L);增殖適宜的培養(yǎng)基是 (MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L+IBA0. lmg/L+ZT0. lmg/L)。中國專利申請?zhí)?00910064257. 2，香椿組培快繁技術(shù)及培養(yǎng)基的配比。是從正在生長的植株中，剪取當(dāng)年生半木質(zhì)化腋芽飽滿的枝條，經(jīng)殺菌、消毒，剪成含有1-2個腋芽的莖段，快速接種到分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進行分化培養(yǎng)；再利用分化培養(yǎng)出的植株，放入增殖培養(yǎng)基中進行增殖快繁；擴繁到一定數(shù)量時，放入生根培養(yǎng)基中進行壯苗生根培養(yǎng)，壯苗生根后，轉(zhuǎn)入練苗移載。目前，香椿樹的組織培養(yǎng)，未能完全解決組織培養(yǎng)中的褐變、脫毒、生根難、多次繼代增殖容易退化和香椿幼苗移栽成活率低等問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的針對現(xiàn)有技術(shù)褐變、脫毒、生根難等問題，提供了一種生根率高、根系質(zhì)量好、生根成本低的香椿組培苗高效培養(yǎng)技術(shù)。本發(fā)明提供的香椿無性系組培苗高效生根方法，包括初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)過程，其中初代培養(yǎng)基的篩選及激素配比選取當(dāng)年生新稍，取頂端1-3厘米進行消毒處理， 然后進行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)基為 WPM+BAl—3mg/L+IBA0. I—lmg/L+NAAl-2mg/L ；繼代培養(yǎng)基的篩選及激素配比將獲得的無菌苗轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基上進行增殖， 培養(yǎng)基為 WPM+BA2—5mg/L+IBA0. I—3mg/L+ZT0. 05-lmg/L ；壯苗培養(yǎng)基的篩選及激素配比對增殖過程中獲得的無菌苗進行壯苗，采用 WPM+IBAO. l-3mg/L+NAA0. 5_3mg/L進行壯苗，待組培苗長到2_4厘米后進行生根誘導(dǎo)；生根材料的激素預(yù)處理將組培苗的基部在1000 4000ppm的IBA溶液中浸泡 5-10 秒；生根培養(yǎng)基的篩選將經(jīng)過預(yù)處理的組培苗接種在(1/2-1)MS+AC200-600的培養(yǎng)基上，25-30天后，組培苗生根形成完整植株。采用本發(fā)明提供的繼代培養(yǎng)基，使增殖周期縮短至30-35天，增值系數(shù)達(dá)5. I
9.2.。經(jīng)過壯苗培養(yǎng)基、激素預(yù)處理及生根培養(yǎng)基后，生根率達(dá)100%以上，移栽成活率 90%以上。
具體實施例方式實施例I從香椿健壯植株上剪取當(dāng)年生新稍，取頂端1-3厘米進行消毒處理，放入 WPM+BAlmg/L+IBAO. lmg/L+NAAlmg/L進行初代培養(yǎng)；初代獲得的無菌苗轉(zhuǎn)移到WPM+BA2mg/ L+IBAlmg/L+ZTO. 05mg/L繼代培養(yǎng)，增殖周期為40天，增值系數(shù)達(dá)5. 2 ;將增殖過程中獲得的無菌苗采用WPM+IBAO. lmg/L+NAAO. 5mg/L進行壯苗，30天組培苗長至2_4厘米時從培養(yǎng)瓶中取出，將組培苗的基部在IOOOppm的IBA溶液中浸泡10秒，然后接種在1/2MS+AC200 的培養(yǎng)基上，30天后生根率達(dá)100%。生根后，將組培苗移至營養(yǎng)杯中，基質(zhì)為泥炭土 珍珠巖=3 I，一移栽成活率達(dá)92 %。具體操作如下初代培養(yǎng)培養(yǎng)基用300ml的廣口瓶分裝，每瓶30ml，封口膜包扎，在120°C 和I. 5kg/cm2條件下沒用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌20min。培養(yǎng)條件的篩選在培養(yǎng)溫度為 25±2°C，光照1500 2000LX，每日光照時間為12h的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)將獲得的無菌苗轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基上進行增殖，培養(yǎng)基用300ml的廣口瓶分裝，每瓶30ml，封口膜包扎，在120°C和I. 5kg/cm2條件下沒用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌 20min。培養(yǎng)條件的篩選在培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照1500 2000LX，每日光照時間為12h 的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。壯苗培養(yǎng)將增殖獲得的無菌苗轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基上進行壯苗，培養(yǎng)基用300ml 的廣口瓶分裝，每瓶30ml，封口膜包扎，在120°C和I. 5kg/cm2條件下沒用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌20min。
生根材料的激素預(yù)處理將組培苗的基部在IOOOppm的IBA溶液中浸泡10秒，生根培養(yǎng)接種在1/2MS+AC200的培養(yǎng)基上，30天后生根率達(dá)100%。移植將組培苗移至營養(yǎng)杯中，基質(zhì)為泥炭土 珍珠巖按一定比例配制，杯子置于具間歇噴霧設(shè)施的溫室大棚中生根管理，溫度保持20 30°C，噴霧間歇時間10分鐘，噴霧時間10秒，移栽成活率達(dá)92%。實施例2從香椿健壯植株上剪取當(dāng)年生新稍，取頂端1-3厘米進行消毒處理，放入 WPM+BA2mg/L+IBA O. 5mg/L+NAA2mg/L進行初代培養(yǎng)；將初代獲得的無菌苗轉(zhuǎn)移到 WPM+BA5mg/L+IBA3mg/L+ZTlmg/L繼代培養(yǎng)，增殖周期為30天，增值系數(shù)達(dá)9. I ;將增殖過程中獲得的無菌苗采用WPM+IBAO. lmg/L+生物素2mg/L進行壯苗，25天組培苗長至2_4 厘米時從培養(yǎng)瓶中取出，將組培苗的基部在3000ppm的IBA溶液中浸泡5秒，然后接種在 1/2MS+AC600的培養(yǎng)基上，25天后生根率達(dá)95%。生根后，將組培苗移至營養(yǎng)杯中，基質(zhì)為泥炭土 珍珠巖=2 I，一移栽成活率達(dá)91 %。具體操作參見實施例I。實施例3從香椿健壯植株上剪取當(dāng)年生新稍，取頂端1-3厘米進行消毒處理，放入 WPM+BA3mg/L+IBAlmg/L+NAAlmg/L進行初代培養(yǎng)；初代獲得的無菌苗轉(zhuǎn)移到WPM+BA2mg/ L+IBAlmg/L+ZTO. 05mg/L繼代培養(yǎng)，增殖周期為40天，增值系數(shù)達(dá)7. 5 ;將增殖過程中獲得的無菌苗采用WPM+IBAO. lmg/L+NAAO. 5mg/L進行壯苗，30天組培苗長至2_4厘米時從培養(yǎng)瓶中取出，將組培苗的基部在IOOOppm的IBA溶液中浸泡10秒，然后接種在1/2MS+AC200 的培養(yǎng)基上，30天后生根率達(dá)100%。生根后，將組培苗移至營養(yǎng)杯中，基質(zhì)為泥炭土 珍珠巖=3 I，一移栽成活率達(dá)93 %。具體操作參見實施例I。
權(quán)利要求
1.香椿無性系組培苗高效生根方法，包括初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)步驟(1)初代培養(yǎng)基的篩選及激素配比選取當(dāng)年生新稍，取頂端1-3厘米進行消毒處理， 然后進行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)基為 WPM+BAl—3mg/L+IBA0. I—lmg/L+NAAl-2mg/L ；(2)繼代培養(yǎng)基的篩選及激素配比將獲得的無菌苗轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基上進行增殖， 培養(yǎng)基為 WPM+BA2—5mg/L+IBA0. I—3mg/L+ZT0. 05-lmg/L ；(3)壯苗培養(yǎng)基的篩選及激素配比對增殖過程中獲得的無菌苗進行壯苗，采用 WPM+IBAO. l-3mg/L+NAA0. 5_3mg/L進行壯苗，待組培苗長到2_4厘米后進行生根誘導(dǎo)；(4)生根材料的激素預(yù)處理將組培苗的基部在1000 4000ppm的IBA溶液中浸泡 5-10 秒；(5)生根培養(yǎng)基的篩選將經(jīng)過預(yù)處理的組培苗接種在(1/2-1)MS+AC200-600的培養(yǎng)基上，25-30天后，組培苗生根形成完整植株。
全文摘要
一種香椿樹無性系組培苗高效培養(yǎng)的方法。本發(fā)明公開了提供了一種通過組織培養(yǎng)快速繁殖獲得大量生根的香椿樹無性系完整植株的技術(shù)，包括繼代培養(yǎng)基的篩選及激素配比、壯苗培養(yǎng)基的篩選及激素配比、生根預(yù)處理、生根培養(yǎng)基的篩選及激素配比的過程。其中初代培養(yǎng)基采用WPM+BA1--3mg/L+IBA0.1--1mg/L+NAA1-2mg/L；繼代培養(yǎng)基采用WPM+BA2--5mg/L+IBA0.1--3mg/L+ZT0.05-1mg/L進行增殖，增殖周期縮短至30-40天，增殖系數(shù)達(dá)4.2-9.1；采用WPM+IBA0.1-3mg/L+NAA0.5-3mg/L進行壯苗，20-25d苗木即可用于生根；將2-4厘米高德組培苗在用IBA處理后，直接接種在(1/2-1)MS+AC200-600的培養(yǎng)基上，25-30天后，組培苗生根形成完整植株，生根率達(dá)90％以上。
文檔編號A01H4/00GK102577944SQ20111043106
公開日2012年7月18日 申請日期2011年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月21日
發(fā)明者關(guān)健敏, 羅亞東 申請人:廣西金宏昕生物科技有限公司