專利名稱：一種具有抑制輪紋病菌活性的生物活性物質及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物農藥領域，具體地，本發明涉及ー種具抑制輪紋病菌活性的生物活性物質及其應用。
背景技術：
我國的蘋果種植面積很大,輪紋病菌(Botryosphaeria dothidea)引起的蘋果輪紋病是危害蘋果生產的ー種最為嚴重的病害之一，且難以防治，目前仍以化學防治為主。蘋果輪紋病在我國主要蘋果產區都有發生，嚴重時可對果園造成毀滅性破壞，給蘋果產業造成重大損失。蘋果的整個生長期均可被輪紋病菌侵染。輪紋病菌還危害蘋果樹的樹體，奪取樹體營養，分泌毒素毒害果樹，減弱蘋果樹勢，影響樹體正常生長，嚴重的造成枝干枯死，甚至導致整樹死亡。不僅如此，患輪紋病的枝干將成為產生再次侵染新生蘋果枝條和蘋果果實的菌源，導致輪紋病危害的再次發生。輪紋病菌對蘋果果實的危害也很大，蘋果果實從 接近成熟開始發病，儲藏期繼續發病，造成大量爛果，導致嚴重的直接經濟損失。據專家報道我國毎年因輪紋病危害造成的直接經濟損失就達30億到50億元人民幣。輪紋病菌除危害蘋果外，還能危害梨、桃、李、杏、葡萄、栗樹、海棠、山楂等果樹，為上述果品生產的重大威脅。輪紋病近年有蔓延加重趨勢，2006年首次報道輪紋病菌能夠引起bark dieback of European hop hornbean ;2010年首次報道輪紋病菌能夠感染SweetOsmanthus Leaf Dieback。一直以來，蘋果輪紋病都以化學防治為主。由于蘋果的整個生長期均可被輪紋病菌侵染，因此需要頻繁的施藥。因為長期連續用藥，輪紋病菌已經產生了明顯的抗藥性，使輪紋病的發生越來越重。現在的輪紋病菌已經對常用的多種殺菌劑產生了不同程度的抗藥性或耐藥性，例如甲基托布津、代森錳鋅、炭疽福美、大生M-45等藥劑對輪紋病的防治效果均已顯著下降了。長期連續用藥，不僅引起病菌抗藥性，同時可造成果實中農藥的殘留和生態環境的污染。化學農藥對農產品的污染問題已經成為我國農產品質量安全的絆腳石。我們必須清醒地認識到該問題的嚴重性，切實保障農產品質量安全和環境生態安全。所以亟待研制開發生物藥劑。

發明內容
本發明從傘形科植物獨活(Angelica pubescens Maxim, f. biserrata)的干燥根中提取純化了生物活性物質。本發明的目的是提供ー種具有抑制輪紋病菌活性的生物活性物質。本發明的再一目的是提供上述生物活性物質的應用。本發明的再一目的是提供ー種生物農藥。根據本發明的具有抑制輪紋病菌活性的生物活性物質，通過包括以下步驟的方法制備
I)稱取獨活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脫脂I小時；2)然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小時，回收至干；3)用水轉移出提取物，萃取得干膏。根據本發明的生物 活性物質，其中，在步驟2)中，こ醇回流三次，過濾，合并濾液。根據本發明的生物活性物質，其中，在步驟3)中，加氯仿萃取兩次，回收氯仿，得干膏。根據本發明的生物農藥，其中，包含通過以下步驟制備的具有抑制輪紋病菌活性的生物活性物質I)稱取獨活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脫脂I小時；2)然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小時，回收至干；3)用水轉移出提取物，萃取得干膏。根據本發明的具體實施方式
，生物活性物質的提取純化過程如下稱取獨活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脫脂I小時，然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小時，共三次，過濾，合并濾液，回收至干。用水轉移出堤取物，加氯仿萃取兩次，回收氯仿，得干膏。根據以上所述的蘋果輪紋病菌的危害特點，應用來源于天然中藥材，對人、畜安全，不污染環境的生物藥劑防治更有其突出的優勢。因此本發明的具抑制輪紋病菌活性的生物活性物質具有重要的經濟效益和生態效益的雙重意義。


圖I顯示了本發明的生物活性物質對蘋果輪紋病菌室內毒力測定結果。
具體實施例方式實施例I提取生物活性物質稱取獨活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脫脂I小時，然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小時，共三次，過濾，合并濾液，回收至干。用水轉移出堤取物，加氯仿萃取兩次，回收氯仿，得干膏。實施例2生物活性物質抗輪紋病菌活性檢測經山東煙臺農業科學研究院植物保護研究所(農業部認證的國內外農藥登記田間藥效試驗承擔単位)專家鑒定，上述生物活性物質對蘋果輪紋病菌具有抑制作用。試驗結果如下表I結果表明，生物活性物質對蘋果輪紋病菌菌絲生長具有一定的抑制作用，其500 μ g · ml/1實測抑制生長率達87%以上；最小二乗法統計結果表明，生物活性物質對蘋果輪紋病菌毒カ回歸方程為y = 4. 1687+0. 6748x，EC50和EC9tl值分別為17. 0536yg*mr\1344. 4308 μ g · mじ1。表ISC對蘋果輪紋病菌菌絲生長毒カ
權利要求
1.一種具有抑制輪紋病菌活性的生物活性物質，其特征在于，所述生物活性物質通過包括以下步驟的方法制備 1)稱取獨活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小時，45°C回流脫脂I小時； 2)然后用7-10倍量的75%乙醇回流1-2小時，回收至干； 3)用水轉移出提取物，萃取得干膏。
2.根據權利要求I所述的生物活性物質，其特征在于，在步驟2)中，乙醇回流三次，過濾，合并濾液。
3.根據權利要求I所述的生物活性物質，其特征在于，在步驟3)中，加氯仿萃取兩次，回收氯仿，得干膏。
4.權利要求I所述活性物質的應用。
5.一種生物農藥，其特征在于，包含通過以下步驟制備的具有抑制輪紋病菌活性的生物活性物質 1)稱取獨活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小時，45°C回流脫脂I小時； 2)然后用7-10倍量的75%乙醇回流1-2小時，回收至干； 3)用水轉移出提取物，萃取得干膏。
全文摘要
本發明涉及生物農藥領域，具體地，本發明涉及一種具抑制輪紋病菌活性的生物活性物質及其應用。根據本發明的具有抑制輪紋病菌活性的生物活性物質，通過包括以下步驟的方法制備1)稱取獨活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡1小時，45℃回流脫脂1小時；2)然后用7-10倍量的75％乙醇回流1-2小時，回收至干；3)用水轉移出提取物，萃取得干膏。根據本發明的生物活性物質，其中，在步驟2)中，乙醇回流三次，過濾，合并濾液。本發明的具抑制輪紋病菌活性的生物活性物質具有重要的經濟效益和生態效益的雙重意義。
文檔編號A01P3/00GK102657240SQ20121011898
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月21日 優先權日2012年4月21日
發明者王英姿, 都曉偉, 黃其滿 申請人:中國農業科學院生物技術研究所, 黃其滿