納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，它包括三大步驟，液體菌液的培養、固體基料的配制、固體基料與液體菌液的混勻，具體制備步驟為：把固體基料與液體菌液按重量百分比為1：1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養室，恒溫40℃，通風，淺盤發酵36小時，可見淺盤表面和內層均長滿白色菌體，提高溫度至60℃，加大風量，干燥出料，測得活菌濃度1×109cfu/g，粉碎分裝，即得產品。本發明的制備工藝簡單并易于控制，不易染雜菌，菌株濃度高，后加工成本低，生產環境友好。
【專利說明】納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明屬于，具體涉及一種納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法。
[0003]
【背景技術】
[0004]微生態產品具有無毒、無副作用，無殘留、無污染，不產生抗藥性，成本較低等特點，是理想的抗生素替代品。當前代表先進水平的微生態產品包含了醫藥、生物技術、發酵技術、動物營養、獸醫技術等諸多方面的進步與發展。目前市售的微生態制劑有液態和固態兩種。固態微生態制劑特別是納豆芽胞桿菌和枯草芽孢桿菌的復合固態微生態的制劑方法通常有兩種工藝技術方案，一種是先進性液態深層發酵，最后加入固態載體吸附，干燥而成；而液態發酵培養雖可得到較純菌體，但成本高，發酵易受產物反饋控制，難以得到高濃度菌株，所以該方法有效菌數含量較低；另一種是常規固態發酵的模式；但現有的這些技術工藝方法普遍存在著工藝步驟復雜，制備成本高，產品收率低、雜菌含量高等缺點。
[0005]

【發明內容】

[0006]為了克服現有【技術領域】存在的上述問題，本發明的目的在于，提供一種納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，解決目前的納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法制備成本高，產品收率低、雜菌含量高的問題。
[0007]本發明提供的納豆芽孢桿菌`和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，它包括三大步驟:液體菌液的培養、固體基料的配制、固體基料與液體菌液的混勻。
[0008]所述的液體菌液的培養包括以下具體步驟:
一、平板培養:納豆芽孢桿菌和酵母菌保存菌種劃線接種至平板培養基，其培養基配料為葡萄糖IOg,蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,硫酸猛5mg,瓊脂15g,蒸懼水1000ml,PH值為 7，121°C滅菌，32°C培養 30h ；
二、試管接種:取發育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，其培養基配料為葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，硫酸錳5mg，蒸餾水1000ml，PH值為7，121°C滅菌，35°C培養24h ；
三、分別用三角瓶接種100ml，其培養基同步驟二，121°C滅菌，35°C培養24h；
四、分別用三角瓶接種1000ml，其培養基同步驟三；
五、用IOL種子發酵罐培養，培養液為7L，培養基同步驟三，PH值為7，121°C滅菌30分鐘，培養溫度為37°C,轉速150r/min,通氣量2vvm,指每分鐘通入單位發酵體積m3的空氣體積m3,培養18h,再厭氧培養18h。[0009]六、用100L種子發酵罐培養，培養液為100L，培養基按豆柏粉lg，魚粉lg，120目的玉米粉0.5g,葡萄糖2g,氯化鈉0.2g,硫酸猛0.3g，增效劑0.1g,水1000ml的比例配制，按步驟五的方法培養，所選增效劑為硫酸錳、硫酸鋅、硫酸鐵和硫酸銅按等量配比而成；
七、1000L發酵罐，培養基分別以步驟六中100L種子發酵罐的配比乘以七倍，發酵方法同步驟五，培養24h。
[0010]所述固體基料按以下成分配制:花生殼或棉籽殼500kg，玉米粉150kg，豆柏粉200kg,麩皮100kg,葡萄糖5kg,總重量為1000kg,攪拌混勻后加200kg水潤濕后蒸煮滅菌，待冷卻至35°C時，加入液體菌液的培養的步驟七中的發酵液700kg。
[0011]所述固體基料與液體菌液的混勻具體制備步驟為:把固體基料與液體菌液按重量百分比為1:1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養室，恒溫40°C，通風，淺盤發酵36小時，可見淺盤表面和內層均長滿白色菌體，提高溫度至60°C，加大風量，干燥出料，測得活菌濃度IX 109cfu/g，粉碎分裝，即得產品。
[0012]本發明提供的納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，其有益效果在于，本發明的制備工藝簡單并易于控制，不易染雜菌，菌株濃度高，后加工成本低，生產環境友好；納豆芽孢桿菌是好氧菌，酵母菌是兼性菌，兩者均可在好氧條件下生長，又可在厭氧條件下產生有益次級代謝產物，如乳酸、抗菌肽等，所以微生態產品不僅能有效補充畜禽消化道內的有益微生物，改善消化道菌群平衡、而且其次級代謝產物能增強機體抗病性、提高代謝以及飼料的吸收利用，從而達到防治消化道疾病和促進生長等多重作用。
[0013]
【具體實施方式】
[0014]下面結合實施例，對本發明提供的納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，進行詳細的說明。
實施例
[0015]本實施例的納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，它包括三大步驟:液體菌液的培養、固體基料的配制、固體基料與液體菌液的混勻。
[0016]所述的液體菌液的培養包括以下具體步驟:
一、平板培養:納豆芽孢桿菌和酵母菌保存菌種劃線接種至平板培養基，其培養基配料為葡萄糖IOg,蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,硫酸猛5mg,瓊脂15g,蒸懼水1000ml,PH值為 7，121°C滅菌，32°C培養 30h ；
二、試管接種:取發育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，其培養基配料為葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，硫酸錳5mg，蒸餾水1000ml，PH值為7，121°C滅菌，35°C培養24h ；
三、分別用三角瓶接種100ml，其培養基同步驟二，121°C滅菌，35°C培養24h；
四、分別用三角瓶接種1000ml，其培養基同步驟三；
五、用IOL種子發酵罐培養，培養液為7L，培養基同步驟三，PH值為7，121°C滅菌30分鐘，培養溫度為37°C,轉速150r/min,通氣量2vvm,指每分鐘通入單位發酵體積m3的空氣體積m3,培養18h,再厭氧培養18h。[0017]六、用100L種子發酵罐培養，培養液為100L，培養基按豆柏粉lg，魚粉lg，120目的玉米粉0.5g,葡萄糖2g,氯化鈉0.2g,硫酸猛0.3g，增效劑0.1g,水1000ml的比例配制，按步驟五的方法培養，所選增效劑為硫酸錳、硫酸鋅、硫酸鐵和硫酸銅按等量配比而成；
七、1000L發酵罐，培養基分別以步驟六中100L種子發酵罐的配比乘以七倍，發酵方法同步驟五，培養24h。
[0018]所述固體基料按以下成分配制:花生殼或棉籽殼500kg，玉米粉150kg，豆柏粉200kg,麩皮100kg,葡萄糖5kg,總重量為1000kg,攪拌混勻后加200kg水潤濕后蒸煮滅菌，待冷卻至35°C時，加入液體菌液的培養的步驟七中的發酵液700kg。
[0019]所述固體基料與液體 菌液的混勻具體制備步驟為:把固體基料與液體菌液按重量百分比為1:1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養室，恒溫40°C，通風，淺盤發酵36小時，可見淺盤表面和內層均長滿白色菌體，提高溫度至60°C，加大風量，干燥出料，測得活菌濃度1X 109cfu/g，粉碎分裝，即得產品。
【權利要求】
1.一種納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，其特征在于:它包括三大步驟，一、液體菌液的培養，二、固體基料的配制，三、固體基料與液體菌液的混勻；所述固體基料與液體菌液的混勻方法如下:把固體基料與液體菌液按重量百分比為1:1的比例混合，攪拌均勻后裝盤，入無菌培養室，恒溫40°c，通風，淺盤發酵36小時，可見淺盤表面和內層均長滿白色菌體，提高溫度至60°C，加大風量，干燥出料，測得活菌濃度I X 109cfu/g,粉碎分裝，即得產品。
2.根據權利要求1所述的納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，其特征在于:所述的液體菌液的培養包括以下具體步驟: (一)平板培養:納豆芽孢桿菌和酵母菌保存菌種劃線接種至平板培養基，其培養基配料為葡萄糖IOg,蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,硫酸猛5mg,瓊脂15g,蒸懼水1000ml,PH值為7，121°C滅菌，32°C培養30h ； (二)試管接種:取發育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，其培養基配料為葡萄糖10g，蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，硫酸錳5mg，蒸餾水1000ml，PH值為7，121°C滅菌，35°C培養24h ； (三)分別用三角瓶接種100ml，其培養基同步驟二，121°C滅菌，35°C培養24h； (四)分別用三角瓶接種1000ml，其培養基同步驟三； (五)用IOL種子發酵罐培養，培養液為7L，培養基同步驟三，PH值為7，121°C滅菌30分鐘，培養溫度為37°C，轉速150r/min，通氣量2vvm，指每分鐘通入單位發酵體積m3的空氣體積m3,培養18h,再厭氧培養18h ； (六)用100L種子發酵罐培養，培養液為100L，培養基按豆柏粉lg，魚粉lg，120目的玉米粉0.5g,葡萄糖2g,氯 化鈉0.2g,硫酸猛0.3g，增效劑0.1g,水1000ml的比例配制,按步驟五的方法培養，所選增效劑為硫酸錳、硫酸鋅、硫酸鐵和硫酸銅按等量配比而成； (七)1000L發酵罐，培養基分別以步驟六中100L種子發酵罐的配比乘以七倍，發酵方法同步驟五，培養24h。
3.根據權利要求1所述的納豆芽孢桿菌和酵母菌培養固態微生態制劑的制備方法，其特征在于:所述固體基料按以下成分配制:花生殼或棉籽殼500kg，玉米粉150kg，豆柏粉200kg,麩皮100kg,葡萄糖5kg,總重量為1000kg,攪拌混勻后加200kg水潤濕后蒸煮滅菌，待冷卻至35°C時，加入液體菌 液的培養的步驟七中的發酵液700kg。
【文檔編號】A23K1/16GK103881935SQ201210555795
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月20日 優先權日:2012年12月20日
【發明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權汗, 李之詳, 許團輝 申請人:青島中仁藥業有限公司