海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用、培養基及方法
【專利摘要】本發明公開了一種延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，發明人通過在液體培養基中添加海藻糖延長了糙皮側耳菌種貯藏壽命。該方法包括液體培養基的配制→接種→菌絲培養→離心→再懸浮→短期培養→再離心→常溫貯藏→使用前常溫下活化菌種→接種于原種或栽培養種等步驟。本發明涉及到三種培養基，培養基A用于菌絲培養，培養基B用于菌絲貯藏，培養基C用于菌種使用前的活化。本發明實現了常溫貯藏糙皮側耳，具有占用空間小、節約電能、節約了續代接種的材料與勞動力、貨架壽命長和運輸方便等優點。
【專利說明】海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用、培養基及方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于食用菌貯藏領域，尤其涉及一種海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用、 培養基及方法。
【背景技術】
[0002]糙皮側耳(Pleurotus ostreatus)又稱平燕,是世界上第三大人工栽培的食用菌。糙皮側耳肉質肥嫩，營養豐富，每100克干品中含蛋白質30.5克、脂肪3.7克、纖維5.3克，含氨基酸達18種之多，其中有8種是人體所必需的，并含有維生素B、C、D及鐵、磷、鉀、鑰、鋅、鈣等多種礦物質。平菇不僅營養豐富，且有較高的藥用價值，經常食用有改善人體新陳代謝、增強人體體質和調節神經系統的功能。目前糙皮側耳菌種的貯藏方式主要以固體為主，其不足之處在于:需4-10°C低溫冷藏，1-2個月內需續代一次，固體菌種通常是玻璃試管，運輸不方便。
[0003]海藻糖(Trehalose)是一種安全、可靠的天然糖類。近年科學研究發現，海藻糖對生物體具有神奇的保護作用，它在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環境條件下在細胞表面能形成獨特的保護膜，有效地保護蛋白質分子不變性失活，從而維持生命體的生命過程和生物特征。海藻糖獨特的功能特性使其除了可以作為天然食用甜味糖外，還作為優良活性保護劑在蛋白質藥物、酶、疫苗和其他生物制品上有較多的應用。

【發明內容】

[0004]本發明要解決的技術問題是提供一種海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用、培養基及方法，以實現常溫貯藏糙皮側耳菌種，減少菌種保存過程中的繼代次數，方便運輸和燕農使用及學校教學科研。
[0005]為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案:海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用。
[0006]延長糙皮側耳菌種忙藏壽命的培養基A用于菌絲培養,每IOOOml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、蔗糖20g、海藻糖10g，其余為水。
[0007]培養基A按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。
[0008]延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基B用于菌絲貯藏，每1000ml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖30g，其余為水。
[0009]培養基B按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。[0010]延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基C用于菌種使用前的活化，每IOOOml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖10g、鹿糖15g、麥芽糖5g，其余為水。
[0011]培養基C按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。
[0012]延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，包括以下步驟:
[0013](I)將培養基A分裝于250ml三角瓶，每瓶培養液100ml，120°C滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至室溫，接入大約0.5cmX0.5cmX0.5cm大小的固體母種，28°C室溫下震蕩培養，搖床搖速60次/分，培養時間120小時(5天)；
[0014](2)將步驟(I)得到的培養物在4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，用培養基B再懸浮菌絲體，再懸浮液體積為原培養液體積的1/3 (約33ml)，搖床震蕩培養6小時，然后4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，獲得的菌絲體沉淀物；
[0015](3)將步驟(2)得到的菌絲體沉淀物平均分為5份，轉移至無菌的聚丙烯塑料試管內，在低于30°C的室溫下貯藏待用。
[0016]上述延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，還包括以下步驟:
[0017](4)菌種使用之前，將步驟(3)得到的I份貯藏菌種加滅過菌的培養液ClOOml，常溫下震蕩培養4小時，然后根據需要，接種于原種或栽培種上。
[0018]針對現有糙皮側耳低溫貯藏要求高、續代次數多、運輸不便等問題，發明人結合液體培養基中添加海藻糖可延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的研究成果，據此配制了相應的培養基，并建立了延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，實現了其常溫貯藏。與現有的固體菌種低溫貯藏技術相比，本發明具有 以下突出優點:
[0019](I)占用空間小
[0020]傳統固體菌種多用18mmX 180mm玻璃試管，占用空間較大，經本發明獲得的菌絲經過離體，可以貯藏于5ml體積的塑料容器中，節省了菌種的存放空間；
[0021](2)節約電能
[0022]傳統固體菌種需在4-10°C下低溫貯藏，使用者需配置有冰箱，本發明屬常溫貯藏，省去了設備成本也節約了電能；
[0023](3)節約了續代接種的材料與勞動力
[0024]傳統固體菌種需1-2個月繼代一次(通常I個月一次，2個月是最大極限)，而本發明無此環節，既降低了菌種成本，也方便了使用者；
[0025](4)貨架壽命長，運輸方便
[0026]應用本發明，室溫下放置6個月內菌絲始終具有生長活力，塑料品包裝運輸使用均十分方便。
【具體實施方式】
[0027]實施例1
[0028](I)培養基配制
[0029]培養基A用于菌絲培養，每IOOOml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、蔗糖20g、海藻糖10g，其余為水。培養基A按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。
[0030]培養基B用于菌絲貯藏，每IOOOml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖30g，其余為水。培養基B以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。
[0031]培養基C用于菌種使用前的活化，每IOOOml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖10g、蔗糖15g、麥芽糖5g，其余為水。培養基C按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至 7.0。
[0032](2)將培養基A分裝于250ml三角瓶，每瓶培養液100ml，120°C滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至室溫，接入大約0.5cmX0.5cmX0.5cm大小的固體母種，28°C室溫下震蕩培養，搖床搖速60次/分，培養時間120小時(5天)；
[0033](3)將步驟(2)得到的培養物在4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，用培養基B再懸浮菌絲體，再懸浮液體積為原培養液體積的1/3 (約33ml)，搖床震蕩培養6小時，然后4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，獲得的菌絲體沉淀物；
[0034](4)將步驟(3)得到的菌絲體沉淀物平均分為5份，轉移至無菌的聚丙烯塑料試管內，在低于30°C的室溫下貯藏待用。
[0035]利用實施例1所貯藏的菌種制做原種與栽培種`
[0036]取常溫貯藏5個月的菌種，每份貯藏菌種加滅過菌的培養液ClOOml，常溫下震蕩培養4小時。根據需要(按每份接種原種10份或每份接種栽培種5份)，接種于原種培養瓶(750ml罐頭瓶)，25-28天可長滿菌瓶；或將原種接入栽培種袋中(袋規格20-25cmX 45cm), 25-30天可長滿菌袋。所得到的栽培種按常方法接種入出菇菌袋中(袋規格20-25cmX 45cm)，25-30天左右可長滿菌袋，在15_25°C的溫度下5_10天可形成菇原基，當菇長到成熟期采收。一潮菇生物轉化率39%，二潮菇生物轉化率27%，三潮菇生物轉化率19%，共采收三潮，總生物轉化率85%。
[0037]利用實施例1所貯藏的菌種直接制做栽培種
[0038]取常溫貯藏5個月的菌種，每份貯藏菌種加滅過菌的培養液ClOOml，常溫下震蕩培養4小時。根據需要(按每份接種栽培種5份)，接種于栽培種袋中(袋規格20-25cmX 45cm), 25-30天可長滿菌袋。所得到的栽培種按常方法接種入出菇菌袋中(袋規格20-25cmX 45cm)，25-30天左右可長滿菌袋，在15_25°C的溫度下5_10天可形成菇原基，當菇長到成熟期采收。一潮菇生物轉化率40%，二潮菇生物轉化率28%，三潮菇生物轉化率17%，共采收三潮，總生物轉化率84%。
[0039]實施例2
[0040]將傳統低溫貯藏菌種與本發明菌種的生長、出菇性狀進行比較試驗，結果如下:
[0041](一)兩種貯藏方式的菌種接入原種后對原種菌絲生長的影響
[0042]將傳統固體培養基方式制做，并在低溫下貯藏了不同時間的菌接(CK)，與本發明常溫下貯藏制做的菌種同時接入原種培養基中(原種培養基配方為:棉子殼86%，米糠13%，石膏1%，過磷酸鈣1% ；)中，觀察菌絲生長情況，結果見表I。
[0043]表I兩種貯藏方式的菌種對原種菌絲生長的影響比較
【權利要求】
1.海藻糖在延長糙皮側耳菌種貯藏壽命方面的應用。
2.一種延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基A，其特征在于每IOOOml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、蔗糖20g、海藻糖10g，其余為水。
3.根據權利要求2所述的延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基A，其特征在于按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。
4.一種延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基B，其特征在于每IOOOml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖30g，其余為水。
5.根據權利要求4所述的延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基B，其特征在于按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。
6.一種延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基C，其特征在于每1000ml培養基中含有馬玲薯200g、磷酸二氫鉀2.0g、硫酸鎂1.5g、香蕉膏5.0g、酵母粉0.25g、海藻糖10g、蔗糖15g、麥芽糖5g，其余為水。
7.根據權利要求6所述的延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的培養基C，其特征在于按以下步驟配制:按質量稱取馬玲薯，加適量的水，加熱至沸騰，然后小火保持沸騰10分鐘，過濾去馬玲薯渣，留濾液；將馬玲薯濾液與其他各成份混合，加水定容，PH調至7.0。
8.一種延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將培養基A分裝于250ml三角瓶，每瓶培養液100ml，120°C滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至室溫，接入大約0.5cmX0.5cmX0.5cm大小的固體母種，28°C室溫下震蕩培養，搖床搖速60次/分，培養時間120小時； (2)將步驟(I)得到的培養物在4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，用培養基B再懸浮菌絲體，再懸浮液體積為原培養液體積的1/3，搖床震蕩培養6小時，然后4000轉/分下離心5分鐘，去掉上清液，獲得的菌絲體沉淀物； (3)將步驟(2)得到的菌絲體沉淀物平均分為5份，轉移至無菌的聚丙烯塑料試管內，在低于30°C的室溫下貯藏待用。
9.根據權利要求5所述的延長糙皮側耳菌種貯藏壽命的方法，其特征在于還包括以下步驟: (4)菌種使用之前，將步驟(3)得到的I份貯藏菌種加滅過菌的培養液ClOOml，常溫下震蕩培養4小時，然后根據需要，接種于原種或栽培種上。
【文檔編號】C05G3/00GK103449914SQ201310378524
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月27日 優先權日:2013年8月27日
【發明者】陸榮生, 韓美麗, 廖燕芬, 馬躍峰, 覃建林, 楊玉霞, 馬永林 申請人:廣西壯族自治區農業科學院植物保護研究所, 賓陽縣陽光食用菌種場