一種牡丹褐化愈傷組織恢復的方法
【專利摘要】本發明公開了一種牡丹褐化愈傷組織恢復的方法，采用逐步降低溫度的方法恢復褐化的愈傷組織，同時伴隨控制接種培養基中的激素含量的協同作用，褐化的愈傷組織恢復顯著，用恢復的愈傷組織進行再生植株的誘導，形成的再生植株與正常愈傷組織誘導的植株沒有差別。
【專利說明】一種牡丹褐化愈傷組織恢復的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種牡丹褐化愈傷組織恢復的方法，屬于植物組織培養【技術領域】。
【背景技術】
[0002]牡丹為芍藥科芍藥屬多年生落葉亞灌木，是我國傳統名花，富麗堂皇、國色天香，深受世界人民的喜愛。牡丹繁殖困難，長期以來主要通過嫁接的方式進行繁殖，至今難以實現優質種苗的規模化生產。目前，牡丹組織培養技術逐漸興起，通過誘導牡丹外植體形成愈傷組織再完成再生植株的誘導途徑成為快速有效繁殖牡丹植株的捷徑；然而，目前牡丹組織培養技術還不成熟，愈傷組織的誘導率不高，且形成的愈傷組織中，褐化問題比較明顯。抑制褐化通常在誘導愈傷組織形成的過程中向培養基中加入活性炭等物質抑制褐化發生，對于愈傷組織誘導率比較低且褐化嚴重的牡丹而言，僅僅通過抑制褐化愈傷組織發生是不夠的，如果能夠將褐化的愈傷組織恢復成正常的愈傷組織而加以利用，無異于進一步提高了愈傷組織的誘導率和利用率。

【發明內容】

[0003]本發明的目的是提供一種牡丹褐化愈傷組織恢復的方法，對已經發生褐化的愈傷組織進行恢復，使其恢復到正常組織狀態并可以進一步誘導再生植株的發生。
[0004]本發明是通過下述技術方案實現的:一種牡丹褐化愈傷組織恢復的方法，包括如下步驟:
(O第一次接種:無菌環 境中將褐化的牡丹愈傷組織轉移MS培養基中，于20°C，500-1000Lx 下培養 7d ；
(2)第二次接種:將步驟I中的愈傷組織進行第二次接種，于17°C，全黑暗條件下培養
7d；
(3)第三次接種:將步驟2中的愈傷組織進行第三次接種，于14°C，全黑暗條件下培養
7d；
(4)第四次接種:將步驟3中的愈傷組織進行第四次接種，于10°C，全黑暗條件下培養
7d；
(5)第五次接種:將步驟4中的愈傷組織進行第五次接種，于15°C，全黑暗條件下培養7d。
[0005]優選的，所述步驟1-4所述的接種培養基為MS培養基，培養基中添加40g/L蔗糖和7g/L瓊脂，高壓滅菌冷卻至室溫后待用。
[0006]優選的，所述步驟5中接種培養基為MS培養基，培養基中添加維生素20 g/L蔗糖和7g/L瓊脂，高壓滅菌冷卻至室溫后待用。
[0007]本發明所述的牡丹褐化愈傷組織恢復方法，采用逐步降低溫度的方法恢復褐化的愈傷組織，同時，接種培養基中的不含任何種類和濃度的激素，避免任何抗氧化劑的副作用，褐化的愈傷組織恢復顯著，用恢復的愈傷組織進行再生植株的誘導，形成的再生植株與正常愈傷組織誘導的植株沒有任何差別。
【具體實施方式】
[0008]實施例1:
將褐化的牡丹愈傷組織于無菌環境中轉移MS培養基中，于20°C，500-1000Lx下培養7d ;將上述愈傷組織進行第二次接種，于17°C，全黑暗條件下培養7d ;將上述愈傷組織進行第三次接種，于14°C，全黑暗條件下培養7d ;將上述中的愈傷組織進行第四次接種，于10°C，全黑暗條件下培養7d ;將上述愈傷組織進行第五次接種，于15°C，全黑暗條件下培養7d ;所述步驟1-4所述的接種培養基為MS培養基，培養基中添加40g/L蔗糖和7g/L瓊脂；所述步驟5中接種培養基為MS培養基，培養基中添加20 g/L蔗糖和7g/L瓊脂培養基均高壓滅菌冷卻至室溫后待用。共接種30瓶褐化的愈傷組織，其中28瓶恢復正常，這28瓶愈傷組織與正常愈傷組織誘導的再生植株相似，形成的植株正常無畸形。
[0009]實施例2:
操作步驟與實施例1相同，共接種30瓶褐化的愈傷組織，其中27瓶恢復正常，這27瓶恢復的愈傷組織形成的再生植株，葉片比正常愈傷組織形成再生植株的葉片寬大。
[0010]實施例3:
操作步驟與實施例1相同，共接種30瓶褐化的愈傷組織，其中24瓶恢復正常，這24瓶恢復的愈傷組織形成的再生植株，株高比正常愈傷組織形成再生植株的矮l_3cm。
[0011]實施例4: 操作步驟與實施例1相同，共接種30瓶褐化的愈傷組織，其中28瓶恢復正常，這28瓶恢復的愈傷組織形成的再生植株與正常愈傷組織形成再生植株相似。
[0012]實施例5:
操作步驟與實施例1相同，共接種30瓶褐化的愈傷組織，其中26瓶恢復正常，這26瓶恢復的愈傷組織形成的再生植株的葉片比正常愈傷組織形成再生植株的葉片顏色鮮綠。
[0013]上述實例只是為說明本發明的技術構思以及技術特點，并不能以此限制本發明的保護范圍。凡根據本發明的實質所做的等效變換或修飾，都應該涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種牡丹褐化愈傷組織恢復的方法，其特征在于，包括如下步驟: (O第一次接種:無菌環境中將褐化的牡丹愈傷組織轉移MS培養基中，于20°C，500-1000Lx 下培養 7d ； (2)第二次接種:將步驟I中的愈傷組織進行第二次接種，于17°C，全黑暗條件下培養7d； (3)第三次接種:將步驟2中的愈傷組織進行第三次接種，于14°C，全黑暗條件下培養7d； (4)第四次接種:將步驟3中的愈傷組織進行第四次接種，于10°C，全黑暗條件下培養7d； (5)第五次接種:將步驟4中的愈傷組織進行第五次接種，于15°C，全黑暗條件下培養7d。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1-4中所述的接種培養基為MS培養基，培養基中添加40g/L蔗糖和7g/L瓊脂，高壓滅菌冷卻至室溫后待用。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟5中接種培養基為MS培養基，培養基中添加20 g/L蔗糖和7g/`L瓊脂，高壓滅菌冷卻至室溫后待用。
【文檔編號】A01H4/00GK103598092SQ201310525612
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】張亞峰 申請人:張亞峰