一種錫生藤多倍體誘變的快速繁殖方法
【專利摘要】本發明研究了一種錫生藤多倍體誘變的快速繁殖方法，包括錫生藤無菌花粉的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的分化、生根誘導等步驟，本發明方法可以快速獲得大量的錫生藤多倍體幼苗，具有繁殖率高，目的性強，操作簡單，成本低等特點。
【專利說明】 一種錫生藤多倍體誘變的快速繁殖方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及錫生藤組織培養的快繁方法，屬于植物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]錫i生篇，Cissampelos pareira L.防己科,系傣族習用藥材,傣名為亞紅龍。木質藤本；枝細瘦、有條紋，通常密被柔毛，很少近無毛，葉紙質，心狀近圓形或近圓形，長，寬均約2-5厘米，頂端常微缺，具凸尖，基部常心形，有時近截平，很少，微圓，兩面被毛，上面常稀疏，下面很密；掌狀脈5-7條，在下面稍凸；葉柄常密被柔毛，比葉片短。雄花序為腋生，傘房狀聚傘花序，單生或幾個簇生，花序軸和分枝均細瘦，密被柔毛；雄花；萼片長1.2-1.5毫米，背面被疏而長的毛；花冠碟狀；聚藥雄蕊長約0.7毫米；雌花序為狹長的聚傘圓錐花序，長達18厘米，通常不超過10厘米，葉狀苞片近圓形，在花序軸上覆瓦狀重疊、密被毛；雌花:萼片闊倒卵形，長約1.5毫米；花瓣很小，長約0.7毫米。核果被柔毛，內果皮闊倒卵形，長3-5毫米，背肋兩側各有2行皮刺狀小凸起，胎座跡為馬蹄形邊緣所環繞。生于熱帶河邊、沙灘，荒地、山坡石縫中或灌木叢中的潮濕地，分布于云南，春、夏二季采挖，除去泥沙，曬干，本種根含多種生物堿，其中錫生藤堿為一種較好的肌肉松弛劑。根含D-槲皮醇、海牙亭堿、海牙亭寧堿、筒箭毒次堿、粒枝堿、海牙剔定堿、錫生藤醇靈、(++)-4"-甲氧基筒箭毒次堿。根皮含筒箭毒次堿、海牙亭堿、海牙亭寧堿、粒枝堿、門尼斯明堿、錫生藤醇靈、軟齒花根堿等。藤含海牙亨堿、筒箭毒次堿、粒枝堿、(++)-4" -ο-甲基筒箭毒次堿。藥用功效為消腫止痛，止血，生肌，目前錫生藤尚未見人工繁殖。


【發明內容】

[0003]本發明所要解決的技術問題是一種錫生藤誘變育種的快速繁殖方法，本發明方法可以快速獲得大量的錫生藤多倍體幼苗，繁殖率高，目的性強，操作簡單，成本低。
[0004]為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案:
取錫生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的過氧化氫溶液消毒5min,無菌水沖洗5次，消毒處理過的錫生藤花粉，接種到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50-150mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度22±2°C，誘導出來的分散穩定的愈傷組織接種到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培養基中進行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x,光期12h/d，溫度23±2°C，分化出來的胚接入MS培養基中進行壯苗生長，附加蔗糖60g/L，瓊脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，溫度 28。。。
[0005]采用本發明制備的錫生藤成活率高，根莖粗壯，利用率大，利于大規模種植。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取錫生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的過氧化氫溶液消毒5min,無菌水沖洗5次，消毒處理過的錫生藤花粉，接種到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度22±2°C，誘導出來的分散穩定的愈傷組織接種到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培養基中進行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期12h/d，溫度23±2°C，分化出來的胚接入MS培養基中進行壯苗生長，附加蔗糖60g/L，瓊脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，溫度 28°C，成活率 80%。
[0008]實施例2
取錫生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的過氧化氫溶液消毒5min,無菌水沖洗5次，消毒處理過的錫生藤花粉，接種到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素100mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度22±2°C，誘導出來的分散穩定的愈傷組織接種到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培養基中進行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期12h/d，溫度23±2°C，分化出來的胚接入MS培養基中進行壯苗生長，附加蔗糖60g/L，瓊脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，溫度 28°C，成活率 82%。
[0009]實施例3
取錫生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的過氧化氫溶液消毒5min,無菌水沖洗5次，消毒處理過的錫生藤花粉，接種到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素150mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度22 ± 2 °C，誘導出來的分散穩定的愈傷組織接種到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培養基中進行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期12h/d，溫度23±2°C，分化出來的胚接入MS培養基中進行壯苗生長，附加蔗糖60g/L，瓊脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，溫度 28°C，成活率 83%。
【權利要求】
1.一種錫生藤多倍體誘變的快速繁殖方法，包括錫生藤無菌花粉的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的分化、生根誘導，其主要步驟如下: (1)取錫生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的過氧化氫溶液消毒5min,無菌水沖洗5次； (2)將步驟(I)消毒處理過的錫生藤花粉，接種到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50-150mg/L的培養基中進行愈傷組織的誘導，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度22±2°C ； (3)取步驟(2)誘導出來的分散穩定的愈傷組織接種到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培養基中進行愈傷組織的分化，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期 12h/d，溫度 23±2°C ； (4)將步驟(3)分化出來的胚接入MS培養基中進行壯苗生長，附加蔗糖60g/L，瓊脂7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，溫度 28。。。
【文檔編號】A01H4/00GK104255511SQ201410540492
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月14日 優先權日:2014年10月14日
【發明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農業科技有限公司