專利名稱：一種多倍體楊樹的篩選方法及其專用引物的制作方法
技術領域：
本發明涉及多倍體楊樹的篩選方法，具體涉及一種基于微衛星標記的多倍體楊樹的篩選方法及其專用引物。
背景技術：
多倍體育種是植物新品種培育的重要手段，多倍體育種起源于20世紀初，現在已廣泛應用于植物新品種的培育中。多倍體由于基因組倍性的增加，往往表現出形態上的巨大性和抗性增強等特點。其中三倍體還具有不育特點，可以作為轉基因育種的良好材料。多倍體的上述特點在林木育種中也具有十分重要的利用價值。如南京林業大學培育的三倍體歐洲山楊，其葉和其它器官都比二倍體大，樹高和胸徑生長也更為迅速。據調查，在相同立地條件下，這種三倍體歐洲山楊與同齡的二倍體相比，樹高超出11%，胸徑超出10%，材積超出36%。再如北京林業大學朱之悌等利用天然2η花粉雜交成功選育出一批速生、質優的三倍體毛白楊新品種，表現出優異的材積生長和木材纖維性狀(李云、馮大領，200幻。國外，Einspahr采用四倍體歐洲山楊與二倍體美洲山楊雜交獲得了遺傳增益顯著的人工異源三倍體山楊，為美國楊樹紙漿材新品種培育做出了重要貢獻。Weisgerber等用四倍體歐洲山楊與二倍體美洲山楊雜交，選育出雜種三倍體“Astria”，這一人工三倍體樹冠狹窄，適應性強，對光不敏感，比直接從山楊天然群體中選擇出來的優樹生長快，且抗銹病，在生產中得到廣泛應用。
研究表明多倍體楊樹的巨大性一般會伴隨木材纖維細胞增大，導致單位材積的纖維細胞數減少以及細胞表面積減小，從而使分布于細胞壁的木質素等含量降低，而纖維素含量相應增加。在造紙過程中，纖維柔軟易于打漿且交織力強，紙張的抗張力、撕裂度均顯示了較高的水平。同時在制漿中易于蒸煮、軟化及打漿，能耗亦相對較低。在相同制漿條件下，北京林業大學報道的三倍體毛白楊磨漿能耗比普通毛白楊約低13% (康向陽，2010)。 楊柳科植物多為二倍體，但在嚴酷的生境條件下，多倍體楊樹發生頻率會增加。有研究表明，多倍體能使植物更易適應嚴酷的生長條件，在生活力、環境適應性、抗逆性等方面往往具有明顯優勢。如三倍體歐洲山楊更耐干旱瘠薄，更適宜于條件較差的山地栽植，而且還表現出較強的抗病能力(康向陽，2010)。隨著一系列多倍體楊樹的培育成功和在生產中的應用，多倍體楊樹育種的價值逐漸顯現。諸多多倍體楊樹實例表明，可以通過一輪次的育種過程實現楊樹多目標性狀綜合改良，培育出生長快、纖維長、木質素低、纖維含量高以及抗逆性強的短周期纖維工業用材品種，提高工業利用價值(康向陽，2010)。因此多倍體育種是楊樹良種培育的一個有效途徑。
在多倍體培育方法上，一是對天然多倍體進行選擇。雖然楊柳科植物多為二倍體， 但天然群體中多倍體楊樹也時有發生，特別的白楊派樹種多倍體發生頻率相對較高，天然多倍體是多倍體育種材料的重要來源。多倍體還可以利用不同倍性的材料通過人工雜交的方法獲得。另外物理或化學誘導也是獲得多倍體的重要方法。但不管采用何種方法，如何從大量的材料中對多倍體進行篩選是多倍體育種中的關鍵技術。目前鑒別多倍體的方法有直接鑒別法和間接鑒別法兩種(陳大成，2001)。直接鑒別法包括檢查花粉母細胞、根尖細胞或幼葉細胞的染色體數目，直接加以判斷。直接鑒別方法雖然可靠，但需對待檢測材料一一進行顯微鏡觀察，采用這一方法從大量的材料中篩選多倍體，工作量很大，效率較低。而間接鑒別主要是根據植株和花粉粒的形態特征、氣孔大小、保衛細胞葉綠體數目以及生理特征等，這種方法主要依賴于經驗，鑒別準確率較低。因此發展簡便、高效的多倍體楊樹篩選技術對加速多倍體楊樹育種進程具有十分重要的意義。發明內容
發明目的針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種簡便、快速的多倍體楊樹的篩選方法，為加速多倍體楊樹育種進程，提供關鍵技術支撐。本發明的另一目的是提供一種上述多倍體楊樹的篩選方法的專用引物。技術方案為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下
一種多倍體楊樹的篩選方法，其特征在于以待篩選樣品的DNA為模板，在特異性微衛星引物的引導下進行PCR擴增獲得產物，對產物進行電泳，進行基因型分析，若擴增出的等位基因數目大于或等于3個，則對應樣品為多倍體楊樹，否則不為多倍體楊樹；其中， 特異性微衛星引物為以下12對引物中的全部引物
引物對 1 :GACACCGTTTCTTTTCTGAG，ACCAGATCTTCATCTTCCAA ；
引物對 2 TCGAATAGCTGGGATACTTC, TATCACCCGAACAAAAACTC ；
引物對 3 TTACGATCGCCATTATGAA, TCTTTAACCTCCCCTAAACC ；
弓丨物對 4 :AACCTCCAATACCAAGATCA, TGAGAATAAATATTTCGGCAA ；
引物對 5 CCTTAGCCTTCTCACACAAC, GGTCTCCATTTTAGCTGTCA ；
弓丨物對 6 GCCCAAACTCTTATTTGATG, TGGTGGAGGCTAGGATAGTA ；
弓丨物對 7 ATTGCTCTTGCAGAAATCAT，GGATACCAAGTCATCGGTAG ；
引物對 8 :ATCAATTAGACCGGGTTTTT, TGTTCCAGTTCATGCTGATA ；
弓丨物對 9 :ATTGGTCTCGTACCCAAAA, ATTTCCAATGCATATGTTCC ；
弓丨物對 10 :AGAACTTGTGAGGCAGGTAA，AAGCTCTCCCCTAACAAAG ；
引物對 11 :TTATTTGGATCCTGAAATGG，GATGGTTCGGTATGTGAGTT ；
引物對 12 :ACAAAATTTTCGCAAGAAAG, TCTGTTCATGAGAGTGGAA。
其中，PCR反應體系為模板DNA 25ng,未標記的上游引物和FAM標記下游引物各 20ng，200uM dNTP，0. 5U Taq 聚合酶，1. 5uL 含 IOOuM pH 8.3 的 Tris-HCl、500mM KCl、20mM MgCl2和10. Og/L BSA的10 Xbuffer，加滅菌去離子水補充反應積到15uL。
其中，PCR反應條件為94°C預變性anin ；94°C變性30s，50°C退火30s，72°C延伸 lmin，進行30個循環；72°C延伸5min。
其中，基因型分析在ABI3130測序儀上按如下步驟進行反應產物用滅菌去離子水1 :20稀釋；取IuL稀釋后的反應產物，加9uL上樣緩沖液(含91%去離子甲酰胺，9% 450R0X內標)；配制好的上樣產物95°C變性5min后，置于冰上迅速冷卻，然后上機運行；其中，上樣緩沖液含91%體積去離子甲酰胺，含9%體積450R0X內標。
當檢測為多倍體楊樹時，即為三倍體楊樹，三倍體中若在某一位點檢測到3個等位基因，說明該位點等位基因均為雜合；若檢測2個等位基因，說明該位點有兩個等位基因5純合，另一個為雜合；若只檢測1個等位基因，說明該位點3個等位基因均純合。
當檢測不為多倍體楊樹時，即為二倍體楊樹，二倍體中若在某一位點檢測到2個等位基因，說明該位點等位基因雜合；若只檢測到1個等位基因，說明該位點2個等位基因純合。
一種多倍體楊樹的篩選方法的專用引物，所述的專用引物是微衛星引物，為以下 12對引物中的全部引物
引物對 1 :GACACCGTTTCTTTTCTGAG，ACCAGATCTTCATCTTCCAA ；
引物對 2 TCGAATAGCTGGGATACTTC, TATCACCCGAACAAAAACTC ；
引物對 3 TTACGATCGCCATTATGAA, TCTTTAACCTCCCCTAAACC ；
引物對 4 :AACCTCCAATACCAAGATCA, TGAGAATAAATATTTCGGCAA ；
引物對 5 CCTTAGCCTTCTCACACAAC, GGTCTCCATTTTAGCTGTCA ；
引物對 6 GCCCAAACTCTTATTTGATG, TGGTGGAGGCTAGGATAGTA ；
弓丨物對 7 ATTGCTCTTGCAGAAATCAT，GGATACCAAGTCATCGGTAG ；
引物對 8 :ATCAATTAGACCGGGTTTTT, TGTTCCAGTTCATGCTGATA ；
弓丨物對 9 :ATTGGTCTCGTACCCAAAA, ATTTCCAATGCATATGTTCC ；
引物對 10 :AGAACTTGTGAGGCAGGTAA，AAGCTCTCCCCTAACAAAG ；
引物對 11 :TTATTTGGATCCTGAAATGG，GATGGTTCGGTATGTGAGTT ；
引物對 12 :ACAAAATTTTCGCAAGAAAG, TCTGTTCATGAGAGTGGAA。
在多倍體中，基因組倍性增加會導致不同基因位點等位基因數目增加。如二位體中，每一位點可檢測到的等位基因數目最多為二個，而三倍體中，每一位點可檢測到的等位基因數目最多則為三個。通過對不同基因位點的等位基因數目進行檢測，就可以根據檢測到的等位基因數，對待檢樣品進行多倍體篩選。通過PCR的方法對不同基因位點的等位基因進行擴增和檢測，可以快速完成大量樣本的檢測。該方法的要素主要有二個，一是所用引物在相應擴增位點上要有高度的保守性，可以擴增出不同染色體上的同一位點的各個等位基因，即所采用的標記應呈共顯性遺傳。二是檢測的基因位點要有高度的變異性，同一位點的不同等位基因存在可檢測的變異。考慮上述要求，微衛星標記是目前不同標記類型中，用于植物多倍體篩選的最高效的分子標記。微衛星DNA也稱簡單重復序列，是由長度為l_6bp 串聯重復序列組成，微衛星是基因組中變異最為迅速的序列，存在豐富的等位基因變異。同時微衛星標記的引物序列保守性高，一般在種的分類水平上可以通用，有些微衛星引物甚至屬的分類水平上也可以通用，因此微衛星標記多呈共顯性遺傳。微衛星標記是基于PCR 擴增為基礎的標記，微衛星標記檢測還具有簡便、快速的特點。
通過上面的論述，本發明開發的用于多倍體楊樹篩選的微衛星引物，要求同時滿足以下條件1.采用的微衛星標記應為單拷貝；2.采用的微衛星位點應為變異迅速的序列；3.采用的微衛星引物序列要有高度的保守性。4.微衛星標記的擴增產物要求譜帶清晰，每一譜帶與一個等位基因對應，不能有明顯的“影子”譜帶。如果篩選出具有上述特點的微衛星位點，就可以根據擴增產物電泳檢測到的等位基因數，對多倍體進行識別。
多倍體培育方法中，通過物理或化學的方法人工誘導產生的多倍體，由于不會產生等位基因數目的增加，因此這種方法獲得的人工多倍體不能通過分子標記的方法進行篩選。而天然多倍體或雜交育種產生的多倍體，都會有等位基因數目的增加，因此本發明適用于從楊樹天然群體或雜交育種過程中產生的大量材料中進行多倍體篩選。
有益效果與現有的多倍體楊樹篩選方法相比，本發明的突出優點包括利用12 對楊樹專用微衛星引物，進行多倍體楊樹篩選，檢測方法操作簡單、快捷，可在短時間內完成大量樣品的檢測，為多倍體楊樹篩選提供了高效可靠技術手段。本發明為多倍體楊樹育種提供了重要的技術支撐，應用前景廣闊，具有很好的實際應用價值，能夠產生較好的經濟效益和社會效益。


圖1是楊樹微衛星引物對NJFUP-polyOl在9種不同楊樹中的擴增產物用1. 5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測圖2是楊樹微衛星引物對NJFUP-poly04在楊樹全同胞家系子代中的擴增產物用 ABI-3730電泳產生的指紋圖3是楊樹微衛星弓I物對NJFUP-poly06對毛白楊進行多倍體檢測產生的指紋圖。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明做進一步的說明。
下述實例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法，所用微衛星引物合成工作由上海捷瑞生物技術有限公司完成。
實施例1
微衛星引物是楊樹基因DNA序列開發而來，楊樹基因DNA序列由網頁:http:// shake. iRi-psf. orR/cRi-in/searchGM ？ db = Poptrl 1 下載。楊樹基因的 DNA 序列由 3’-UTR區，外顯子區，內含子區和5’-UTR區構成。基因內含子區序列比外顯子區序列具有更高的變異頻率，而外顯子序列一般具有很高的保守性。基于多倍體檢測分子標記應具有的特性，在標記開發過程中，首先對利用SPUTNIK微衛星序列查找程序，采用默認參數，查找出了所有基因內含子序列中含有的重復單元長度為2 5堿基的微衛星重復序列，由于這些微衛星序列位于內含子區，可確保微衛星具有較高的變異性。引物采用PRIMER5. O設計，引物設計要求引物結合序列位于外顯子區，外顯子序列保性很高，這樣可確保引物的保守性，使開發的引物能夠在楊樹不同樹種中成功擴增。因此采用這一策略，可同時兼顧開發出的微衛星標記即具有較高的變異性，又具有較高的通用性。通過分析，共開發了 1219個外顯子-內含子復合微衛星標記。
楊樹分為黑楊派(Aigeiros)、白楊派(Leuce)、青楊派(Turanga)、大葉楊派 (Leucoides)和胡楊派(Tacamahaca)。為驗證引物的通用性，采集了分屬其中4個派的9 種不同楊樹，包括美洲黑楊(Populus deltoides,黑楊派)、歐洲黑楊(P. nigra,黑楊派)、 青楊(P. cathayana，青楊派)、小葉楊(P. simonii，青楊派)、大葉楊(P. lasiocarpa，大葉楊派)、毛白楊(P. tomentosa,白楊派)、銀白楊(P. alba,白楊派)、山楊(P. davidiana,白楊派)、響葉楊(P. adenopoda,白楊派)。對采集的不同種楊樹的插條在溫室內扦插發葉，采集幼嫩的葉片，用Qiagen DNeasy Plant Mini Kit提取DNA。提取的DNA通過微量核酸蛋白檢測儀檢測濃度，按50ng/ul稀釋，_80°C保存備用。從開發的1219個外顯子-內含子復合微衛星標記中隨機選300對引物，由上海捷瑞生物技術有限公司進行了合成。利用合成的引物對上述楊樹不同種的DNA進行PCR擴增，擴增產物用1. 5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，確定不同引物在上述不同楊樹中是否能夠擴增成功。圖1為楊樹微衛星引物對NJFUP-polyOl 在9種不同楊樹中的擴增產物用1. 5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測圖，圖中的泳道從左至右依次為青楊、小葉楊、大葉楊、毛白楊、美洲黑楊、歐洲黑楊、山楊、響葉楊、銀白楊和分子量標記。實驗結果顯示，合成的引物在所測的9種不同楊樹樹種中的擴增成功率均大于90%。
要篩選出可用于多倍體楊樹檢測的微衛星引物，還必須通過實驗確定微衛星在楊樹基因組中的拷貝數。同時由于許多微衛星引物的PCR產物往往存在一些“影子”譜帶， 有時一個等位基因會對應多條電泳譜帶，這樣在進行自然群體材料分析時，很難根據擴增出的譜帶數對等位基因數目進行準確判定。要解決這兩個關鍵問題，需要利用全同胞家系材料來進行引物對的測試。由于楊樹全同胞家系組合中，一個共顯性的位點，在任一子代中親本的兩個等位基因只能出現其一，且在不同子代中兩個等位基因只能交替出現。這樣利用全同胞家系就能對上述信息做出準確判斷，篩選出擴增譜帶數與等位基因數相對應， 且為單拷貝的微衛星標記。利用這種微衛星對自然群體材料進行檢測，就可以根據擴增的譜帶數對檢測樣本的倍性做出推斷。然而不同位點的雜合情況是不同的，如果所用微衛星標記在檢測樣本中擴增位點有兩個等位基因是純合的，則兩個等位基因只能顯示一條譜帶，這樣即使是多倍體，僅根據一對引物的擴增結果是難以檢測到樣本真實的倍性信息的。所以在進行樣本倍性檢測時要同時進行多個不同位點的檢測，才能做出較為準確的判斷。基于以上所述，接下來本發明采用了一個美洲黑楊和青楊的全同胞雜交組合，根據對合成引物對擴增產物瓊脂糖凝膠電泳檢測的結果，從中選取了 180對瓊脂糖凝膠電泳產物帶型清晰，且在所有測試楊樹不同樹種中均能成功擴增的引物對，對該家系的兩個親本和 6個子代進行了 PCR擴增。PCR反應體系為模板DNA25ng，上、下游引物各20ng，0.01uL Fluorescein-12-dUTP (ImM, Roche Diagnostics)，200uM dNTP，0.5U Taq 聚合酶，1. 5uL 含 IOOuM pH8. 3 的 Tris-HCl、500mM KCl、20mM MgCl2 禾口 10. Og/L BSA 的 10 Xbuffer，加滅菌去離子水補充反應積到15uL ；PCR反應條件為94°C預變性^iin ；94°C變性30s，50°C退火 30s，72°C延伸lmin，進行30個循環；72°C延伸5min。基因型分析在ABI3130或ABI3730測序儀上按如下步驟進行反應產物用滅菌去離子水1 20稀釋；取IuL稀釋后的反應產物， 加9uL上樣緩沖液(含91%去離子甲酰胺，9% 450R0X內標)；配制好的上樣產物95°C變性 5min后，置于冰上迅速冷卻，然后上機運行。圖2所示為楊樹微衛星引物對NJFUP-poly04在楊樹全同胞家系子代中的擴增產物用ABI-3730電泳產生的指紋圖，圖中樣品1和2分別為雜交組合的母本和父本，樣品3-8為雜交子代；圖中不同位置的峰對應不同的等位基因，上圖橫坐標指示等位基因按分子量大小的電泳位置，縱坐標指示擴增位點的螢光信號強度。 根據ABI3130電泳檢測到的不同引物對擴增位點等位基因的分離情況，共選取了 12對擴增產物電泳指紋清晰、呈共顯性遺傳且在楊樹基因組中為單拷貝的微衛星引物對，對應引物對的編號和具體序列信息見序列表或表1所示。
表1微衛星引物序列詳情表
權利要求
1.一種多倍體楊樹的篩選方法及其專用引物，其特征在于以待篩選樣品的DNA為模板，在特異性微衛星引物的引導下進行PCR擴增獲得產物，通過電泳對擴增產物進行基因型分析，檢測擴增位點所含等位基因數目，若擴增出的等位基因數目大于或等于3個，則對應樣品為多倍體楊樹，否則不為多倍體楊樹；其中，特異性微衛星引物為以下12對引物中的全部引物引物對 1 :GACACCGTTTCTTTTCTGAG，ACCAGATCTTCATCTTCCAA ； 引物對 2 TCGAATAGCTGGGATACTTC, TATCACCCGAACAAAAACTC ； 引物對 3 TTACGATCGCCATTATGAA, TCTTTAACCTCCCCTAAACC ； 引物對 4 :AACCTCCAATACCAAGATCA, TGAGAATAAATATTTCGGCAA ； 引物對 5 CCTTAGCCTTCTCACACAAC, GGTCTCCATTTTAGCTGTCA ； 引物對 6 GCCCAAACTCTTATTTGATG, TGGTGGAGGCTAGGATAGTA ； 引物對 7 :ATTGCTCTTGCAGAAATCAT, GGATACCAAGTCATCGGTAG ； 引物對 8 :ATCAATTAGACCGGGTTTTT, TGTTCCAGTTCATGCTGATA ； 引物對 9 :ATTGGTCTCGTACCCAAAA, ATTTCCAATGCATATGTTCC ； 引物對 10 :AGAACTTGTGAGGCAGGTAA，AAAGCTCTCCCCTAACAAAG ； 引物對 11 :TTATTTGGATCCTGAAATGG，GATGGTTCGGTATGTGAGTT ； 引物對 12 :ACAAAATTTTCGCAAGAAAG, TTCTGTTCATGAGAGTGGAA。
2.根據權利要求1所述的多倍體楊樹的篩選方法，其特征在于PCR反應體系為模板 DNA 25ng，未標記的上游引物和FAM標記下游引物各20ng，200uM dNTP，0. 5 U Taq聚合酶， 1.5uL含 100 uM pH 8. 3 的 Tris_HCl、500 mM KCl,20 mM MgCl2 和 10. 0 g /L BSA 的 IOX buffer,加滅菌去離子水補充反應積到15uL。
3.根據權利要求1所述的多倍體楊樹的篩選方法，其特征在于PCR反應條件為94°C 預變性anin; 94°C變性30s，50°C退火30 s，72°C延伸lmin，進行30個循環；72°C延伸 5min。
4.根據權利要求1所述的多倍體楊樹的篩選方法，其特征在于基因型分析在ABI3130 測序儀上按如下步驟進行反應產物用滅菌去離子水1 :20稀釋；取IuL稀釋后的反應產物，加9uL上樣緩沖液(含91%去離子甲酰胺，9% 450R0X內標)；配制好的上樣產物95°C變性5min后，置于冰上迅速冷卻，然后上機運行；其中，上樣緩沖液含91%體積去離子甲酰胺， 含9%體積450R0X內標。
5.根據權利要求1所述的多倍體楊樹的篩選方法，其特征在于所述的多倍體楊樹為天然多倍體楊樹或雜交育種產生的多倍體楊樹。
6.根據權利要求1所述的多倍體楊樹的篩選方法，其特征在于當檢測對象為多倍體楊樹，如三倍體中若在某一位點檢測到3個等位基因，說明該位點等位基因均為雜合；若檢測2個等位基因，說明該位點有兩個等位基因純合，另一個為雜合；若只檢測1個等位基因， 說明該位點3個等位基因均純合。
7.根據權利要求1所述的多倍體楊樹的篩選方法，其特征在于當檢測為二倍體楊樹時，二倍體中若在某一位點檢測到2個等位基因，說明該位點等位基因雜合；若只檢測到1 個等位基因，說明該位點2個等位基因純合。
8.—種權利要求1所述的多倍體楊樹的篩選方法的專用引物，其特征在于所述的專用引物是微衛星引物，為以下12對引物中的全部引物引物對 1 :GACACCGTTTCTTTTCTGAG，ACCAGATCTTCATCTTCCAA ； 引物對 2 TCGAATAGCTGGGATACTTC, TATCACCCGAACAAAAACTC ； 引物對 3 TTACGATCGCCATTATGAA, TCTTTAACCTCCCCTAAACC ； 引物對 4 :AACCTCCAATACCAAGATCA, TGAGAATAAATATTTCGGCAA ； 引物對 5 CCTTAGCCTTCTCACACAAC, GGTCTCCATTTTAGCTGTCA ； 引物對 6 GCCCAAACTCTTATTTGATG, TGGTGGAGGCTAGGATAGTA ； 引物對 7 :ATTGCTCTTGCAGAAATCAT, GGATACCAAGTCATCGGTAG ； 引物對 8 :ATCAATTAGACCGGGTTTTT, TGTTCCAGTTCATGCTGATA ； 引物對 9 :ATTGGTCTCGTACCCAAAA, ATTTCCAATGCATATGTTCC ； 引物對 10 :AGAACTTGTGAGGCAGGTAA，AAAGCTCTCCCCTAACAAAG ； 引物對 11 :TTATTTGGATCCTGAAATGG，GATGGTTCGGTATGTGAGTT ； 引物對 12 :ACAAAATTTTCGCAAGAAAG, TTCTGTTCATGAGAGTGGAA。
全文摘要
本發明公開了一種多倍體楊樹的篩選方法及其專用引物，該方法以待篩選樣品的DNA為模板，在特異性微衛星引物的引導下進行PCR擴增獲得產物，對產物進行電泳，并進行基因型分析，若擴增出的等位基因數目大于或等于3個，則對應樣品為多倍體楊樹，否則不為多倍體楊樹；其中，特異性微衛星引物為專用12對引物中全部引物。與現有的多倍體楊樹檢測方法相比，本發明利用專用微衛星引物，進行多倍體楊樹篩選，檢測方法操作簡單、快捷，可在短時間內完成大量樣品的檢測，為多倍體楊樹篩選提供了高效可靠技術手段，為多倍體楊樹育種提供了重要的技術支撐，應用前景廣闊，具有很好的實際應用價值，能夠產生較好的經濟效益和社會效益。
文檔編號C12N15/11GK102533993SQ201110446619
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月28日 優先權日2011年12月28日
發明者馮凱, 尹佟明, 戴曉港, 李淑嫻, 渠紀騰 申請人:南京林業大學