一種含有甲基營養型芽孢桿菌與葉枯唑的殺細菌組合物及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種殺細菌組合物，所述組合物含有活性成分甲基營養型芽孢桿菌和葉枯唑，其中二者的重量比為30:1-1:30。本發明還涉及一種殺細菌劑，其含有1～90重量％所述的殺細菌組合物，余量為農藥上可接受的載體和助劑。進一步地，本發明還涉及所述殺細菌組合物或殺細菌劑用于防治煙草青枯病、水稻白葉枯病或大白菜軟腐病的應用。相比單劑而言，甲基營養型芽孢桿菌和葉枯唑組合后的增效系數均在130以上，具有良好的增效作用；本發明的殺細菌組合物能良好地延緩單劑的抗藥性。
【專利說明】-種含有甲基營養型芽抱桿菌與葉枯睡的殺細菌組合物及 其應用

【技術領域】
[0001] 本發明涉及農藥領域，特別是殺細菌劑領域，具體地說是含有甲基營養型芽抱桿 菌和葉枯哇的殺細菌組合物及其應用。 技術背景
[0002] 甲基營養型芽抱桿菌炬acillus methylotrophicus)是芽抱桿菌屬中的一個種。 革蘭氏陽性，葡萄糖、阿拉伯糖、接觸酶、脂肪酶、脈酶及氧化酶均呈陽性、好氧，桿狀，具備 運動能力。
[0003] 研究發現芽抱桿菌菌株中不存在常見的毒素基因（皿L、BcET、NHE、entFM)、銷磯脂 酶（S地)、磯脂酶（PI-PLC);也不與NHE、皿L抗體反應。認為分離自傳統發酵食品芽抱桿菌 菌株在安全性上是有保證的。
[0004] 在我國農業快速發展過程中，病蟲危害是制約我國農業持續穩定發展的重要因 素。近年來，我國農作物病害年平均發生面積超過1億公頃，每年糧食的病蟲危害損失約 為3000多萬噸，致使我國經濟損失高達300多億。據統計，我國被農藥污染的農田達933 萬hm2 W上，每年死于農藥污染食品的為0. 83萬人，每年因農藥污染造成的直接經濟損失 就高達160多億元人民幣。利用無公害農藥防治植物病害，減少化學農藥使用量和減輕農 藥污染，保證食品安全和發展有機農業已成為本世紀我國發展現代農業和有機農業當務之 急。
[0005] 另一方面，近年來，隨著作物品種、種植條件的改變，原有的一些并未引起太多重 視的細菌性病害逐漸成為重要病害。例如，煙草青枯病、水稻白葉枯病、大白菜軟腐病等細 困性病吉危吉越來越嚴重。
[0006] 芽抱桿菌因其安全性和能產生多種抗菌物質及酶的特性而受到生物防治工作者 的偏愛。而且經培養發酵可加工成生物菌劑，開發應用潛力大。目前已有一些優良的芽抱 桿菌菌株應用于生產實踐。
[0007] 甲基營養型芽抱桿菌是芽抱桿菌的一種，具有高殺細菌活性、殺菌譜廣及具有促 生作用的環境友好型生物菌株。
[000引葉枯哇，又稱喔枯哇，主要用來防治植物細菌性病害，對水稻白葉枯病和細菌性條 斑病、巧枯潰瘍病有較好的防治效果。內吸殺細菌劑。具有良好治療和預防作用。對細菌病 害有較好的防效?？褂晁疀_刷，噴藥后4小時遇雨對藥效無影響。本品屬低毒性殺細菌劑。 無致癌、致崎、致突變作用。對魚類安全。急性口服LD50 ;原藥小鼠為3180-6200mg/kg，原 藥大鼠急性經口 LD50為3160-8250mg/kg。大鼠W含0. 25mg/kg飼養一年無不良影響。
[0009] 近年來的大田應用中發現，上述兩種已知殺細菌劑在應用過程中出現了殺菌活性 不夠高，同時個別病害也逐漸出現了抗藥性。


【發明內容】

[0010] 本發明旨在提供一種有效防治煙草青枯病、水稻白葉枯病、水稻細菌性條斑病、巧 橘潰瘍病、大白菜軟腐病等細菌性病害的殺細菌組合物。該殺細菌組合物相比單劑具有良 好的增效作用，且能延緩單劑的抗藥性，同時安全無毒、環境友好。
[0011] 本發明是該樣實現的：
[0012] 本發明涉及一種殺細菌組合物，其特征在于，所述組合物含有活性成分甲基營養 型芽抱桿菌和葉枯哇，其中二者的重量比為30:1-1:30。
[0013] 優選地，該殺細菌組合物中甲基營養型芽抱桿菌和葉枯哇的重量比為10:1? 1:10。
[0014] 更優選地，該殺細菌組合物中甲基營養型芽抱桿菌和葉枯哇的重量比為5:1? 1:5。
[0015] 本發明涉及一種殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有1?90重量％的如上所 述的殺細菌組合物，余量為農藥上可接受的載體和助劑。
[0016] 優選地，該殺細菌劑含有3?80重量％的如上所述的殺細菌組合物。
[0017] 更優選地，該殺細菌劑含有15?70重量％的如上所述的殺細菌組合物。
[001引所述載體和助劑為分散劑1-10%、潤濕劑0. 5-5%、崩解劑1-15%、粘結劑1-4%、 載體加至100%。
[0019] 所述分散劑可W為工業副產物分散劑，如木質素及其衍生物等；陰離子型表面活 性劑的分散劑焼基硫酸鹽類，焼基酷聚氧己帰基離甲酵縮合物硫酸鹽等；非離子型表面活 性劑的分散劑，如焼基酷聚氧丙帰基離嵌段共聚物，焼基酷聚氧己帰磯酸醋等；水溶性高分 子物質分散劑和無機分散劑；或者是上述一種和幾種的混合；
[0020] 所述潤濕劑可W為焼基硫酸鹽類，焼基酷聚氧己帰基離甲酵縮合物硫酸鹽，拉開 粉，S0PA，十二焼基苯賴酸軸，凈洗劑，農乳2000系列，潤濕滲透劑T，LS94、LWET/F、聚氧己 帰基離類等；或者是上述一種和幾種的混合；
[0021] 所述崩解劑可W為硫酸饋、硫酸軸，碳酸軸、碳酸氨軸、碳酸饋、氯化饋等；或者是 上述一種和幾種的混合；
[0022] 所述粘結劑可W為淀粉、聚己二醇、化咯焼麗、聚己帰醇、尿素等；或者是上述一種 和幾種的混合；
[0023] 所述載體可W為高嶺±，活性白±，娃藻±，泥煤，輕質碳酸巧，白碳黑，葉臘石，滑 石粉，方解石等；或者是上述一種和幾種的混合。
[0024] 除非另有說明，本發明所涉及的"％ "均為"重量百分比"。
[0025] 本發明之制備方法是：將計量好的甲基營養型芽抱桿菌母藥、葉枯哇原藥、分散 齊U、潤濕劑、崩解劑和載體投入混合機中，混合均勻后粉碎，將粉碎后的物料與粘結劑的水 溶液（2%的水溶液）捏合；捏合后的物料經造粒機造粒；去除大于5mm和小于0. 5mm的顆 粒，烘干即可。不合適的顆粒經重新捏合后再造粒。
[0026] 進一步地，本發明還涉及將上述殺細菌組合物或殺細菌劑用于防治煙草青枯病 (Pseudomonas solanacearum 巧.F. Smith) Smith)、水稻白葉枯病(Xanthomonas oryzae Swing et al. pv. oryzlcola (Fang et al) Swing et al)或大白菜軟腐病(Erwinia carotovora subsp. carotovora (Jones) Bergey et al.)的應用。
[0027] 所述甲基營養型芽抱桿菌母藥的制備和提取方法是按照中國專利201210579899、 發明名稱為"一種甲基營養型芽抱桿菌的生物菌劑及其制備方法和應用"中所記載的方法 來制得的。
[0028] 關于本發明技術方案的效果，具體如下：
[0029] (1)相比單劑而言，甲基營養型芽抱桿菌和葉枯哇組合后的增效系數均在130 W 上，具有良好的增效作用；
[0030] (2)本發明的殺細菌組合物能良好地延緩單劑的抗藥性。

【具體實施方式】
[0031] 下面敘述本發明的四個實施例
[0032] 本發明的甲基營養型芽抱桿菌按照中國專利201210579899、發明名稱為"一種甲 基營養型芽抱桿菌的生物菌劑及其制備方法和應用"中所記載的方法來制得的。
[0033] 實施例1.制備水分散粒劑殺菌藥物（1000公斤）
[0034] 主成分甲基營養型芽抱桿菌為1%，即10公斤。葉枯哇為10%，即10公斤。并含 有下述各種助劑，分散劑T36為5%、即50公斤，分散劑27002%，即20公斤；潤濕劑十二焼 基硫酸軸3%，即30公斤；崩解劑硫酸胺3%，即30公斤；粘結劑聚己二醇3%，即30公 斤；載體白炭黑為140公斤，載體高嶺±余量為590公斤。
[00巧]配制工藝為；將計量好的甲基營養型芽抱桿菌母藥、葉枯哇原藥分散劑T36、分散 劑2700、潤濕劑十二焼基硫酸軸、崩解劑硫酸饋、載體白炭黑和高嶺±投入混合機中，攬拌 均勻，經氣流粉碎機粉碎。將粉碎后的物料與粘結劑聚己二醇的水溶液捏合，捏合成膏狀后 經造粒機造粒；用篩子將大于5mm和小于0. 5mm的顆粒去除；合適的顆粒經干燥，檢測合格 后包裝。不合適的顆粒經捏合機重新捏合后再造粒。
[0036] 實施例2.制備水分散粒劑殺菌藥物（1000公斤）
[0037] 主成分甲基營養型芽抱桿菌為20%，即200公斤。葉枯哇原藥為20%，即200公 斤。并含有下述各種助劑，分散劑MNS9010%、即100公斤；潤濕劑LS940. 5%，即5公斤； 崩解劑氯化饋10%，即100公斤；粘結劑尿素4%，即40公斤；載體滑石粉余量為355公 斤。
[003引配制工藝同實施例1
[003引實施例3.巧IJ備可濕性粉劑殺菌藥物（1000公斤）
[0040] 主成分甲基營養型芽抱桿菌為12%，即120公斤。葉枯哇為20%，即200公斤。即 并含有下述各種助劑，分散劑NW0 8%、即80公斤；潤濕劑4896為5%，即50公斤；載體白 炭黑為15%，即150公斤公斤。高嶺±余量為400公斤。
[00川 配制工藝
[0042] 按照配方要求，投入分散劑NN0、MF- 5、高嶺±，開動攬拌機，投入甲基營養型芽 抱桿菌母藥和葉枯哇原藥，白炭黑，最后緩慢加入潤濕劑，料投完后在前混合機混合15-30min，開啟粉碎機，分機轉速38- 45,加料速度180- 250Kg/h，粉碎畢后在后混合機混合 15-30min，包裝，即可制成甲基營養型芽抱桿菌和葉枯哇可濕性粉劑。
[0043] 實施例4.制備可濕性粉劑殺菌藥物（1000公斤）
[0044] 主成分甲基營養型芽抱桿菌為20%，即200公斤。葉枯哇20%，即200公斤。即 并含有下述各種助劑，分散劑NW0 8%、即80公斤；潤濕劑4896為5%，即50公斤；載體白 炭黑為15%，即150公斤公斤。高嶺±余量為320公斤。
[0045] 配制工藝同實施例3
[004引生物測定：
[0047]甲基營養型芽抱桿菌與葉枯哇組合對煙草青枯病的毒力測定 [004引 1.試驗條件
[0049] 1. 1供試病原菌：
[0050] 煙草青枯病菌Pseudomonas solanacearum化F. Smith) Smith,由西北農林科技大 學植保學院植物病理研究室保存和提供。
[0051] 供試菌種在TTC培養基上培養，溫度17-22 °C，相對濕度90%。
[0052] 1. 2供試植物；在滅菌±培育煙苗至4?5葉期。
[005引 2.試驗設計
[0054] 2. 1供試藥劑：
[0(巧5] 內含100億/克甲基營養型芽抱桿菌LW-6母液炬acillus methylotrophilus)， 由西北農林科技大學植保學院植物病理研究室保存和提供。
[0056] 葉枯哇（Bismerthlazol)97%原藥，由浙江龍灣化工公司提供。
[0057] 2. 2藥劑濃度和配比設計及溶液配制：
[0058] 甲基營養型芽抱桿菌溶液；稱取0. Olg內含100億/克甲基營養型芽抱桿菌LW-6 母液，加入含0. 1 % TweenSO乳化劑的無菌水98. 5ml，攬拌均勻，配制成lOOmg/L母液，再用 含0. 1% TweenSO乳化劑的無菌水稀釋成10、5、2. 5、1.25、0. 625、0. 3125mg/L濃度備用； [005引葉枯哇溶液：稱取0. 01g97 %葉枯哇原藥，用0. 2mlDMF溶解，加入含0. 1 % TweenSO乳化劑的無菌水96. 8ml配制成lOOmg/L母液，再用含0. 1 % TweenSO乳化劑的無 菌水稀釋成10、5、1、0. 5、0. 1、0. 05mg/L濃度備用；
[0060] 各混配溶液；分別取5、9、10、14、9mll0mg/L甲基營養型芽抱桿菌溶液分別加入到 5、6、4、4、29mll0mg/L葉枯哇溶液中制成lOmg/L甲基營養型芽抱桿菌?葉枯哇1:1、3:2、 5:2、7:2和9:2溶液，再用含0. 1% TweenSO乳化劑的無菌水稀釋成100、50、12. 5、6. 25mg/ L5個質量試驗濃度，每個質量濃度設4個重復。
[0061] 對照溶液；0. 2mlDMF加95ml含0. 1 % TweenSO乳化劑的無菌水。
[00的]3.測定方法：
[0063] 選取在滅菌±上培育長勢好的4?5葉期煙苗，噴霧處理后自然瞭干，2化左右將 幼苗取出接種煙草青枯病，接種量為5ml/株。
[0064] 每處理設3次重復，每重復10株煙苗，處理后移栽至裝有滅菌±的苗鉢中，處理放 置于溫室28?36C條件下，每天觀察煙苗生長情況，3天后空白對照重復發病時調查防治 效果，15天后調查煙草植株發病情況，統計發病率和病情指數，計算防效。
[0065] 4.數據統計分析
[0066] 參照生測標準方法NY/T1156. 6-2006,根據Sun&Johnson(1996)的共毒系數法 (CTC)來評價藥劑混配的增效作用，即CTC《80為枯抗作用，80 < CTC < 120為相加作用， CTC> 120為增效作用。
[0067] W病情指數計算出各個處理防效，所有數據均采用SAS6. 12系統軟件進行分析， 求出毒力回歸方程式、相關系數（r)和ECs。(95%置信度）。
[006引 5.結果與分析：
[0069] 采取5點法取5個代表性的配比，并將該5個配比和標準藥劑進行毒力測定。甲 基營養型芽抱桿菌和葉枯哇復配對煙草青枯病的毒力測定結果見表1。由表1可見，甲基營 養型芽抱桿菌與葉枯哇W 1: 1、3: 2、5: 2、7:2和9:2的比例混配對煙草青枯病菌均表現出 增效作用，其ECs。值分別為0. 40、0. 47、0. 51、0. 62和0. 72mg/L，共毒系數分別為138. 18、 135. 95、152. 48、142. 62和134. 55,其中W 5:2的比例混配增效作用最好。
[0070] 表1甲基營養型芽抱桿菌和葉枯哇復配對煙草青枯病的毒力測定結果
[0071]

【權利要求】
1. 一種殺細菌組合物，其特征在于，所述組合物含有活性成分甲基營養型芽孢桿菌和 葉枯唑，其中二者的重量比為30:1-1:30。
2. 根據權利要求1所述的殺細菌組合物，其特征在于，二者的重量比為10:1?1:10。
3. 根據權利要求1所述的殺細菌組合物，其特征在于，二者的重量比為5:1?1:5。
4. 一種殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有1?90重量％權利要求1至3任一所 述的殺細菌組合物，余量為農藥上可接受的載體和助劑。
5. 根據權利要求4的殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有3?80重量％的殺細菌 組合物。
6. 根據權利要求4的殺細菌劑，其特征在于，該殺細菌劑含有15?70重量％的殺細菌 組合物。
7. 根據權利要求4至6任一所述的殺細菌劑，其特征在于，所述載體和助劑為分散劑 1-10%、潤濕劑0. 5-5%、崩解劑1-15%、粘結劑1-4%、載體加至100%。
8. 根據權利要求1至3任一所述的殺細菌組合物或權利要求4-7任一所述的殺細菌劑 用于防治煙草青枯病、水稻白葉枯病或大白菜軟腐病的應用。
【文檔編號】A01N63/00GK104397035SQ201410654499
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月17日 優先權日:2014年11月17日
【發明者】唐滿倉, 馬玉明, 葉龍江, 李林強 申請人:陜西恒田化工有限公司