本發明屬于鐵皮石斛種植技術領域，具體涉及一種鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法。
背景技術：
鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物，主要分布在熱帶、亞熱帶原始森林及相類似的溫暖濕潤的地區，常附生于苔蘚植物的石灰巖石上或樹上。鐵皮石斛是常用的名貴中藥，具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳、潤喉明目、延年益壽之功效，又因其富含多糖、生物堿、總酚等生物活性物質而具有免疫調節和抗氧化作用。然而由于鐵皮石斛苛刻的生長環境，較低的自然產量以及人們長期的過度采挖，致使野生資源日益減少；由于天然來源的鐵皮石斛越來越少，近年來，植物組織培養已經成為藥用植物繁殖及大規模生產其有效成分的主要方式，目前市場上關于鐵皮石斛組培的培養基有很多種，其中成分含量也不盡相同，但這些培養基在鐵皮石斛壯苗生根階段的效果并不理想，莖不夠粗壯，根系不夠多,移栽成活率低，生長速度慢等，使得種苗質量大大降低,不利于鐵皮石斛的市場銷售，例如中國專利CN201510375351.5提高鐵皮石斛的產量、質量、生物轉化率及環境適宜情況下的移栽成活率，但沒能解決植株的黃化衰老、葉片脫落、抗寒抗旱、抵抗等的問題，也沒能解決鐵皮石斛在組培過程中出現的褐變問題。
技術實現要素：
本發明的發明目的是，針對上述問題，提供一種鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法。
為達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：
一種鐵皮石斛生根壯苗培養基，所述培養基由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液V、母液VI混合而成；所述母液VI由以下重量份的物質組成：瑞毒酶15～25mg/L、代森銨15～20mg/L、豐碩481 1～1.5mg/L、多胺2～3mg/L；母液V由以下下重量份的物質組成：肉桂酸10～15mg/L、二硫基丙醇10～15mg/L。
在本發明中，進一步的說明，所述母液Ⅰ由下列重量份的物質組成：硝酸銨850～1000mg/L、磷酸二氫鉀120～200mg/L、硝酸鉀900～1000mg/L、氯化鈣300～450mg/L、硫酸鎂200～250mg/L；
所述母液II由下列重量份的物質組成：硫酸鐵0.5～1mg/L、硫酸錳2～4mg/L、鉬酸鈉1.8～2.5mg/L、氯化鈷0.5～1mg/L、硼酸0.5～1mg/L；
所述母液III由下列重量份的物質組成：維生素B10.5～1mg/L、維生素B60.2～0.5mg/L、維生素B50.5～1mg/L、肌醇90～120mg/L；
所述母液Ⅳ由下列重量份的物質組成：抗壞血酸1.5～2.5mg/L、甘氨酸3～4.5mg/L、蔗糖15～30g/L、阿魏酸8～15mg/L、葡萄籽15～10mg/L、香蕉泥200～300g/L、活性炭0.4～1g/L、瓊脂5～7g/L。
在本發明中，進一步的說明，所述的鐵皮石斛生根壯苗培養基，其配制方法為：將母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分別按照各自的重量份配置后，按照體積比為7～10：2～3:2～3:8～10:0.05～0.1：0.05～0.1:0.2～0.8混合，再煮沸調節pH，高壓滅菌20～30min,組培瓶降溫至手感溫度后，加入除菌后的母液VII，冷卻凝固后即得培養基。
在本發明中，進一步的說明，所述鐵皮石斛生根壯苗培養基的pH為5.5～6.5。
在本發明中，進一步的說明，所述高壓蒸汽滅菌，滅菌壓力為180～200KPa。
在本發明中，進一步的說明，所述母液VII的除菌方法采用過濾除菌的方法。
本發明與現有技術相比較具有的有益效果：
1.多胺通過抑制1-氨基環丙烷羧酸的活性從而抑制植物組織乙烯的產生，達到防止幼苗衰老、落葉等問題；多胺可刺激不定根產生，促進根系對無機離子的吸收，加速幼苗的生長；同時，多胺的加入提高了植株的抗逆性和抗滲透脅迫，提高植株抗不利環境的能力。豐碩481不僅具有生長素、細胞分裂素、赤霉素等植物生長調節劑的多種功能，且生理活性更強、使用量更微，成本低、見效快。豐碩481的加入可促進枝葉和根系生長，達到苗齊苗壯，根系發達，增加葉綠素含量，增強光合能力，提高肥水利用率以促進作物生長；同時，增強苗期抗病及抗寒、抗旱能力。這兩者單獨使用時有一定的促進生根、加快生長的效果，當兩者聯合使用效果倍增。
2.瑞梅毒和代森銨的混合使用起到很好的殺蟲滅菌效果，提高鐵皮石斛品質和產量。
3.引起褐變的酶有多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶和過氧化物酶，多酚氧化酶為引起褐變主要的酶，通過抑制酶的活性減少酶促褐變途徑，減少褐變的產生，而本發明在培養基中添加二硫基丙醇和肉桂酸，分別對多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶的活性產生抑制作用，對組培過程中出現的褐變問題起到很好的緩解效果。
具體實施方式
本發明提供了一種鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制的方法，為使本發明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
實施例1
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
一種鐵皮石斛生根壯苗培養基，其配制方法為：將母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分別按照各自的重量份配置后，按照體積比為7：2:2:8:0.05：0.05:0.2混合，再煮沸調節pH為5.5，高壓滅菌20～30min,待組培瓶降溫至手感溫度后，加入除菌后的母液VII，冷卻凝固后即得培養基。
其中，母液Ⅰ由下列重量份的物質組成：硝酸銨850mg/L、磷酸二氫鉀120mg/L、硝酸鉀900mg/L、氯化鈣300mg/L、硫酸鎂200mg/L；
其中，母液II由下列重量份的物質組成：硫酸鐵0.5mg/L、硫酸錳2mg/L、鉬酸鈉1.8mg/L、氯化鈷0.5mg/L、硼酸0.5mg/L；
其中，母液III由下列重量份的物質組成：維生素B10.5mg/L、維生素B60.2mg/L、維生素B50.5mg/L、肌醇90mg/L；
其中，母液Ⅳ由下列重量份的物質組成：抗壞血酸1.5mg/L、甘氨酸3mg/L、蔗糖15mg/L、阿魏酸8mg/L、葡萄籽15mg/L、香蕉泥200mg/L、活性炭0.4mg/L、瓊脂5mg/L。
其中，母液V由以下重量份的物質組成：肉桂酸10mg/L、二硫基丙醇10mg/L。
其中，母液VI由以下重量份的物質組成：瑞毒酶15mg/L、代森銨15mg/L、豐碩481 1mg/L、多胺2mg/L；
其中，母液VII由下列重量份的物質組成：吲哚丁酸0.8mg/L、萘乙酸0.5mg/L。
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量15～20根，根長5cm以上，試管苗株高5cm以上，莖最粗處約為0.65～0.8cm，無黃化衰老、葉片脫落情況，葉片顏色一致，葉片均為光滑綠色，褐變現象極少，僅為1.2％。
鐵皮石斛植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，無病蟲害現象，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，繼續培養觀察10天，鐵皮石斛植株生長狀態受到輕微影響，但整體生長狀況良好，成活率為85％～90％，有少部分植株出現萎蔫、死亡情況。
實施例2
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
一種鐵皮石斛生根壯苗培養基，其配制方法為：將母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分別按照各自的重量份配置后，按照體積比為8：2.5:2.5:9:0.08：0.08:0.6混合，再煮沸調節pH為6，高壓滅菌20～30min,組培瓶降溫至手感溫度后，加入除菌后的母液VII，冷卻凝固后即得培養基。
其中，母液Ⅰ由下列重量份的物質組成：硝酸銨900mg/L、磷酸二氫鉀160mg/L、硝酸鉀950mg/L、氯化鈣400mg/L、硫酸鎂225mg/L；
其中，母液II由下列重量份的物質組成：硫酸鐵0.8mg/L、硫酸錳3mg/L、鉬酸鈉2.2mg/L、氯化鈷0.8mg/L、硼酸0.8mg/L；
其中，母液III由下列重量份的物質組成：維生素B10.8mg/L、維生素B60.3mg/L、維生素B50.8mg/L、肌醇110mg/L；
其中，母液Ⅳ由下列重量份的物質組成：抗壞血酸2mg/L、甘氨酸4mg/L、蔗糖25g/L、阿魏酸12mg/L、葡萄籽18mg/L、香蕉泥250g/L、活性炭0.7g/L、瓊脂6g/L。
其中，母液V由以下重量份的物質組成：肉桂酸12mg/L、二硫基丙醇13mg/L。
其中，母液VI由以下重量份的物質組成：瑞毒酶20mg/L、代森銨18mg/L、豐碩4811.2mg/L、多胺2.5mg/L；
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量15～22根，根長5.4cm以上，試管苗株高5.8cm以上，莖最粗處約為0.65～0.8cm，無黃化衰老、葉片脫落情況，葉片顏色一致，葉片均為光滑綠色，無褐變現象。
鐵皮石斛植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，無病蟲害現象，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，繼續培養觀察10天，鐵皮石斛植株生長狀態受到輕微影響，但整體生長狀況良好，成活率為85％～89％，有少部分植株出現萎蔫、死亡情況。
實施例3
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
一種鐵皮石斛生根壯苗培養基，其配制方法為：將母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI分別按照各自的重量份配置后，按照體積比為10：3:3:10:0.1：0.1:0.8混合，再煮沸調節pH為6.5，高壓滅菌20～30min,組培瓶降溫至手感溫度后，加入除菌后的母液VII，冷卻凝固后即得培養基。
其中，母液Ⅰ由下列重量份的物質組成：硝酸銨1000mg/L、磷酸二氫鉀200mg/L、硝酸鉀1000mg/L、氯化鈣450mg/L、硫酸鎂250mg/L；
其中，母液II由下列重量份的物質組成：硫酸鐵1mg/L、硫酸錳4mg/L、鉬酸鈉2.5mg/L、氯化鈷1mg/L、硼酸1mg/L；
其中，母液III由下列重量份的物質組成：維生素B1 1mg/L、維生素B6 0.5mg/L、維生素B5 1mg/L、肌醇120mg/L；
其中，母液Ⅳ由下列重量份的物質組成：抗壞血酸2.5mg/L、甘氨酸4.5mg/L、蔗糖30g/L、阿魏酸15mg/L、葡萄籽10mg/L、香蕉泥300g/L、活性炭1g/L、瓊脂7g/L。
其中，母液V由以下重量份的物質組成：肉桂酸15mg/L、二硫基丙醇15mg/L。
其中，母液VI由以下重量份的物質組成：瑞毒酶25mg/L、代森銨20mg/L、豐碩481 1.5mg/L、多胺3mg/L；
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量15～18根，根長4.8cm以上，試管苗株高5cm以上，莖最粗處約為0.65～0.8cm，無黃化衰老、葉片脫落情況，葉片顏色一致，葉片均為光滑綠色，無褐變現象。
鐵皮石斛植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，無病蟲害現象，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，繼續培養觀察10天，鐵皮石斛植株生長狀態受到輕微影響，但整體生長狀況良好，成活率為86％～91％，有少部分植株出現萎蔫、死亡情況。
對比例1
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
一種鐵皮石斛生根壯苗培養基，其配制方法為：將母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ和母液VI分別按照各自的重量份配置后，按照體積比為7：2:2:8:0.05：0.05:0.2混合，再煮沸調節pH為5.5，高壓滅菌20～30min,組培瓶降溫至手感溫度后，加入除菌后的母液VII，冷卻凝固后即得培養基。
其中，母液Ⅰ由下列重量份的物質組成：硝酸銨850mg/L、磷酸二氫鉀120mg/L、硝酸鉀900mg/L、氯化鈣300mg/L、硫酸鎂200mg/L；
其中，母液II由下列重量份的物質組成：硫酸鐵0.5mg/L、硫酸錳2mg/L、鉬酸鈉1.8mg/L、氯化鈷0.5mg/L、硼酸0.5mg/L；
其中，母液III由下列重量份的物質組成：維生素B10.5mg/L、維生素B60.2mg/L、維生素B50.5mg/L、肌醇90mg/L；
其中，母液Ⅳ由下列重量份的物質組成：抗壞血酸1.5mg/L、甘氨酸3mg/L、蔗糖15g/L、阿魏酸8mg/L、葡萄籽15mg/L、香蕉泥200g/L、活性炭0.4g/L、瓊脂5g/L。
其中，母液VI由以下重量份的物質組成：瑞毒酶15mg/L、代森銨15mg/L、豐碩481 1mg/L、多胺2mg/L；
其中，母液VII由下列重量份的物質組成：吲哚丁酸0.8mg/L、萘乙酸0.5mg/L。
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量15～20根，根長5cm以上，試管苗株高5cm以上，莖最粗處約為0.58～0.66cm，有41％出現褐變，13％因發生褐變死亡，生長狀態較實施例1差。
選出生長狀態良好的植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，無病蟲害現象，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，繼續培養觀察10天，鐵皮石斛植株生長狀態受到輕微影響，但整體生長狀況良好，成活率為83％～89％，有少部分植株出現萎蔫、死亡情況。
對比例2
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
其中，母液VI由以下重量份的物質組成：豐碩481 1.2mg/L、多胺2.5mg/L，其余與實施例2相同。
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量15～22根，根長5.4cm以上，試管苗株高5.8cm以上，莖最粗處約為0.65～0.8cm，無黃化衰老、葉片脫落情況，葉片顏色一致，葉片均為光滑綠色，22％出現病菌污染現象，無褐變現象。
選出生長狀態良好的植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，有36％出現蟲害現象，選出生長狀態良好，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，繼續培養觀察10天，鐵皮石斛植株生長狀態受到輕微影響，但整體生長狀況良好，成活率為85％～89％，有少部分植株出現萎蔫、死亡情況。
對比例3
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
其中，母液VI由以下重量份的物質組成：瑞毒酶25mg/L、代森銨20mg/L、多胺3mg/L，其余與實施例3相同。
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量11～14根，根長4cm以上，試管苗株高4.6cm以上，莖最粗處約為0.55～0.68cm，無黃化衰老、葉片脫落情況，葉片顏色不一致，有部分葉片為黃綠色，無褐變現象，生長速度、生長狀態較實施例3差。
選出生長狀態良好的植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，無病蟲害現象，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，繼續培養觀察10天，鐵皮石斛植株生長狀態受到影響，成活率為58％～67％，抗不利環境能力較弱。
對比例4
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
其中，母液VI由以下重量份的物質組成：瑞毒酶25mg/L、代森銨20mg/L、豐碩481 1.5mg/L，其余與實施例3相同。
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量14～17根，根長4.5cm以上，試管苗株高4.8cm以上，莖最粗處約為0.6～0.78cm，無黃化衰老、葉片脫落情況，葉片顏色一致，葉片均為光滑綠色，無褐變現象，生長速度較實施例3差。
選出生長狀態良好的植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，無病蟲害現象，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，繼續培養觀察10天，鐵皮石斛植株生長狀態受到影響，成活率為50％～60％，抗不利環境能力較弱。
對比例5
本發明提供的鐵皮石斛生根壯苗培養基及其配制方法如下：
其中，不加母液VI，其余與實施例3相同。
將鐵皮石斛小苗接入所得的培養基中進行培養，在40～60天的培養周期內試管苗根系數量6～8根，根長3.2以上，試管苗株高3.2cm以上，莖最粗處約為0.3～0.42cm，出現黃化衰老、葉片脫落情況，葉片顏色不一致，多為黃綠色，無褐變現象，生長速度、生長狀態明顯比實施例3差。
繼續培養30天，選出生長狀態良好的植株經煉苗后，分4組于適宜的條件下移栽培養10天，成活率為100％，有38％病蟲害現象，選出生長狀態良好的，改變其生長環境，分別為：降低溫度5～10℃、升高溫度5～10℃、空氣濕度降低10％～20％、澆水量減少50％，3天之后開始出現萎蔫、死亡現象，第五天出現大片死亡，存活率僅為11％，存活下來的植株生長狀態差，表現出很弱的抗不利環境能力。
上述說明是針對本發明較佳可行實施例的詳細說明，但實施例并非用以限定本發明的專利申請范圍，凡本發明所提示的技術精神下所完成的同等變化或修飾變更，均應屬于本發明所涵蓋專利范圍。