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一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法與流程

文檔序號:12084581閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)外植體的選擇

選取生長至適宜時期的烏桕花序用于后續培養;

(2)外植體的低溫預處理

將花序裝于自封塑料袋內置于冰箱進行低溫預處理;

(3)外植體的表面消毒

將經過低溫預處理后的花序經流水沖洗后置于無菌操作臺中進行表面消毒;

(4)愈傷組織誘導培養

濾紙吸干步驟(3)中消毒后花序表面的水分,剝取花藥,接種于愈傷組織誘導培養基中,再經過3-4周的光照培養,獲取愈傷組織;

(5)愈傷組織的增殖培養

將步驟(4)中獲得的愈傷組織轉接于增殖培養基中進行增殖培養;

(6)愈傷組織的分化

將步驟(5)中增殖后的愈傷組織切成切塊,轉接于分化培養基中進行愈傷組織的分化培養;

(7)不定芽的伸長

將步驟(6)中已分化出叢生芽的愈傷組織,轉接于不定芽伸長培養基中進行不定芽的伸長培養并獲取相應烏桕幼苗;

(8)不定芽的生根

將步驟(7)中伸長的烏桕幼苗轉接于生根培養基中進行生根培養,最終獲得烏桕再生植株。

2.根據權利要求1所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(1)中生長至適宜時期的烏桕花序為經顯微鏡鏡檢,選取小孢子處于單核中期或單核靠邊期的烏桕花序。

3.根據權利要求1所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(2)中低溫預處理的方法為:將花序置于3-5℃冰箱處理6-24h。

4.根據權利要求1所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(3)中外植體的表面消毒的具體方法為:將花序經流水沖洗20-30min后,于無菌操作臺中用無菌水沖洗3-5遍;再采用70%-75%的乙醇消毒15-20s,無菌水沖洗3-5遍,重復1次;接著,再用添加有0.5-1.0%(v/v)Tween的0.1%(w/v)的升汞消毒60-120s,最后用無菌水再沖洗5-8遍。

5.根據權利要求1所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(4)中花藥的剝取于無菌操作臺中借助尖頭鑷子進行。

6.根據權利要求1所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(4)中愈傷組織誘導培養基為添加有0.6-3.0mg/L TDZ和0.6-3.0mg/L IAA的DKW培養基。

7.根據權利要求1所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(5)中增殖培養基為添加有0.1-0.5mg/L TDZ和1.0-2.0mg/L IAA的DKW培養基。

8.根據權利要求1所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(6)中分化培養基為添加有0.2-0.5mg/L TDZ和0.1-0.5mg/L ZT的DKW培養基。

9.根據權利要求8所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(7)中不定芽伸長培養基為添加有0.05-0.2mg/L ZT的1/2DKW培養基。

10.根據權利要求9所述的一種通過花藥培養獲得烏桕再生植株的方法,其特征在于,所述步驟(8)中生根培養基為添加有0.1-2.0mg/L亞精胺的1/2DKW培養基。

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