本發明屬于生物防治領域，具體涉及枯草芽孢桿菌菌株bab-1在防治瓜類白粉病上的應用。
背景技術：
：瓜類白粉病是瓜類生產上最主要的葉部病害之一，該病害主要由二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)和單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)兩種真菌引起，我國以單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)為主。瓜類白粉病主要危害黃瓜、甜瓜、西葫蘆、南瓜和苦瓜等作物，尤其黃瓜和甜瓜是我國北方溫室主栽蔬菜和水果，其白粉病的發生，嚴重影響黃瓜和甜瓜的產量和品質；通常因白粉病而導致的黃瓜或甜瓜減產約在10％，而流行年份高達30％左右。該病菌從幼苗期到成株期都能侵染瓜類植株，具有流行性強、發病率高、潛育期短和再侵染頻繁的特點，是瓜類生產中亟待解決的問題。瓜類白粉病以化學防治為主，如托布津、粉銹寧、瑞毒銅、多菌靈、氟硅唑、仙生、世高等是用于防治黃瓜白粉病的主要化學農藥。但是長期大量使用化學農藥，具有病原菌容易產生抗藥性，致使防治效果降低，同時容易造成農產品和環境污染、引起新病害或次生病害大發生等問題。生物防治由于具有專化性強、藥效持久性好、不易產生抗藥性、不會造成環境污染以及成本低等優點，日益受到青睞。目前防治瓜類白粉病的微生物主要有：地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis，cn102399712a)、綠色木霉(trichodermaviride，cn101724572a)、黃麻鏈霉菌(streptomycescorchorusii，cn102870821a)枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis，cn1934241a，cn104403970a)、淡紫灰鏈霉菌(strepomyceslavendulae，cn101481669a)、哈茨木霉菌(trichodermaharziamum，cn101575574a)和蕈狀芽孢桿菌(bacillusmycoides，cn105002120a)等，但是商品化的微生物制劑并不多。另外，由于生物多樣性和共同進化作用，需要不斷篩選新的生物微生物，以應對病原菌的生物多樣性和生理小種的不斷進化。專利《一種枯草芽孢桿菌及其菌劑和應用》(cn101148650a)中公開了枯草芽孢桿菌菌株bab-1在防治棉花立枯病菌、小麥紋枯病菌、番茄灰霉病菌、黃瓜灰霉病菌、番茄早疫病菌、黃瓜枯萎病菌、玉米穗腐病菌、小麥赤霉病菌、棉花枯萎病菌、玉米黃斑病菌和小麥全蝕病菌等植物病害上的應用，但是沒有發現將bab-1用于防治瓜類白粉病的報道。技術實現要素：本發明目的在于提供枯草芽孢桿菌菌株bab-1在防治瓜類白粉病上的用途。本發明另一目的在于提供含有bab-1的微生物菌劑在防治瓜類白粉病上的用途。本發明第三目的在于提供利用枯草芽孢桿菌菌株bab-1防治瓜類白粉病的方法。本發明通過以下技術方案實現：本發明提供了枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)菌株bab-1在防治瓜類白粉病上的應用。所述的枯草芽孢桿菌(baci11ussubtilis)菌株bab-1的保藏編號為cgmccno.2099(參見cn101148650a)。上述應用中所述的瓜類白粉病是指黃瓜白粉病或甜瓜白粉病等。上述應用中所述的瓜類白粉病的病原菌為二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)或瓜單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)。本發明還提供了含有枯草芽孢桿菌bab-1的微生物菌劑在防治瓜類白粉病上的應用。所述的微生物菌劑的活性成分為枯草芽孢桿菌bab-1菌體。所述的微生物菌劑為液體制劑。所述的微生物菌劑的制備方法，參見cn101148650a說明書。所述的瓜類白粉病是指黃瓜白粉病或甜瓜白粉病等。所述的瓜類白粉病的病原菌為二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)或瓜單囊殼菌(sphaerothecafuliginea)。本發明還提供了利用含有枯草芽孢桿菌bab-1的微生物菌劑防治瓜類白粉病的方法，包括將含有枯草芽孢桿菌bab-1的微生物菌劑用水稀釋至活菌體數為107cfu/ml，于瓜類白粉病發病前進行葉面噴霧。本發明具有的優點和有益效果：(1)本發明為防治瓜類白粉病提供了一種有效生物防治方法；(2)枯草芽孢桿菌bab-1對瓜類白粉病的藥效高，平均防效在85.0％以上；(3)利用枯草芽孢桿菌bab-1及其菌劑防治瓜類白粉病專化性強，且不易產生抗藥性；(4)本發明涉及的微生物菌劑對人、畜安全，沒有環境污染問題；(5)本發明涉及的微生物菌劑制備方法簡單、成本低、使用簡單。具體實施方式下面以具體實施例來進一步清楚地解釋本發明，但是不以任何方式構成對本發明的限制。下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規方法；下述實施例中的百分含量，如無特別說明，均為重量百分含量。實施例1bab-1微生物菌劑的制備按照如下步驟進行：(1)菌種活化：將保存于-80℃的枯草芽孢桿菌(baci11ussubtilis)菌株bab-1(保藏編號為cgmccno.2099)在lb平板培養基(其組成成分及其重量比為：胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，氯化鈉1g，瓊脂粉15g，水1000ml)上進行活化(30℃)，挑取單菌落在lb斜面培養基(其組成成分及其重量比同lb平板培養基)上在32℃下培養20小時，得活化的菌株；(2)種子液的制備：按常規方法制作lb液體培養基(其組成成分及其重量比為：胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，氯化鈉1g，水1000ml)，在250ml三角瓶中裝入lb培養液100ml，高壓濕熱滅菌，待溫度降到室溫后，每瓶中接入一接種環步驟(1)中活化好的菌株，在30℃、搖床轉速190rpm的條件下進行振蕩培養24h小時，得種子液；(3)蔗糖豆餅培養基的制備：按照重量百分比將蔗糖3.0％，豆餅粉2％，nacl0.1％，caco30.3％，kh2po40.02％和mgso4·7h2o0.03％加入水中，攪拌混合均勻，即得蔗糖豆餅培養基；分裝于500ml三角瓶中，每瓶200ml；在121℃對蔗糖豆餅培養基進行滅菌30分鐘，再降溫到30℃備用；(4)發酵培養：向步驟(3)所得每瓶蔗糖豆餅培養基200ml中接種步驟(2)所得種子液2ml；在30℃、搖床轉速190rpm條件下進行發酵培養36h，以后每隔30分鐘從三角瓶中取樣進行鏡檢，對視野中的芽孢和總菌體數進行計數，并計算芽孢率(芽孢率(％)＝成熟芽孢數/(成熟芽孢數+菌體數)×100)；芽孢率達到90％時停止發酵培養；共發酵培養約48h，得枯草芽孢桿菌bab-1的液體制劑。實施例2bab-1微生物菌劑對黃瓜白粉病防效盆栽對比試驗(一)試驗材料：(1)黃瓜品種：津優1號。(2)黃瓜白粉病病原菌(sphaerothecafuliginea)sf-1分生孢子懸浮液。初始菌株來自河北農業大學，接種用黃瓜白粉病病原菌分生孢子懸浮液由初始菌株在河北省農林科學院植物保護研究所植病生防實驗室擴繁得來。(二)試驗處理：(1)bab-1液體制劑：實施例1制備的bab-1液體制劑的100倍水稀釋液。(2)空白對照：清水。(三)試驗方法：本試驗在河北省農林科學院植物保護研究所植病生防實驗室內進行。在直徑6cm的營養缽中培育津優1號黃瓜苗，育苗基質為蛭石，每個營養缽播種兩粒種子，出苗后留取一棵壯苗。待黃瓜苗子葉完全展平開展試驗。試驗設2個處理，處理1為在黃瓜子葉上噴施實施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液，處理2為空白對照，噴施等量清水；每個處理重復4次，每個重復20株黃瓜苗。在25℃條件下保濕24h，然后噴霧接種黃瓜白粉病病原菌sf-1分生孢子懸浮液(1×105個/ml)，于25℃恒溫培養(光照14小時，黑暗10小時)。待空白對照子葉充分發病后,調查黃瓜子葉白粉病病情并計算病情指數和防效。調查方法、分級標準和防治效果計算方法參照中華人民共和國國家標準農藥田間藥效試驗準則(一)殺菌劑防治黃瓜白粉病(gb/t17980.30-2000)。結果(見表1)經枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)bab-1液體制劑處理的黃瓜子葉的病情指數為1.37，顯著低于空白對照的病情指數31.83，bab-1液體制劑對黃瓜白粉病的防效為95.70％。說明枯草芽孢桿菌菌株bab-1及其bab-1液體制劑對黃瓜白粉病具有突出的防治效果。表1bab-1液體制劑對黃瓜白粉病防效對比試驗結果處理病情指數防效(％)bab-1液體制劑1.37b95.70空白對照31.83a/實施例3bab-1微生物菌劑對黃瓜白粉病防效盆栽對比試驗(一)試驗材料：(1)黃瓜品種：津優1號。(2)黃瓜白粉病病原菌(sphaerothecafuliginea)sf-1分生孢子懸浮液(同實施例2)。(二)試驗處理：(1)bab-1液體制劑：實施例1制備的bab-1液體制劑的100倍水稀釋液；(2)空白對照：清水。(三)試驗方法：本試驗在河北省農林科學院植物保護研究所植病生防實驗室內進行。在直徑6cm的營養缽中培育津優1號黃瓜苗，育苗基質為蛭石，每個營養缽播種兩粒種子，出苗后留取一棵壯苗。待黃瓜苗生長出兩片真葉時移栽到直徑15cm的塑料花盆中(花盆中裝填蛭石與田園土按照1:1比例配成的基質)，在25℃恒溫培養(光照14小時，黑暗10小時)。將黃瓜苗用竹竿支撐固定，待長出5-7片真葉后開展試驗。處理1噴施實施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液；處理2為空白對照，噴施等量清水。每個處理重復4次，每個重復5盆黃瓜苗。在25℃條件下保濕24h；然后噴霧接種黃瓜白粉病病原菌sf-1分生孢子懸浮液(1×105個/ml)，繼續于25℃恒溫培養(光照14小時，黑暗10小時)。待空白對照真葉充分發病后,調查黃瓜真葉白粉病病情并計算病情指數和防效(gb/t17980.30-2000)。結果(見表2)經bab-1液體制劑處理的黃瓜真葉的病情指數為6.42，顯著低于空白對照的病情指數87.05；bab-1液體制劑對黃瓜白粉病的防效為92.62％。說明枯草芽孢桿菌菌株bab-1及其bab-1液體制劑對黃瓜白粉病具有突出的防治效果。表2bab-1液體制劑對黃瓜白粉病防效對比試驗結果處理病情指數防效(％)bab-1液體制劑6.42b92.62空白對照87.05a/實施例4bab-1微生物菌劑對黃瓜白粉病防效田間對比試驗(一)試驗材料：黃瓜品種：津優1號。(二)試驗處理：(1)bab-1液體制劑：實施例1制備的bab-1液體制劑的100倍水稀釋液。(2)化學藥劑：10％苯醚甲環唑水分散粒劑(瑞士先正達作物保護有限公司)。(3)空白對照：清水。(三)試驗方法：本試驗于2015年春季在河北省保定市徐水縣遂城鎮城北莊村楊寶山黃瓜大棚內開展。翻地、施肥、播種、澆水同當地農事操作。試驗設置3個處理，處理1為微生物菌劑，噴施實施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液；處理2為化學藥劑，噴施10％苯醚甲環唑水分散粒劑(瑞士先正達作物保護有限公司生產)800倍水稀釋液；處理3為空白對照，噴施等量清水；每個處理重復4次，每個重復3行，每行約25棵黃瓜苗。在黃瓜白粉病發病之前開始試驗，間隔7-10天處理一次，直到空白對照充分發病，調查黃瓜白粉病病情并計算病情指數和防效(gb/t17980.30-2000)。結果(見表3)經bab-1液體制劑處理的病情指數為6.28，顯著低于空白對照的病情指數76.25；bab-1液體制劑對黃瓜白粉病的防效達91.76％，優于化學藥劑的防治效果89.04％。說明枯草芽孢桿菌菌株bab-1及其液體制劑對黃瓜白粉病具有突出的防治效果。表3bab-1液體制劑對黃瓜白粉病防效對比試驗結果處理病情指數防效(％)bab-1液體制劑6.28bc91.76化學藥劑8.36b89.04空白對照76.25a/實施例5bab-1微生物菌劑對甜瓜白粉病防效田間對比試驗(一)試驗材料：甜瓜品種：玉金香和紅瑞紅，購自河北農業大學科技市場種子銷售處。(二)試驗處理：(1)bab-1液體制劑：實施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液。(2)化學藥劑：10％苯醚甲環唑水分散粒劑(來源同實施例4)。(3)空白對照：清水。(三)試驗方法：本試驗于2015年春季在河北省保定市清苑縣張登店村劉鐵軍甜瓜大棚內開展。試驗在兩個甜瓜品種上同時開展。試驗設置3個處理，處理1為微生物菌劑，噴施實施例1制備的bab-1液體制劑100倍水稀釋液；處理2為化學藥劑，噴施10％苯醚甲環唑水分散粒劑(瑞士先正達作物保護有限公司生產)800倍水稀釋液；處理3為空白對照，噴施等量清水。每個處理重復4次，每個重復3行，每行20棵甜瓜苗。在甜瓜白粉病發病之前開始試驗，間隔7-10天處理一次，直到空白對照充分發病，調查甜瓜白粉病病情并計算病情指數和防效(參照gb/t17980.30-2000)。結果(見表4)在甜瓜品種玉金香的田間小區試驗中，經bab-1液體制劑處理和化學藥劑處理的病情指數分別為11.1和13.0，顯著低于空白對照的病情指數(100.0)，防治效果分別為88.9％和87.0％；在甜瓜品種紅瑞紅的田間小區試驗中，經bab-1液體制劑處理和化學藥劑處理的病情指數分別為11.7和12.2，顯著低于空白對照的病情指數100.0，防治效果分別為88.3％和87.8％。說明bab-1及其bab-1液體制劑對甜瓜白粉病具有很好的防治效果。表4bab-1液體制劑對甜瓜白粉病防效對比試驗結果當前第1頁12