本發明屬于香蕉組織培養技術領域,尤其涉及一種高誘導率的香蕉花藥組織培養方法。
背景技術:
香蕉(學名:Musa nana Lour.)芭蕉科芭蕉屬植物,又指其果實。熱帶地區廣泛栽培食用。香蕉味香、富含營養,終年可收獲,在溫帶地區也很受重視。植株為大型草本,從根狀莖發出,由葉鞘下部形成高3~6公尺(10~20尺)的假桿;葉長圓形至橢圓形,有的長達3~3.5公尺(10~11.5尺),寬65公分(26寸),10~20枚簇生莖頂。穗狀花序下垂[1],由假桿頂端抽出,花多數,淡黃色;果序彎垂,結果10~20串,約50~150個。植株結果后枯死,由根狀莖長出的吸根繼續繁殖,每一根株可活多年。原產亞洲東南部:中國臺灣、海南、廣東、廣西等地區均有栽培。目前香蕉是一種廣受歡迎的水果,也是部分地區的主要糧食,擁有極大市場需求量,對香蕉進行快速繁殖的研究具有一定的必要性,不僅能解決龐大的市場需求量,也能在一定程度上保存優良的香蕉品種,組織培養是香蕉快速繁殖的方法之一,然而現有的香蕉培養方法中的誘導率已經無法滿足日漸增長的市場需求。
稀土元素是17種特殊的元素的統稱,它的得名是因為瑞典科學家在提取稀土元素時應用了稀土化合物,所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱,稀土是從18世紀末開始陸續發現,當時人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土,例如,將氧化鋁稱為“陶土”,氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態分離出來的,當時比較稀少,因而得名為稀土(Rare Earth,簡稱RE或R),然而經過大量的科學研究,在組織培養當中添加了稀土元素會大大地提高組織培養的質量。
鈰是周期系第ΙΙΙ族副族鑭系元素,一種稀土元素。原子序數58。穩定同位素:136、138、140、142。灰色金屬,有展性。密度:正方晶體6.9,立方晶體6.7。熔點799℃,沸點3426℃。鈰是一種銀灰色的活潑金屬,粉末在空氣中易自燃,易溶于酸。鈰的名稱來源于小行星谷神星的英文名。鈰在地殼中的含量約0.0046%,是稀土元素中豐度最高的。
技術實現要素:
基于現有技術中香蕉的需求量巨大但供給品質參差不齊,且現有培養基的誘導效率低的問題,本發明提供一種高誘導率的香蕉花藥組織培養方法,其以N6培養基為基礎培養基,調整了培養基中激素配方和添加了稀土元素,并在后期誘導培養中添加增強顏色光源,極大地提高了香蕉花藥的誘導率,本發明具有誘導率高和成本低的優點。
一種高誘導率的香蕉花藥組織培養方法,其包括以下步驟:
步驟S10,按以下配方配制培養基:以N6培養基為基礎培養基,添加TDZ (噻苯隆)的濃度為0.5mg/L、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的濃度為2.5 mg/L、活性炭的濃度為0.15 mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L,維生素的濃度為0.3mg/L,瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L;
步驟S20,選擇品質優良、健康的香蕉作為母本,除去花上的苞片和花瓣,在超凈工作臺中對花使用75%酒精消毒2分鐘,倒掉酒精,再用0.1%升汞,另加2~3滴吐溫80,消毒20~30分鐘,最后用無菌水沖洗4遍;
步驟S30,將消毒完的花使用手術刀切開并取出花藥,鋪灑在配制好的培養基中,將組培瓶密封取出,并轉移到組培室中;
步驟S40,將組培室中的環境溫度調整為27℃~31℃,使用自然光培養一周,一周后調整光源為800~1000Lxs,光照時間為光照16小時/黑暗8小時;
步驟S50,在接種后一周內添加紅色增強光源,一周之后增加藍色增強光源。
其中,所述的步驟S10中還包括步驟S11,對培養基進行121℃的高溫蒸汽滅菌20分鐘。
其中,所述的步驟S50中的增強光源是LED燈,紅色增強光源是紅色LED燈,藍色增強光源藍色LED燈。
其中,所述的步驟S50中的紅色光源是波段為650nm-670nm的紅光,藍色光源是波段為450nm-470nm的藍光。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步的描述。
一種高誘導率的香蕉花藥組織培養方法,其包括以下步驟:
步驟S10,按以下配方配制培養基:以N6培養基為基礎培養基,添加TDZ (噻苯隆)的濃度為0.5mg/L、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的濃度為2.5 mg/L、活性炭的濃度為0.15 mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L,維生素的濃度為0.3mg/L,瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L,然后執行步驟S11,對培養基進行121℃的高溫蒸汽滅菌20分鐘;
步驟S20,選擇品質優良、健康的香蕉作為母本,除去花上的苞片和花瓣,在超凈工作臺中對花使用75%酒精消毒2分鐘,倒掉酒精,再用0.1%升汞,另加2~3滴吐溫80,消毒20~30分鐘,最后用無菌水沖洗4遍;
步驟S30,將消毒完的花使用手術刀切開并取出花藥,鋪灑在配制好的培養基中,將組培瓶密封取出,并轉移到組培室中;
步驟S40,將組培室中的環境溫度調整為27℃~31℃,使用自然光培養一周,一周后調整光源為800~1000Lxs,光照時間為光照16小時/黑暗8小時;
步驟S50,在接種后一周內添加紅色增強光源,紅色光源是波段為660nm的紅光LED燈,一周之后增加藍色增強光源,藍色光源是波段為460nm的藍光LED燈。
將已經消毒的外植體分別接種到N6培養基中進行常規組織培養作為對照組,然后設置實驗組使用本發明提供的組織培養方法,20天后統計誘導率得出對照組的誘導率為86%,實驗組誘導率為98%,實驗組誘導率遠遠高于對照組。
以上所述實施例僅表達了本發明的一種實施方式,其描述較為具體和詳細,但并不能因此而理解為對本發明專利范圍的限制。應當指出的是,對于本領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明構思的前提下,還可以做出若干變形和改進,這些都屬于本發明的保護范圍。因此,本發明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。