本發明涉及一種降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，該方法包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害，屬于農藥應用技術領域。
背景技術：
噻唑鋅，其化學名稱為2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑鋅，噻唑鋅的結構由二個基團組成殺菌，一是噻唑基團，在植物體外對細菌無抑制力，但在植物體內卻是高效的治療劑，藥劑在植株的孔紋導管中，細菌受到嚴重損害，其細胞壁變薄繼而瓦解，導致細菌的死亡；二是鋅離子，具有既殺真菌又殺細菌的作用，藥劑中的鋅離子與病原菌細胞膜表面上的陽離子(h+，k+等)交換，導致病菌細胞膜上的蛋白質凝固殺死病菌，部分鋅離子滲透進入病原菌細胞內，與某些酶結合，影響其活性，導致機能失調，病菌因而衰竭死亡；在二個基團的共同作用下，殺病菌更徹底，防治效果更好，防治對象更廣泛。
中國農藥信息網顯示40％噻唑鋅懸浮劑農藥登記證號:pd20151347，該產品的電子標簽(中國農藥信息網數據中心登記信息中可查閱)顯示，每季作物最多施藥3次，然而隨著噻唑鋅的多年使用，40％噻唑鋅懸浮劑在防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的作物細菌性病害如黃單胞菌屬植物病原細菌引起的水稻白葉枯病(稻黃單胞水稻致病變種)，假單胞菌屬植物病原細菌引起的黃瓜細菌性角斑病(丁香假單胞菌黃瓜角斑治病型)、馬鈴薯青枯病(青枯假單胞菌)、歐文氏菌屬植物病原物細菌引起的大白菜軟腐病(胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜軟腐致病型)、韌皮部桿菌屬植物病原細菌引起的柑橘黃龍病(亞洲韌皮桿菌)，每季作物隨著使用次數的增多，防治效果大幅度下降，如下表所示：
表140％噻唑鋅sc防治部分革蘭氏陰性植物病原細菌引起的作物細菌性病害單季作物用藥4次每次防治效果調查表(2016年，廣東地區，ga.i./畝表示每畝有效成分用量的克數，mga.i./千克表示每千克使用藥液中中含有有效成分毫克數)
表2為了能保證第二至第四次施藥達到相應的防治效果，實際應用中需要大幅度增加噻唑鋅的用量(2016年，廣東地區；ga.i./畝表示每畝有效成分用量的克數，mga.i./千克表示每千克使用藥液中中含有有效成分毫克數)
單季作物第二次使用40％噻唑鋅懸浮劑用量相對于第一次增加50％，防治效果卻略有降低，第三次使用時用量相對于第一次增加100％，防治效果相對于第一次施藥卻下降不少，用量的增加提高了使用成本，增加的資源的浪費和環境風險。
聚六亞甲基雙胍是一種由英國aveciago公司研制的被公認為21世紀最安全高效的廣譜抗菌劑，無色無味，用量低，廣譜低毒，作用速度快，泡沫量低，并且能后在在物品表面形成一層陽離子持續長時間的抑菌，并且不會致生成抗菌細菌特性，其安全性得到美國fda和epa認可，其對小鼠類的半致死量ld50>5000mg/kg，屬實際無毒級。由于聚六亞甲基雙胍作為陽離子殺菌劑在農業領域應用中，可迅速吸附于細菌細胞表面，快速攻擊破壞細胞質膜，使胞漿成份滲漏，從而達到最佳的殺菌滅毒效果，將致病菌、病毒斬草除根。常見的其衍生物如聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽(poly(hexamethylenebiguanide)hydrochloride)。
實際的農藥經驗已經表明，重復且專一施用噻唑鋅活性化合物來防治革蘭氏陰性菌菌引起的作物細菌性病害將導致菌株的快速選擇性，增加噻唑鋅用藥量和防治成本，增加環境風險，不利于我國農藥使用零增長目標的實現。
技術實現要素：
本發明目的是提供一種降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，該方法包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害。
本發明通過以下技術方案實現：
一種降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，該方法包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害；其中噻唑鋅和聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽的質量份數比例為：1:0.02～20，優選比例為1:0.1～5，更優比例為40:3、20:1、10:1；還包括用植物生長調節劑與有效成分噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽一同施用提高防治效果；還包括用植物健康劑與有效成分噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽一同施用提高植物免疫力。
所述的植物生長調節劑，選自萘乙酸、萘乙酸鈉、吲哚丁酸、吲哚丁酸鈉、蕓苔素內酯、丙酰蕓苔素內酯、芐氨基嘌呤、羥烯腺嘌呤、赤霉酸、噻唑鋅、胺鮮酯、阿司匹林、氯吡脲、噻苯隆、2-誘抗素、調環酸鈣、復硝酚鈉、甲哌鎓、多效唑、烯效唑、1-甲基環丙烯、幾丁聚糖、超敏蛋白、氨基寡糖素、三十烷醇、氯化膽堿、冠菌素中的一種或幾種。
所述的植物健康劑，選自吡唑醚菌酯、嘧菌酯、醚菌酯、嘧菌酯、啶氧菌酯、肟菌酯、丁香菌酯、苯醚菌酯、苯氧菌胺、烯肟菌酯、唑菌酯、氰烯菌酯中的一種或幾種。
噻唑鋅和聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害，需要通過一定的技術手段加工成農業上常用的劑型如水懸浮劑、可分散油懸浮劑、水分散粒劑、可濕性粉劑、顆粒劑、水乳劑、微乳劑等農業上常用的劑型，便于將噻唑鋅和聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽使用。
所述的助劑除含有水楊酸及其鹽、乙酰水楊酸及其鹽中的一種或幾種外，還含有分散劑、崩解劑、潤濕劑、固體載體或液體載體、增稠劑、防凍劑、乳化劑中的一種或幾種。
所述的傷口愈合劑含有腐殖酸、葡萄糖、萘乙酸、萘乙酸鈉、吲哚丁酸、吲哚丁酸納、蕓苔素內酯中的一種或幾種。
本發明具有如下有益效果：
1、一種降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，該方法包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害，使用該方法顯著降低革蘭氏陰性植物病原物細菌對噻唑鋅及噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽混合物的耐藥性，降低農藥使用量，而噻唑鋅與銅制劑、抗生素類、多糖類殺細菌劑混合，則不具有這種有益效果。
2、進一步的，一種降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，該方法包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害，其中噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽對革蘭氏陰性植物病原細菌有協同作用，提高對由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害的防治效果。
3、更進一步的，所述的降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害，還包括用植物健康劑與有效成分噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽一同施用提高植物免疫力。
4、更進一步的，根據權利要求1所述的降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害，還包括用植物生長調節劑與有效成分噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽一同施用提高防治效果。
具體實施方式
為了使本發明的目的、技術方案及優點更加簡潔明了，本發明用以下具體實施例進行說明，但本發明絕非僅限于這些例子。以下所述僅為本發明較好的實施例，僅僅用于描述本發明，不能理解為對本發明的范圍的限制。應當指出的是，凡在本發明的精神和原則之內所做的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
一種降低革蘭氏陰性植物病原細菌對噻唑鋅耐藥性的方法，該方法包括用噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分一同施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害；其中噻唑鋅和聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽的質量份數比例為：1:0.02～20，優選比例為1:0.1～5，更優比例為40:3、20:1、10:1；還包括用植物生長調節劑與有效成分噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽一同施用提高防治效果；還包括用植物健康劑與有效成分噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽一同施用提高植物免疫力。
所述的植物生長調節劑，選自萘乙酸、萘乙酸鈉、吲哚丁酸、吲哚丁酸鈉、蕓苔素內酯、丙酰蕓苔素內酯、芐氨基嘌呤、羥烯腺嘌呤、赤霉酸、噻唑鋅、胺鮮酯、阿司匹林、氯吡脲、噻苯隆、2-誘抗素、調環酸鈣、復硝酚鈉、甲哌鎓、多效唑、烯效唑、1-甲基環丙烯、幾丁聚糖、超敏蛋白、氨基寡糖素、三十烷醇、氯化膽堿、冠菌素中的一種或幾種。
所述的植物健康劑，選自吡唑醚菌酯、嘧菌酯、醚菌酯、嘧菌酯、啶氧菌酯、肟菌酯、丁香菌酯、苯醚菌酯、苯氧菌胺、烯肟菌酯、唑菌酯、氰烯菌酯中的一種或幾種。
噻唑鋅和聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽作為有效成分施用防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的細菌性病害，需要通過一定的技術手段加工成農業上常用的劑型如水懸浮劑、可分散油懸浮劑、水分散粒劑、可濕性粉劑、顆粒劑、水乳劑、微乳劑等農業上常用的劑型，便于將噻唑鋅和聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽使用。
所述的助劑除含有水楊酸及其鹽、乙酰水楊酸及其鹽中的一種或幾種外，還含有分散劑、崩解劑、潤濕劑、固體載體或液體載體、增稠劑、防凍劑、乳化劑中的一種或幾種。
所述的傷口愈合劑含有腐殖酸、葡萄糖、萘乙酸、萘乙酸鈉、吲哚丁酸、吲哚丁酸納、蕓苔素內酯中的一種或幾種。
實施例1：水分散粒劑劑型按重量百分數組成為：噻唑鋅0.01～30％，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽0.01～20％、分散劑0.1～12％、崩解劑0.1～11％、潤濕劑0.1～7％，固體載體補足至100％。具體生產步驟為：將有效成分和其它助劑混合均勻，用超微氣流粉碎機粉碎，經捏合，然后加入流化床造粒干燥機中進行造粒、干燥、篩分，制得相應重量百分含量的水分散粒劑。
實施例2：可濕性粉劑劑型按重量百分數組成為：噻唑鋅0.01～30％，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽0.01～20％、分散劑0.1～12％、濕潤劑0.1～14％，固體載體補足至100％。具體生產步驟為：將有效成分和其它助劑混合，機械粉碎后再經氣流粉碎，混合均勻，制得相應重量百分含量的可濕性粉劑。
實施例3：水懸浮劑劑型按重量百分數組成為：噻唑鋅0.1～30％，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽0.1～20％、有效成分總含量不大于40％，分散劑0.2～15％、濕潤劑0.2～13％、增稠劑0.1～1％、防凍劑0.1～3％，去離子水載體補足至100％。具體生產步驟為：將有效成分和其它助劑混合，經高速剪切分散、砂磨機中砂磨后，在水系介質中形成高分散、穩定的懸浮體系，制得相應重量百分含量的懸浮劑。
實施例4：油懸浮劑劑型按重量百分數組成為：噻唑鋅0.1～30％，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽0.1～20％、有效成分總含量不大于40％，分散劑0.2～16％、濕潤劑0.2～13％、增稠劑0.1～1％、防凍劑0.1～4％，油性載體載體補足至100％。具體生產步驟為：將有效成分和其它助劑混合，經高速剪切分散、砂磨機中砂磨后，在油系介質中形成高分散、穩定的懸浮體系，制得相應重量百分含量的懸浮劑。
實施例5：微乳劑劑型按重量百分數組成為：噻唑鋅0.1～30％，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽0.1～20％、有效成分總含量不大于40％，分散劑0.2～13％、溶劑0.2～20％、濕潤劑0.2～8％、增稠劑0.1～2％、防凍劑0.1～3％、乳化劑0.2～15％、溶劑0.2～10％、去離子水載體補足至100％。具體生產步驟為：將噻唑鋅、乳化劑、分散劑、增稠劑、防凍劑、溶劑有混合后用去離子水補足至100％，高速剪切乳化后分散后制得噻唑鋅水乳劑備用。
實施例6：水乳劑劑型按重量百分數組成為：噻唑鋅0.1～30％，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽0.1～20％、有效成分總含量不大于40％，分散劑0.2～14％、濕潤劑0.2～11％、增稠劑0.1～3％、防凍劑0.1～4％、乳化劑0.2～13％、溶劑0.2～20％、去離子水載體補足至100％。具體生產步驟為：將噻唑鋅、乳化劑、分散劑、增稠劑、防凍劑、溶劑有混合后用去離子水補足至100％，高速剪切乳化后分散后制得噻唑鋅水乳劑備用。
實施例7：顆粒劑劑型按重量百分數組成為：噻唑鋅0.01～5％，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽0.01～1％、分散劑0.1～15％、濕潤劑0.1～10％、粘結劑0.1～14％、載體補足至100％。具體生產步驟為：具體生產步驟為：將活性成分和其它助劑混合均勻，用超微氣流粉碎機粉碎，經捏合，然后加入流化床造粒干燥機中進行造粒、干燥、篩分，制得相應重量百分含量的顆粒劑。
上述實施例中：
所述的消泡劑可以是硅酮類化合物、環氧大豆油、甲醇、硅油等中的一種或幾種。
所述的防凍劑可以是甘油、丙二醇、二甘醇、尿素等中一種或幾種。
所述的濕潤劑可以是十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、丁基萘磺酸鈉、烷基磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉、無患子粉、麥麩、高粱淀粉、蕎麥粉等中的一種或幾種。
所述的分散劑可以是烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物、萘磺酸鹽甲醛縮合物、對甲氧基脂肪酰胺基苯磺酸、木質素磺酸鹽、聚羧酸鹽、烷基酚聚氧乙烯醚硫酸鹽、烷基苯磺酸鈣鹽、脂肪酸酯硫酸鹽、烷基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙二醇硬脂酸酯、山梨糖醇油酸酯、二丁基萘磺酸鈉、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段聚合物等中的一種或幾種。
所述的崩解劑可以是羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯聚維酮、殼聚糖、海藻酸鈉碳酸氫鈉、氯化鎂、氯化鋁、氯化鈉、尿素、硫酸銨、膨潤土等中的一種或幾種。
所述的固體載體可以是輕質碳酸鈣、陶土、高嶺土、硅藻土、膨潤土、白炭黑、粘土、凹凸棒土、滑石粉、石英沙、木粉、胡桃殼粉、木質素、麥麩、稻糠、木屑等中的一種或幾種。
所述的粘結劑可以是蔗糖、聚乙烯醇、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈣、羧丙基纖維素、糊精、淀粉糊精、聚乙烯吡咯烷酮、粘性高嶺土、石蠟、松香、木粉等中的一種或幾種。
所述乳化劑可以是農乳33#、農乳34#、農乳500#、農乳600#、農乳700#、農乳1601#、農乳1602#、t60、s80、tx-10、op-10、np-10、壬基酚聚氧乙烯(eo＝10)醚磷酸酯、三苯乙基苯酚聚氧乙烯醚磷酸酯、bbm-3、環氧氯丙烷。
所述溶劑或液體載體可以是甲苯、二甲苯、三甲苯、溶劑油s-150、溶劑油s-200、乙醇、異丙醇、正丁醇、正辛醇、正戊醇、丙酮、環己酮、己烷、二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、油酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯、醋酸仲丁酯。
所述的油系介質是花生油、玉米油、葵花油、棕櫚油、油酸甲酯、椰子油、蓖麻油、菜籽油、大豆油、松節油中的一種或幾種。
中國農藥信息網顯示40％噻唑鋅懸浮劑農藥登記證號:pd20151347，該產品的電子標簽(中國農藥信息網數據中心登記信息中可查閱)顯示，每季作物最多施藥3次，然而隨著噻唑鋅的多年使用，40％噻唑鋅懸浮劑在防治由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的作物細菌性病害如黃單胞菌屬植物病原細菌引起的水稻白葉枯病(稻黃單胞水稻致病變種)，假單胞菌屬植物病原細菌引起的黃瓜細菌性角斑病(丁香假單胞菌黃瓜角斑治病型)、馬鈴薯青枯病(青枯假單胞菌)、歐文氏菌屬植物病原物細菌引起的大白菜軟腐病(胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜軟腐致病型)、韌皮部桿菌屬植物病原細菌引起的柑橘黃龍病(亞洲韌皮桿菌)，每季作物隨著使用次數的增多，防治效果大幅度下降，表3、表4舉例說明：
表340％噻唑鋅懸浮劑防治部分革蘭氏陰性植物病原細菌引起的作物細菌性病害單季作物用藥4次每次防治效果調查表(2016年，廣東地區，ga.i./畝表示每畝有效成分用量的克數，mga.i./千克表示每千克使用藥液中中含有有效成分毫克數,差異性比較為同一種病害不同施藥次數之間在0.05水平上的比較，不同病害未進行比較，采用dpsv14.10統計軟件進行分析)
表3數據顯示，單季作物用藥40％噻唑鋅懸浮劑按不同劑量對不同作物細菌性4次，第一次至第四次藥后10天的防治效果均存在顯著差異，防治效果顯著遞減。
為了能保證第二至第四次施藥達到相應的防治效果，實際應用中需要大幅度增加噻唑鋅的用量。
表440％噻唑鋅懸浮劑不同時間段不同劑量防治細菌性病害的防治效果(2016年，廣東地區；ga.i./畝表示每畝有效成分用量的克數，mga.i./千克表示每千克使用藥液中中含有有效成分毫克數)
單季作物第二次使用40％噻唑鋅懸浮劑用量相對于第一次增加50％，防治效果卻略有降低，第三次使用時用量相對于第一次增加100％，防治效果相對于第一次施藥卻下降不少。
而當噻唑鋅中加入適量的聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽后，單季作物4次使用每次藥后10天調查防治細菌性病害的防治效果并無顯著差異，均能取得較好的防治效果，表5、表6、表7、表8、表9、表10、
表11舉例說明
表5單季作物噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽不同施用比例對水稻白葉枯病不同防治階段的防治效果
表6單季作物噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽不同施用比例對黃瓜細菌性角斑病不同防治階段的防治效果
表7單季作物噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽不同施用比例對馬鈴薯青枯病不同防治階段的防治效果
表8單季作物噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽不同施用比例對大白菜軟腐病不同防治階段的防治效果
表9單季作物噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽不同施用比例對煙草野火病不同防治階段的防治效果
表10單季作物噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽不同施用比例對柑橘潰瘍病不同防治階段的防治效果
表11單季作物噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽不同施用比例對柑橘黃龍病不同防治階段的防治效果
噻唑鋅中加入適量的銅制劑、抗生素、多糖類殺細菌劑并不能改變植物病原物細菌的耐藥性，表12、表13、表14、表15、表16、表17舉例說明。
表12噻唑鋅與喹啉銅混合使用
表13噻唑鋅與王銅混合使用
表14噻唑鋅與中生菌素混合使用
表15噻唑鋅與梧寧霉素混合使用
表16噻唑鋅與幾丁聚糖混合使用
表17噻唑鋅與氨基寡糖素混合使用
colby等式用于確定混合物的期望的效果(colby,s.r.weeds1967,15,20-22.calculationofthesynergisticandantagonisticresponseofherbicidecombinations)：
下述等式用于計算含有兩種活性成分a和b的混合物的期望值：
式中：
a＝所觀測到的混合物所用的相同(劑量)濃度的活性成分a的功效；
b＝所觀測到的混合物所用的相同(劑量)濃度的活性成分b的功效。
觀測值為實際觀測到的病指防效，當混合物所用濃度(劑量)活性實際觀察值(e)大于期望值(e0)時，混合物表現為對靶標具有意料不到的協同作用。
噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽混用對由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的植物細菌性病害具有協同作用，如表18、表19舉例說明。
表18莖葉處理用于防治黃瓜細菌性角斑病、馬鈴薯青枯病(第一次施藥)，噴霧，藥后10天，e-e0大于零，觀測值大于預期值。
表19莖葉處理用于防治柑橘黃龍病、柑橘潰瘍病(第一次施藥)，噴霧，藥后10天，e-e0大于零，觀測值大于預期值。
噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽混合物與植物生長調節劑組合使用對由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的植物細菌性病害具有協同作用，表20舉例說明。
表20莖葉處理用于防治黃瓜細菌性角斑病、馬鈴薯青枯病(第一次施藥)，噴霧，藥后10天，e-e0大于零，觀測值大于預期值。
噻唑鋅與聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽混合物與植物生長調節劑組合使用對由革蘭氏陰性植物病原細菌引起的植物細菌性病害具有協同作用，表21舉例說明。
表21莖葉處理用于防治黃瓜細菌性角斑病、馬鈴薯青枯病(第一次施藥)，噴霧，藥后10天，e-e0大于零，觀測值大于預期值。