本發明涉及一種鐵皮石斛的栽培方法，特別是一種多糖含量高的鐵皮石斛的提取方法。
背景技術：
鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內障等方面均有良好療效。
現代藥理學研究表明，鐵皮石斛對非特異性及特異性免疫均有增強作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學成分較復雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。多糖類成分是藥用石斛發揮免疫活性作用的重要物質基礎，鐵皮石斛多糖能顯著提高外周白細胞數，促進淋巴細胞產生移動抑制因子，可有效提高機體免疫力。2010版《藥典》首次收載了鐵皮石斛的質量標準，對多糖以及甘露糖進行含量測定。
隨著鐵皮石斛的保健功效被人們廣泛的認識和接受，野生鐵皮石斛已遠遠不能滿足人們的需求。人們已經開始采用人工栽培鐵皮石斛，鐵皮石斛的栽培方法中，培養基是鐵皮石斛賴以生存的條件，不同的培養原料和配方可對鐵皮石斛的生長、產量和活性成分等產生重要的影響。現有技術中鐵皮石斛用的培養基及現有栽培方法，不利于產出的鐵皮石斛的品質保證。特別是不能保證鐵皮石斛中多糖的含量，使得最終得到的鐵皮石斛中多糖含量低。
技術實現要素：
本發明的目的，是提供一種鐵皮石斛的種植方法，本發明方法種植鐵皮石斛時，最終采摘的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是多糖的含量的高。
本發明是這樣實現的。一種鐵皮石斛的種植方法，包括a、種子萌發，b、幼苗培育，c、幼苗移栽，d、管理。
前述的鐵皮石斛的種植方法，具體包括以下步驟：
(1)種子萌發：取鐵皮石斛種子，洗凈后，在超凈工作臺上采用70-80％的乙醇消毒5-15min后，再用無菌水沖洗3-4次，置于滅菌的濾紙上吸干后，接種到萌發培養基上，在晝溫為20-25℃，夜溫18-20℃，暗培養，直至種子萌發；
(2)幼苗培育：待種子萌發后，將1-2cm高的單苗接種到增殖培養基上，在23-28℃，光強1500-2500lx下每天光照9-10h，直至鐵皮石斛苗高為5-8cm；
(3)幼苗移栽：移栽時間為4-6月，苗高為5-8cm的鐵皮石斛苗，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，按行距為10-15cm鐵皮石斛苗種于基質中，確保基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；
(4)管理：
a.澆水：采用噴施方式，澆水次數為1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次；
b.夏天采用70-80％遮陽度的遮陽網進行遮陽；
c.溫濕度控制：控制空氣濕度為60-70％，溫度為20-25℃；
d.化肥做追肥分三次施用，第一次在幼苗移栽之后2-3個月，第二次在幼苗移栽之后4-5個月，第三次在幼苗移栽之后6個月；
(5)11月至次年3月，采收，即可。
前述的鐵皮石斛的種植方法，所述步驟(1)中，所述萌發培養基主要由按重量份計算的蔗糖3-6份、瓊脂5-15份、丹參10-20份和麥冬10-20份按下述方法制成：丹參和麥冬加10-12倍量的水煎煮2-3h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、瓊脂混勻，即得。
前述的鐵皮石斛的種植方法，所述萌發培養基主要由按重量份計算的蔗糖5份、瓊脂10份、丹參15份和麥冬15份按下述方法制成：丹參和麥冬加11倍量的水煎煮2.5h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、瓊脂混勻，即得。
前述的鐵皮石斛的種植方法，所述步驟(2)中，所述增殖培養基主要由按重量份計算的蔗糖3-6份、紅薯泥10-20份、黃豆渣5-15份、牛滕5-15份、杜仲10-20份、細辛5-15份、獨活5-15份、當歸10-20份和麻黃10-20份按下述方法制成：牛滕、杜仲、細辛、獨活、當歸和麻黃加10-12倍量的水煎煮2-3h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、黃豆渣混勻，即得。
前述的鐵皮石斛的種植方法，所述增殖培養基主要由按重量份計算的蔗糖5份、紅薯泥15份、黃豆渣10份、牛滕10份、杜仲15份、細辛10份、獨活10份、當歸15份和麻黃15份按下述方法制成：牛滕、杜仲、細辛、獨活、當歸和麻黃加11倍量的水煎煮2.5h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥和黃豆渣混勻，即得。
前述的鐵皮石斛的種植方法，所述步驟(3)中，所述基質主要由按重量份計算的蔗糖3-6份、紅薯泥10-20份、土豆泥10-20份、玉米糊5-15份、黃豆渣5-15份、熟地10-20份、丹皮5-15份、苦參10-20份、女貞子5-15份和吳茱萸10-20份按下述方法制成：熟地、丹皮、苦參、女貞子和吳茱萸加10-12倍量的水煎煮2-3h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、土豆泥、玉米糊和黃豆渣混勻，即得。
前述的鐵皮石斛的種植方法，所述基質主要由按重量份計算的蔗糖5份、紅薯泥15份、土豆泥15份、玉米糊10份、黃豆渣10份、熟地15份、丹皮10份、苦參15份、女貞子10份和吳茱萸15份按下述方法制成：熟地、丹皮、苦參、女貞子和吳茱萸加10-12倍量的水煎煮2-3h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、土豆泥、玉米糊和黃豆渣混勻，即得。
前述的鐵皮石斛的種植方法，所述步驟(4)中，所述化肥為氮肥，按n計算，施用量為138-207kg/hm2，分兩次施肥，第一次為種肥，施用量占總n量的2/10，第二次為追肥，施用量占總n量的3/10，第三次為追肥，施用量占總n量的5/10。
申請人對本發明進行了大量的實驗研究，部分實驗如下：
實驗例1多糖含量考察.
1材料與方法
1.1材料
1.1.1鐵皮石斛1：按實施例1進行種植，采摘，即得。
1.1.2鐵皮石斛2：按實施例1進行種植，萌發培養基中不含丹參和麥冬，增殖培養基中不含牛滕、杜仲、細辛、獨活、當歸和麻黃，基質中不含熟地、丹皮、苦參、女貞子和吳茱萸，其余方法同實施例1。
1.2儀器和試劑
葡萄糖標準品[d一(+)一葡萄糖]：kayon公司；甲醇(色譜純)：天津市科密歐化學試劑有限公司；其余試劑均為分析純；苯酚：上海凌峰化學試劑有限公司；硫酸：上海凌峰化學試劑有限公司。
2方法
2.1供試品溶液的制備
2.1.1供試品溶液1的制備：
取本發明鐵皮石斛(鐵皮石斛1)樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末，揮干溶劑，加水2000ml，加熱回流2小時，放冷，轉移至250ml量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2ml，置15ml離心管中，精密加入95％乙醇，搖勻，冷藏1小時，取出，離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液1。
2.1.2供試品溶液2的制備
取鐵皮石斛2樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末，揮干溶劑，加水2000ml，加熱回流2小時，放冷，轉移至250ml量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2ml，置15ml離心管中，精密加入95％乙醇，搖勻，冷藏1小時，取出，離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液2。
2.2對照品溶液的制備
精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖適量，加水制成99mg/l溶液，備用。
2.3標準曲線制備
精密量取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml置10ml具塞試管中，加水至1.0ml，精密加入5％苯酚溶液1ml(i臨用前現配制)，搖勻，再精密加入硫酸5ml，搖勻，置沸水浴中加熱20分鐘，取出，放入冰水浴中冷卻5分鐘，以相應的試劑為空白，在488nm波長處測定吸光度，以吸光度y為縱坐標，濃度x(g/l)為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為：y＝11.772x-0.1492，r＝0.9995。結果表明多糖在0.02-0.10g/l范圍內線性關系良好。
2.4測定法
分別精密量取供試品溶液1和供試品溶液2各0.5ml，置10ml具塞試管中，加水至1ml，按“2.3”標準曲線的制備項下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液1ml”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的含量，計算，即得。
2.5精密度試驗
精密吸取葡萄糖對照品溶液6份，每份0.6ml，按照“2.4”項下的方法測定吸光度。測定結果，rsd分別為1.60％和1.62％，精密度良好。
2.6重復性試驗
按上述方法制備6份供試品溶液1和供試品溶液2，照按上述方法測定吸光度。測定結果，rsd分別為2.70％和2.71％，重復性良好。
2.7穩定性試驗
分別取同一供試品溶液1和供試品溶液2，在室溫下放置，分別于10min、30min、1h、2h、4h、6h后按上述方法測定吸光度。測定結果，rsd分別為2.70％和2.73％，表明供試品溶液1和供試品溶液2均在6小時內穩定。
2.8加樣回收率試驗
稱取已知含量(12.5％)的鐵皮石斛1粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準確加入葡萄糖對照品溶液(濃度為0.099g/l)2ml，按上述方法制備供試品溶液1，按上述方法測定，計算多糖含量，結果平均回收率為94.9％，rsd為2.7％。
稱取已知含量(12.5％)的鐵皮石斛2粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準確加入葡萄糖對照品溶液(濃度為0.099g/l)2ml，按上述方法制備供試品溶液2，按上述方法測定，計算多糖含量，結果平均回收率為93.9％，rsd為2.6％。
2.9樣品測定
按上述供試品溶液1和供試品溶液2的制備方法和測定條件，測定6份鐵皮石斛1樣品和6份鐵皮石斛2樣品中多糖的含量，記錄結果，結果取平均值，結果見表1。
表1多糖含量測定結果
由表可知，本發明方法種植得到的鐵皮石斛，最終采收的鐵皮石斛中多糖的含量較高。鐵皮石斛的品質好。
與現有技術相比，本發明方法種植鐵皮石斛時，最終采摘的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是多糖的含量的高。
具體實施方式
實施例1。
一種鐵皮石斛的種植方法，具體包括以下步驟：
(1)種子萌發：取鐵皮石斛種子，洗凈后，在超凈工作臺上采用75％的乙醇消毒10min后，再用無菌水沖洗3次，置于滅菌的濾紙上吸干后，接種到萌發培養基上，在晝溫為20-25℃條件下，夜溫18-20℃，暗培養，直至種子萌發；所述萌發培養基由蔗糖5kg、瓊脂10kg、丹參15kg和麥冬15kg按下述方法制成：丹參和麥冬加11倍量的水煎煮2.5h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、瓊脂混勻，即得；
(2)幼苗培育：待種子萌發后，將1-2cm高的單苗接種到增殖培養基上，在23-28℃，光強1500-2500lx下每天光照9h，直至鐵皮石斛苗高為5-8cm；所述增殖培養基由蔗糖5kg、紅薯泥15kg、黃豆渣10kg、牛滕10kg、杜仲15kg、細辛10kg、獨活10kg、當歸15kg和麻黃15kg按下述方法制成：牛滕、杜仲、細辛、獨活、當歸和麻黃加11倍量的水煎煮2.5h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥和黃豆渣混勻，即得；
(3)幼苗移栽：移栽時間為4月中旬，苗高為5-8cm的鐵皮石斛苗，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，按行距為10-15cm鐵皮石斛苗種于基質中，確保基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；所述基質由蔗糖5kg、紅薯泥15kg、土豆泥15kg、玉米糊10kg、黃豆渣10kg、熟地15kg、丹皮10kg、苦參15kg、女貞子10kg和吳茱萸15kg按下述方法制成：熟地、丹皮、苦參、女貞子和吳茱萸加11倍量的水煎煮2.5h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、土豆泥、玉米糊和黃豆渣混勻，即得；
(4)管理：
a.澆水：采用噴施方式進行澆水，澆水次數為1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次；
b遮陽：.夏天采用70-80％遮陽度的遮陽網進行遮陽；
c.溫濕度控制：控制空氣濕度為60-70％，溫度為20-25℃；
d.化肥做追肥分三次施用，第一次在幼苗移栽之后3個月，第二次在幼苗移栽之后4個月，第三次在幼苗移栽之后6個月；所述基質由蔗糖5kg、紅薯泥15kg、土豆泥15kg、玉米糊10kg、黃豆渣10kg、熟地15kg、丹皮10kg、苦參15kg、女貞子10kg和吳茱萸15kg按下述方法制成：熟地、丹皮、苦參、女貞子和吳茱萸加11倍量的水煎煮2.5h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、土豆泥、玉米糊和黃豆渣混勻，即得；
(5)11月至次年3月，采收，即可。
實施例2.
一種鐵皮石斛的種植方法，具體包括以下步驟：
(1)種子萌發：取鐵皮石斛種子，洗凈后，在超凈工作臺上采用70-80％的乙醇消毒15min后，再用無菌水沖洗4次，置于滅菌的濾紙上吸干后，接種到萌發培養基上，在晝溫為20-25℃，夜溫18-20℃條件下，暗培養，直至種子萌發；所述萌發培養基由蔗糖6kg、瓊脂15kg、丹參20kg和麥冬20kg按下述方法制成：丹參和麥冬加12倍量的水煎煮3h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、瓊脂混勻，即得；
(2)幼苗培育：待種子萌發后，將1-2cm高的單苗接種到增殖培養基上，在23-28℃，光強1500-2500lx下每天光照10h，直至鐵皮石斛苗高為5-8cm；所述增殖培養基由蔗糖6kg、紅薯泥20kg、黃豆渣15kg、牛滕15kg、杜仲20kg、細辛15kg、獨活15kg、當歸20kg和麻黃20kg按下述方法制成：牛滕、杜仲、細辛、獨活、當歸和麻黃加12倍量的水煎煮3h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、黃豆渣混勻，即得；
(3)幼苗移栽：移栽時間為4-6月，苗高為5-8cm的鐵皮石斛苗，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，按行距為10-15cm鐵皮石斛苗種于基質中，確保基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；所述基質由蔗糖6kg、紅薯泥20kg、土豆泥20kg、玉米糊15kg、黃豆渣15kg、熟地20kg、丹皮15kg、苦參20kg、女貞子15kg和吳茱萸20kg按下述方法制成：熟地、丹皮、苦參、女貞子和吳茱萸加12倍量的水煎煮3h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、土豆泥、玉米糊和黃豆渣混勻，即得；
(4)管理：
a.澆水：采用噴施方式進行澆水，澆水次數為1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次；
b遮陽：夏天采用70-80％遮陽度的遮陽網進行遮陽；
c.溫濕度控制：控制空氣濕度為60-70％，溫度為20-25℃；
d.化肥做追肥分三次施用，第一次在幼苗移栽之后3個月，第二次在幼苗移栽之后5個月，第三次在幼苗移栽之后6個月；
(5)11月至次年3月，采收，即可。
實施例3.
一種鐵皮石斛的種植方法，具體包括以下步驟：
(1)種子萌發：取鐵皮石斛種子，洗凈后，在超凈工作臺上采用70％的乙醇消毒5min后，再用無菌水沖洗3次，置于滅菌的濾紙上吸干后，接種到萌發培養基上，在晝溫為20-25℃，夜溫18-20℃條件下，暗培養，直至種子萌發；所述萌發培養基由蔗糖3kg、瓊脂5kg、丹參10kg和麥冬10kg按下述方法制成：丹參和麥冬加10倍量的水煎煮2h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、瓊脂混勻，即得；
(2)幼苗培育：待種子萌發后，將1-2cm高的單苗接種到增殖培養基上，在23-28℃，光強1500-2500lx下每天光照9h，直至鐵皮石斛苗高為5-8cm；所述增殖培養基由蔗糖3kg、紅薯泥10kg、黃豆渣5kg、牛滕5kg、杜仲10kg、細辛5kg、獨活5kg、當歸10kg和麻黃10kg按下述方法制成：牛滕、杜仲、細辛、獨活、當歸和麻黃加10倍量的水煎煮2h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、黃豆渣混勻，即得；
(3)幼苗移栽：移栽時間為4-6月，苗高為5-8cm的鐵皮石斛苗，先用清水洗凈幼苗根部的培養基，再用0.3％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒，按行距為10-15cm鐵皮石斛苗種于基質中，確保基質覆蓋住根系，使根系與基質接觸；所述基質由蔗糖3kg、紅薯泥10kg、土豆泥10kg、玉米糊5kg、黃豆渣5kg、熟地10kg、丹皮5kg、苦參10kg、女貞子5kg和吳茱萸10kg按下述方法制成：熟地、丹皮、苦參、女貞子和吳茱萸加10倍量的水煎煮2h后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與蔗糖、紅薯泥、土豆泥、玉米糊和黃豆渣混勻，即得；
(4)管理：
a.澆水：采用噴施方式進行澆水，澆水次數為1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次；
b.夏天采用70-80％遮陽度的遮陽網進行遮陽；
c.溫濕度控制：控制空氣濕度為60-70％，溫度為20-25℃；
d.化肥做追肥分三次施用，第一次在幼苗移栽之后2個月，第二次在幼苗移栽之后4個月，第三次在幼苗移栽之后6個月；
(5)11月至次年3月，采收，即可。