本發明涉及一種鐵皮石斛的組織培養方法，特別是一種增殖率高的鐵皮石斛的組織培養方法。
背景技術：
：鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內障等方面均有良好療效。現代藥理學研究表明，鐵皮石斛對非特異性及特異性免疫均有增強作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學成分較復雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。石斛堿型倍半萜類生物堿為石斛屬植物特有，其中石斛堿是最早發現，研究最多的生物堿；金釵石斛堿與非甾體類抗炎藥藥理作用相似，具有免疫調節、抗炎、擴張血管等作用。目前，利用組培技術對鐵皮石斛在種質保存和快速繁殖方面已取得一定成就，但優良品種經數次繼代或因激素使用不當、培養環境等因素，增殖率及低。技術實現要素：本發明的目的，是提供一種鐵皮石斛的組織培養方法，本發明方法對鐵皮石斛進行組織培養時，增殖率高達358.5％，幼苗長勢好。本發明是這樣實現的。一種鐵皮石斛的組織培養方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養50-60天，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養方法，所述生根培養基按重量份計算主要由黃蓮5-15份、白芍10-20份、血竭5-15份、三七10-20份、生姜5-15份、茯苓5-15份、蛋白胨1-10份、土豆1-10份、馬鈴薯1-5份和黃豆5-15份制成。前述的鐵皮石斛的組織培養方法，所述生根培養基按重量份計算，主要由黃蓮10份、白芍15份、血竭10份、三七15份、生姜10份、茯苓10份、蛋白胨5份、土豆5份、馬鈴薯3份和黃豆10份制成。前述的鐵皮石斛的組織培養方法，所述生根培養基按下述步驟進行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，過濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入5-6倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌5-10min后，冷卻至5-10℃，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養方法，所述幼苗培養基按重量份計算主要由熟玉米泥10-20份、山藥泥10-20份、芋頭泥10-20份、瓊脂1-5份和中藥渣20-30份混勻，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養方法，所述幼苗培養基按重量份計算，主要由熟玉米泥15份、山藥泥15份、芋頭泥15份、瓊脂3份和中藥渣25份混勻，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的葛根50-60份、威靈仙30-40份、夏枯草20-30份、合歡皮10-20份、穿心蓮1-10份和蒼術20-30份按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術加5-6倍量水，煎煮2-3h，過濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的葛根55份、威靈仙35份、夏枯草25份、合歡皮15份、穿心蓮5份和蒼術25份按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術加5.5倍量水，煎煮2.5h，過濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。申請人對本發明進行了大量的實驗研究，部分實驗如下：實驗例.1方法設置2個處理組，即本發明組和對比組。本發明組：按實施例1進行組織培養；對比組：組織培養方法同實施例1，但所述生根培養基中不含黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，所述幼苗培養基中不含中藥渣。60d后觀察，統計組培苗的生長情況。統計方法：生長值(cm)＝統計時平均株高-繼代時平均株高；增殖率(％)＝(統計時苗總數一繼代時苗總數)/初始苗總數×100％。2結果2.1對鐵皮石斛組培苗生長的影響經50d培養后的生長情況見表1。表1對組培苗生長的影響組別生長值/cm增殖率/％對比組1.43253.6本發明組1.85358.5由表可知，本發明組生長值和增值率均高于對比組。與現有技術相比，用本發明方進行組織培養時，組培苗生長好，生長值和增殖率高,且培養基中不含激素。與現有技術相比，本發明方法對鐵皮石斛進行組織培養時，增殖率高達358.5％，幼苗長勢好。具體實施方式實施例1。一種鐵皮石斛的組織培養方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養50-60天，即得。所述生根培養基配方：黃蓮10kg、白芍15kg、血竭10kg、三七15kg、生姜10kg、茯苓10kg、蛋白胨5kg、土豆5kg、馬鈴薯3kg和黃豆10kg。所述生根培養基按下述步驟進行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加17倍量水煎煮5.5h后，過濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入5.5倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌8min后，冷卻至5-10℃，即得。所述中藥渣由葛根55kg、威靈仙35kg、夏枯草25kg、合歡皮15kg、穿心蓮5kg和蒼術25kg按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術加4倍量水，煎煮2.5h，過濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。實施例2.一種鐵皮石斛的組織培養方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養60天，即得。所述生根培養基配方：黃蓮15kg、白芍20kg、血竭15kg、三七20kg、生姜15kg、茯苓15kg、蛋白胨10kg、土豆10kg、馬鈴薯5kg和黃豆15kg。所述生根培養基按下述步驟進行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加18倍量水煎煮6h后，過濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入6倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌10min后，冷卻至5-10℃，即得。所述中藥渣由葛根60kg、威靈仙40kg、夏枯草30kg、合歡皮20kg、穿心蓮10kg和蒼術30kg按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術加6倍量水，煎煮3h，過濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。實施例3.一種鐵皮石斛的組織培養方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養50天，即得。所述生根培養基配方：黃蓮5kg、白芍10kg、血竭5kg、三七10kg、生姜5kg、茯苓5kg、蛋白胨1kg、土豆1kg、馬鈴薯1kg和黃豆5kg。所述生根培養基按下述步驟進行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16倍量水煎煮5h后，過濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入5倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌5min后，冷卻至5-10℃，即得。所述中藥渣由葛根50kg、威靈仙30kg、夏枯草20kg、合歡皮10kg、穿心蓮1kg和蒼術20kg按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術加5倍量水，煎煮2h，過濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。當前第1頁12