本發(fā)明涉及干細(xì)胞
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種外周血干細(xì)胞保存液及其制備方法。
背景技術(shù)：
：干細(xì)胞治療是將具有不斷自我繁殖能力和多向化潛能的干細(xì)胞在體外培養(yǎng)后，再將其移植入患者受損或缺損組織中，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)損傷組織的補(bǔ)充和修復(fù)。自體外周血造血干細(xì)胞移植是指對(duì)患有某些惡性血液病的患者進(jìn)行化療加粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員使患者自身外周血干細(xì)胞達(dá)到一定值，再經(jīng)過細(xì)胞分離機(jī)的采集，把采集出來(lái)的造血干細(xì)胞冷凍保存，然后對(duì)患者進(jìn)行放、化療處理，將冷凍保存的造血干細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后迅速輸給自己的移植方法，該方法具有采集簡(jiǎn)便，患者痛苦少，移植后造血和免疫功能重建塊，并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)，目前已逐漸用于臨床。目前外周血干細(xì)胞采集后，需要加入保存液進(jìn)行冷凍保存，現(xiàn)有外周血干細(xì)胞保存液，營(yíng)養(yǎng)成分單一，配比不當(dāng)，導(dǎo)致外周血干細(xì)胞的細(xì)胞存活率低，細(xì)胞穩(wěn)定性差。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種配比適當(dāng)，營(yíng)養(yǎng)成分均衡，能提高細(xì)胞存活率，且能保持細(xì)胞穩(wěn)定性的外周血干細(xì)胞保存液。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種外周血干細(xì)胞保存液，按照重量份數(shù)計(jì)包括以下組分：人血白蛋白3-8份、海藻糖2-4份、羥乙基淀粉1-3份、營(yíng)養(yǎng)素5-15份、右旋糖酐1-3份、二甲基亞砜1-3份和適量水。作為一種改進(jìn)的技術(shù)方案，所述外周血干細(xì)胞保存液，按照重量份數(shù)計(jì)包括以下組分：白蛋白5-8份、海藻糖3-4份、羥乙基淀粉2-3份、營(yíng)養(yǎng)素8-15份、右旋糖苷2-3份和二甲基亞砜2-3份和適量水。作為一種改進(jìn)的技術(shù)方案，所述二甲基亞砜的質(zhì)量濃度為5％-10％。作為一種改進(jìn)的技術(shù)方案，所述外周血干細(xì)胞保存液，按照重量份數(shù)計(jì)還包括1-3份0.5-2wt％的透明質(zhì)酸和1-3份鏈霉素。作為一種改進(jìn)的技術(shù)方案，所述營(yíng)養(yǎng)素由維生素c、b族維生素、必需氨基酸、非必需氨基酸、氯化鈉、氯化鉀和葡萄糖酸鈉按照0.1-0.5:0.1-0.3:0.3-0.7:0.2-0.5:0.3-0.5:0.3-0.7:0.2-0.7的質(zhì)量比組成。作為一種改進(jìn)的技術(shù)方案，所述必需氨基酸為異亮氨酸、牛磺酸、精氨酸中任意一種或兩種。作為一種改進(jìn)的技術(shù)方案，所述非必需氨基酸包括丙氨酸和/或酪氨酸。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種外周血干細(xì)胞保存液的制備方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：(1)按照比例依次將營(yíng)養(yǎng)素、海藻糖和羥乙基淀粉溶于水中，混合均勻，得到的溶液在35-42℃條件下保溫，備用；(2)將步驟(1)中的溶液降溫至25-30℃，加入透明質(zhì)酸，混勻，得到的混合液在25-30℃條件下保溫；(3)向步驟(2)的混合液中加入右旋糖酐和人血白蛋白，混勻后再加入鏈霉素，混合均勻，過濾，得到過濾液；(4)向步驟(3)的過濾液中加入質(zhì)量濃度為5％-10％的二甲基亞砜，混勻，得到外周血干細(xì)胞保存液。采用了上述技術(shù)方案后，本發(fā)明的有益效果是：(1)由于營(yíng)養(yǎng)素中含有維生素c、b族維生素、無(wú)機(jī)鹽、必需氨基酸、非必需氨基酸多種營(yíng)養(yǎng)組分，可維持細(xì)胞基本的生命代謝，平衡細(xì)胞的滲透壓；二甲基亞砜、透明質(zhì)酸、羥乙基淀粉、海藻糖、右旋糖苷和人血白蛋白的聯(lián)合應(yīng)用可實(shí)現(xiàn)對(duì)干細(xì)胞通透性保護(hù)作用，降低細(xì)胞冰點(diǎn)，大大降低對(duì)干細(xì)胞的損害，同時(shí)鏈霉素的加入可防止細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)滋生細(xì)菌，大大提高了干細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率，使干細(xì)胞最大限度保持細(xì)胞活性和穩(wěn)定性，保存的干細(xì)胞其存活率高于97％；(2)二甲基亞砜的用量少，濃度低，在發(fā)揮自身滲透性保護(hù)劑功能的同時(shí)，還降低了二甲基亞砜的毒性對(duì)細(xì)胞的危害，大大提高了臨床安全性；(3)保存液各組分明確，方便配置，適用于外周血干細(xì)胞的低溫保存。具體實(shí)施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例1一種外周血干細(xì)胞保存液，按照重量份數(shù)計(jì)包括以下組分：人血白蛋3份、海藻糖2份、羥乙基淀粉1份、營(yíng)養(yǎng)素8份(維生素c、b族維生素、異亮氨酸、丙氨酸、氯化鈉、氯化鉀和葡萄糖酸鈉按照0.2:0.1:0.3:0.2:0.3:0.3:0.2的質(zhì)量比組成)、右旋糖酐1份、二甲基亞砜1份(質(zhì)量濃度為5％)和適量水。實(shí)施例2一種外周血干細(xì)胞保存液，按照重量份數(shù)計(jì)包括以下組分：人血白蛋5份、海藻糖3份、羥乙基淀粉2份、營(yíng)養(yǎng)素10份(維生素c、b族維生素、牛磺酸、酪氨酸、氯化鈉、氯化鉀和葡萄糖酸鈉按照0.2:0.1:0.4:0.3:0.3:0.3:0.3的質(zhì)量比組成)、右旋糖酐2份、二甲基亞砜2份(質(zhì)量濃度為5％)、2份0.5wt％的透明質(zhì)酸、1份鏈霉素和適量水。上述保存液的制備方法：(1)按照比例依次將營(yíng)養(yǎng)素、海藻糖和羥乙基淀粉溶于水中，混合均勻，得到的溶液在37℃條件下保溫，備用；(2)將步驟(1)中的溶液降溫至26℃，加入透明質(zhì)酸，混勻，得到的混合液在26℃條件下保溫；(3)向步驟(2)的混合液中加入右旋糖酐和人血白蛋白，混勻后再加入鏈霉素，混合均勻，過濾，得到過濾液；(4)向步驟(3)的過濾液中加入質(zhì)量濃度為5％-10％的二甲基亞砜，混勻，得到外周血干細(xì)胞保存液。實(shí)施例3一種外周血干細(xì)胞保存液，按照重量份數(shù)計(jì)包括以下組分：人血白蛋6.5份、海藻糖3.5份、羥乙基淀粉2.5份、營(yíng)養(yǎng)素12份(維生素c、b族維生素、牛磺酸和精氨酸1:1的比例、酪氨酸、氯化鈉、氯化鉀和葡萄糖酸鈉按照0.3:0.2:0.5:0.4:0.3:0.4:0.5的質(zhì)量比組成)、右旋糖酐2.5份、二甲基亞砜2.5份(質(zhì)量濃度為7％)、2.5份1wt％的透明質(zhì)酸、2份鏈霉素和適量水。實(shí)施例4一種外周血干細(xì)胞保存液，按照重量份數(shù)計(jì)包括以下組分：人血白蛋8份、海藻糖4份、羥乙基淀粉3份、營(yíng)養(yǎng)素15份(維生素c、b族維生素、牛磺酸和異亮氨酸按照1:1的比例、酪氨酸和丙氨酸按照1:1的比例、氯化鈉、氯化鉀和葡萄糖酸鈉按照0.4:0.3:0.5:0.4:0.5:0.5:0.7的質(zhì)量比組成)、右旋糖酐3份、二甲基亞砜3份(質(zhì)量濃度為9％)、3份1.8wt％的透明質(zhì)酸、3份鏈霉素和適量水。對(duì)比例1一種外周血干細(xì)胞保存液，與實(shí)施例3的唯一區(qū)別在于保存液中不含有透明質(zhì)酸。對(duì)比例2一種外周血干細(xì)胞保存液，與實(shí)施例3的唯一區(qū)別在于保存液中不含有牛磺酸、精氨酸和酪氨酸。對(duì)比例3一種外周血干細(xì)胞保存液，與實(shí)施例3唯一的區(qū)別在于保存液中不含有右旋糖酐。應(yīng)用例1實(shí)施例1-4中的保存液在外周血干細(xì)胞保存中的應(yīng)用對(duì)濰坊市人民醫(yī)院200名血液科的住院患者進(jìn)行外周血干細(xì)胞的采集，其中男性100名，女性100名，自體外周血干細(xì)胞的動(dòng)員采集使用聯(lián)合化療加重組人集落刺激因子，用細(xì)胞分選機(jī)采集外周血干細(xì)胞，將實(shí)施例1-4的保存液和對(duì)比例1-3的保存液分別用于外周血干細(xì)胞的保存，采用臺(tái)盼蘭拒染實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定復(fù)蘇后的活細(xì)胞數(shù)，結(jié)果見表1。細(xì)胞活率＝解凍后活細(xì)胞數(shù)/凍存前活細(xì)胞數(shù)×100表1實(shí)施例臺(tái)盼蘭拒染率(％)實(shí)施例195.7±0.5實(shí)施例297.5±1.5實(shí)施例398.2±0.7實(shí)施例497.2±1.3對(duì)比例182.3±0.7對(duì)比例278.6±1.5對(duì)比例380.6±1.2在顯微鏡下觀察細(xì)胞的聚集情況，細(xì)胞穩(wěn)定良好，無(wú)團(tuán)聚現(xiàn)象，結(jié)果表明采用本發(fā)明實(shí)施例1-4的保存液與對(duì)比例1-3的保存液對(duì)比，實(shí)施例1-4的保存液來(lái)保存外周血干細(xì)胞，可使干細(xì)胞保持較好的穩(wěn)定性，而且大大提高了干細(xì)胞活細(xì)胞數(shù)目，細(xì)胞存活率均在98％以上。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12