本發明涉及冬瓜耐寒性的鑒定方法。
背景技術：
：冬瓜(benincasahispidacogn.)是我國最重要的瓜類蔬菜之一，在全國范圍內廣泛栽培，年播種面積25萬公頃。冬瓜產量高，貨架期長，耐貯運，具有穩定菜價和度淡的作用。冬瓜是一種典型的喜溫作物，生產過程中，低溫是一個很重要的非生物障礙因子，嚴重影響冬瓜早期的生長發育,已成為冬瓜北方地區保護地栽培和南方提早栽培的限制因素。市場上需要耐寒的冬瓜品種，然而，迄今為止，尚未見冬瓜耐寒鑒定方法的相關報道，冬瓜耐寒育種尚處起步階段。在以往，發明人開展冬瓜耐寒鑒定時，都是采用自然鑒定的，即在冬、春季將冬瓜鑒定材料放置露天場地，當自然溫度在10℃左右時，每天調查一次冷害指數，至少連續調查1個月。可是這種鑒定方法操作性低，因為出現低溫的時間不確定，低溫程度難以預知；從播種至鑒定出最終結果至少2個月，操作時間長，效率低；開展實驗時間短，每年能開展耐寒試驗的時間只有在冬春季。技術實現要素：本發明的目的在于提供一種冬瓜耐寒性鑒定方法，在不受氣候影響的情況下可對冬瓜種質資源進行耐寒性鑒定，篩選出耐寒冬瓜種質，開展冬瓜耐寒育種，培育耐寒冬瓜新品種，滿足冬瓜產業的需求。本發明實現目的的技術方案如下：一種冬瓜耐寒性鑒定方法，取苗齡為2片真葉期的冬瓜苗置于10℃下處理4天，觀察出現冬瓜冷害的冬瓜株數，根據冬瓜冷害分級進行分級，然后計算冬瓜的冷害指數，再按照以下冬瓜耐寒性分級標準判斷冬瓜耐寒性：極耐寒型品種：冷害指數≤10％；耐寒型品種：10％＜冷害指數≤30％；中間型品種：30％＜冷害指數≤70％；冷敏型品種：70％＜冷害指數≤90％；極冷敏型品種：冷害指數＞90％。本發明中冷害指數通過以下式一的公式模型計算：其中，s0～s5為冬瓜苗發生1～5級冷害的處理株數，n為總處理株數。其中，冬瓜冷害分級如下：0級：葉片正常，翠綠色，葉緣光滑平整，無任何傷害；1級：葉片僅有輕度褪綠，葉緣上有褐色散點狀斑點，損傷面積≤10％；2級：葉片褪綠顏色變淺黃,但葉片未完全黃化，葉緣略微卷曲，葉周緣出現白灰色損傷斑紋，10％<損傷面積≤20％；3級：葉片褪綠情況明顯，葉片黃化，葉前緣水漬狀褐化，脫水斑嚴重，20％<褐化面積≤50％；4級：植株葉片褪色，變脆變薄，葉片卷曲，枯萎褐化嚴重，50％<褐化面積≤70％；5級：葉片褪綠，葉前緣褐化嚴重，葉片軟化萎縮，重量、面積縮減，褐化面積>70％。本發明與現有技術相比，具有以下的優點：1.本發明提供的鑒定方法能有效地鑒定冬瓜不同品種的耐寒性。2.本發明提供的鑒定方法不受環境和氣候影響，在人工氣候室對冬瓜幼苗進行低溫處理即可獲得鑒定結果。3.本發明提供的鑒定方法與自然鑒定法相比，操作時間短、速度快，結果準確，非常具有操作性。附圖說明圖1是冬瓜冷害分級圖。具體實施方式第一部分：冬瓜耐寒鑒定方法的建立冬瓜是喜溫植物，其生長發育最適宜溫度18-32℃，在35℃以上仍能生長正常，對低溫極敏感，5℃以下會凍死。幼苗期能忍受較低溫，15℃左右生長緩慢，10℃就易產生凍害。結合我國冬瓜播種的實際情況，晚冬早春，冬瓜正處于幼苗期，因此，冷害也主要發生在幼苗期。因此，建立冬瓜耐寒鑒定方法主要有三個參數：低溫程度、幼苗大小、處理天數。本發明中選擇了三個時期冬瓜幼苗進行試驗：子葉期、1片真期(或1心1葉期)、2片真期(或1心2葉期)。1.試驗材料冬瓜耐寒材料b274和冷敏感材料b281分別來自廣西南寧和廣東廣州的黑皮冬瓜純合自交系。2.試驗方法2.1試驗材料種植營養土按草炭﹕珍珠巖﹕蛭石＝3﹕1﹕1配制，各品種冬瓜種子手工破殼、經常規浸種、催芽后，種植在裝好營養土的48孔穴盤中，澆水后，放至人工氣候室培養，光強為12000lx，白天(12h)溫度為28℃，晚上(12h)溫度為25℃，空氣濕度為60％。2.2冬瓜耐寒性鑒定方法的建立采用三因素三水平正交實驗法，以處理溫度、處理時長、處理生長點為三個因素，分別設置三個因素的三個不同水平：處理溫度8℃、10℃、12℃，處理時長2d、4d、6d，處理生長點子葉期、1片真葉期、2片真葉期。在各個因素的不同水平下對b274與b281進行脅迫處理，通過觀察受傷程度的表型，來探索能夠最大程度區分兩個品種的各因素水平。2.3結果與分析2.3.1冬瓜冷害等級劃分標準2.3.1.1冬瓜冷害分級:冬瓜冷害分級：0級：葉片正常，翠綠色，葉緣光滑平整，無任何傷害；1級：葉片僅有輕度褪綠，葉緣上有褐色散點狀斑點，損傷面積≤10％；2級：葉片褪綠顏色變淺黃,但葉片未完全黃化，葉緣略微卷曲，葉周緣出現白灰色損傷斑紋，10％<損傷面積≤20％；3級：葉片褪綠情況明顯，葉片黃化，葉前緣水漬狀褐化，脫水斑嚴重，20％<褐化面積≤50％；4級：植株葉片褪色，變脆變薄，葉片卷曲，枯萎褐化嚴重，50％<褐化面積≤70％；5級：葉片褪綠，葉前緣褐化嚴重，葉片軟化萎縮，重量、面積縮減，褐化面積>70％。根據上述冬瓜冷害分級建立冷害指數模型公式：其中，s0～s5為冬瓜苗發生1～5級冷害的處理株數，n為總處理株數。2.3.1.2冬瓜耐寒性分級標準：極耐寒型品種：冷害指數≤10％；耐寒型品種：10％＜冷害指數≤30％；中間型品種：30％＜冷害指數≤70％。冷敏型品種：70％＜冷害指數≤90％；極冷敏型品種：冷害指數＞90％。2.3.2正交實驗各處理的冷寒指數分析表1：正交實驗各處理的冷寒指數2.3.2.1在8℃條件下，苗齡、處理時間對品種耐寒性的影響表2：8℃條件下，不同苗齡耐寒性差異分析苗齡平均冷害指數％差異性子葉期66.12a1片真葉期65.33a2片真葉期74a表3：8℃條件下，不同處理天數耐寒性差異分析表4：8℃條件下，不同品種的耐寒性差異分析品種平均冷害指數％差異性b27463.41ab28173.56a由表1-4所示，在8℃條件下，隨著處理時間的延長，冷害指數顯著增加。但可以發現兩個品種都嚴重受凍，冷害指數都很高，兩者之間差異不顯著，說明8℃不適合冬瓜耐寒鑒定實驗。2.3.2.2在12℃條件下，苗齡、處理時間對品種耐寒性的影響表5：12℃條件下，不同苗齡耐寒性差異分析苗齡平均冷害指數％差異性子葉期22.00a1片真葉期18.33a2片真葉期25.55a表6：12℃條件下，不同處理天數耐寒性差異分析處理天數平均冷害指數％差異性2d13.22c4d22.45b6d30.22a表7：12℃條件下，不同品種的耐寒性差異分析品種平均冷害指數％差異性b27419.26ab28124.67a由表5-7所示，在12℃條件下，盡管隨著處理時間的延長，冷害指數顯著增加。但可以發現兩個品種受凍都不嚴重，冷害指數較低，兩者之間差異不顯著，說明12℃不適合冬瓜耐寒鑒定實驗。2.3.2.3在10℃條件下，苗齡、處理時間對品種耐寒性的影響表8：10℃條件下，不同品種的耐寒性差異分析品種平均冷害指數％差異性b27441.33bb28167.78a可見，在10℃條件下，兩個品種的冷害指數存在顯著差異，能較好地區分耐寒品種與冷敏感品種。說明10℃適合冬瓜耐寒鑒定實驗。表9：10℃條件下，不同苗齡耐寒性差異分析苗齡平均冷害指數％差異性子葉期52.33a1片真葉期58.67a2片真葉期52.67a從表9中見，不同苗齡，其耐寒指數有差異。進一步分析，10℃時兩品種在子葉期、1片真葉期、2片真葉期的冷害指數差分別為28.67、21.33、31.33，兩品種冷害指數差越大，說明越容易區分兩品種的耐寒性，因此，2片真葉期優于1片真葉期和子葉期。表10：10℃條件下，不同處理天數耐寒性差異分析處理天數平均冷害指數％差異性2d38.67b4d56.67ab6d68.33a從表10中可以發現不同的處理天數對冷害指數影響顯著。進一步分析，如表11所示，10℃時兩品種在處理2天、處理4天、處理6天的冷害指數差分別為26.67、29.33、23.33，兩品種冷害指數差越大，說明越容易區分兩品種的耐寒性，因此，處理4天優于處理2天和處理6天。表11：10℃條件下，不同處理天數耐寒性差異分析綜上所述，2片真葉期低溫10℃處理4天為冬瓜耐寒性最佳鑒定方法。第二部分25份冬瓜核心種質耐寒性的鑒定(一)試驗材料25份冬瓜核心種質由廣東省蔬菜種質庫存提供，來自3個國家、11個省份。(二)試驗方法每份材料各100粒種子，分為均等兩份，分別用于本發明的鑒定方法與自然低溫鑒定。用溫水浸泡種子8小時后，撈出濾干明水，用濕潤毛巾包裹放至30℃的恒溫箱進行催芽，每天用自來水清洗一次，3天后出芽，分別播種至育苗盤(48孔)。按正常幼苗管理技術進行管理。25天后幼苗長至2片真葉，把用于本發明的鑒定方法的材料放至人工氣候室培養，光強為12000lx，溫度為10℃，空氣濕度為60％。四天后調查各材料的冷害指數。自然低溫鑒定的材料放至露地，當氣溫高于10℃時，不蓋薄膜，當氣溫低于10℃時，蓋薄膜以免冬瓜幼苗被凍。當出現低溫(10℃左右)時，每天調查一次冷害指數，連續調查1個月。冬瓜冷害分級：0級：葉片正常，翠綠色，葉緣光滑平整，無任何傷害；1級：葉片僅有輕度褪綠，葉緣上有褐色長條狀斑點，損傷面積<10％；2級：葉片褪綠顏色變淺黃，但葉片未完全黃化，葉緣略微卷曲，葉周緣出現白灰色損傷斑紋，損傷面積<20％；3級：葉片褪綠情況明顯，葉片黃化，葉前緣水漬狀褐化，脫水斑嚴重，30％<褐化面積<60％；4級：植株葉片褪色，變脆變薄，葉片卷曲，枯萎褐化嚴重，50％<褐化面積<70％；5級：葉前緣褐化嚴重，葉片軟化萎縮，重量、面積縮減，褐化面積>70％。根據上述冬瓜冷害分級建立冷害指數模型公式：其中，s0～s5為冬瓜苗發生1～5級冷害的處理株數，n為總處理株數。冬瓜耐寒性分級標準：極耐寒型品種：冷害指數≤10％；耐寒型品種：10％＜冷害指數≤30％；中間型品種：30％＜冷害指數≤70％。冷敏型品種：70％＜冷害指數≤90％；極冷敏型品種：冷害指數＞90％。(三)結果與分析表12：試驗材料耐寒性人工鑒定結果與自然低溫鑒定結果對比從表11中可見，本發明的鑒定方法與自然低溫鑒定結果吻合，只有個別品種在冷害程度上有點差異，如b281，本發明的鑒定方法鑒定為極冷敏感型，而自然低溫鑒定為冷敏感型，不過結果也較為接近。由此可見，本發明提供的鑒定方法是能有效地鑒定冬瓜的耐寒性能的。當前第1頁12