本發明涉及細胞低溫轉運保存，尤其涉及一種細胞低溫轉運保存液及其制備方法和使用方法。細胞治療是指將自體或異體的體細胞或干細胞進行生物工程改造，形成具有特定功能的細胞制品，以治療疾病。自20世紀90年代以來，細胞治療逐漸發展成為一種重要的治療手段，尤其是在癌癥、遺傳性疾病、損傷性修復、退行性疾病和自身免疫疾病的治療中展現出巨大的潛力。進入21世紀后，car-t細胞療法的成功應用標志著細胞治療進入了一個新的階段，特別是在血液惡性腫瘤的治療中取得了顯著成效。當前，全球細胞治療的研發管線持續增加，涉及多種免疫細胞和基質細胞的新技術也在不斷研究中。隨著再生醫學和細胞治療領域的蓬勃發展，細胞制品的低溫儲存和轉運成為關鍵環節。細胞制品的低溫儲存和轉運作為一個涉及細胞制品質量關鍵性的技術性問題，就是細胞在體外的保存、運輸而引起的細胞存活率及活力會使細胞體內治療效果受到限制。活細胞作為細胞治療產品的有效成分，對保存、運輸過程中細胞生存的介質有較高的要求。如何在運輸時間內維持細胞高活率并保證產品的臨床安全性是目前細胞臨床應用的主要難點。因此，尋找一種細胞低溫轉運保存液以保證細胞儲存和轉運的安全，對于細胞的臨床應用具有非常重要的意義。當前，相關文獻顯示的細胞運輸方式有三種：1)采用液氮或干冰的冷凍運輸法，該方法程序繁瑣，運輸成本高，且細胞反復凍融造成細胞存活率下降，影響治療效果，且多數冷凍保護劑含有二甲基亞砜(dmso)，而dmso具有毒性，注射入人體后會引起惡心、嘔吐、皮疹、腹痛、血壓過低、嚴重神經系統疾病、腎衰竭、心血管疾病等不良反應。2)常溫運輸法，只適合短途運輸，且細胞內生化反應活躍，引起的ph和滲透壓變化可造成細胞溶脹和死亡，死亡的細胞會凝結成不溶的絮狀物，影響細胞制品回輸的安全性。3)低溫運輸法，既可減緩細胞的代謝速率，又可避免復蘇再操作引發的安全風險，較前兩者是更為理想的運輸方式。但目前尚未見既能長時間維持細胞活性，又能直接回輸的細胞低溫運輸保存液。因此，尋找一種成分明確，安全性較高，制備方便的細胞低溫轉運保存液以解決現有的細胞保存液保存細胞時間短、無法進行較長距離運輸、細胞活性下降較為迅速且保存液無法便捷地應用于臨床的問題。

背景技術：

技術實現思路

1、基于背景技術存在的問題，本發明提出了一種細胞低溫轉運保存液及其制備方法和使用方法。

2、一種細胞低溫轉運保存液，其組分包括：滅菌注射用水100g，葡萄糖5g，人血白蛋白(蛋白質)5g，氯化鈉0.85g，氯化鉀0.03g，氯化鈣0.028g。

3、上述細胞低溫轉運保存液制備方法，包括如下步驟：將上述組分混合均勻，溶解完成后過濾，無菌分裝。

4、上述細胞低溫轉運保存液使用方法，包括如下步驟：將細胞(干細胞和免疫細胞)與權利要求1-2任一項所述細胞低溫轉運保存液混合均勻得到細胞懸浮液，移入無菌血液轉移袋然后放入疫苗箱中，疫苗箱隔板放入冰盒。

5、優選地，細胞懸浮液中細胞濃度為1×106-1×108個/ml。

6、優選地，干細胞選擇臍帶間充質干細胞，采用如下具體操作制取：取一根臍帶剝離華通氏膠并剪碎至1～3mm3塊狀，在干細胞完全培養基中進行培養、傳代，將消化后的細胞離心，離心后使用d-pbs洗滌，并用100μm細胞濾網對細胞進行過濾，離心得到臍帶間充質干細胞。

7、優選地，免疫細胞選擇臍帶血nk細胞，采用如下具體操作制取：取一份臍帶血采用ficoll分離法，將臍帶血單個核細胞分離出來，再采用滋養層細胞和康寧581培養基對nk細胞進行擴增培養16天，將細胞收獲離心，離心后用pbs洗滌，并用100μm細胞濾網對細胞進行過濾，離心得到臍帶血nk細胞。

8、本發明技術效果如下所示：

9、(1)本發明采用人血白蛋白，安全性高，不含動物血清，無動物源性病原體感染的可能性。

10、(2)本發明成分簡單、制備方便、成本低廉、制劑可直接回輸等優點，適合大規模生產應用。

11、(3)本發明可用于長距離、長時間細胞制劑運輸，保存細胞活率與增殖能力。

12、(4)本發明長了干細胞活性維持時間，保證72小時運輸后細胞活率保持在85％以上，細胞總數保持在90％以上，其仍能滿足臨床使用要求。

技術特征：

1.一種細胞低溫轉運保存液，其特征在于，其組分包括：

2.根據權利要求1所述間充質干細胞凍存保護劑，其特征在于：滅菌注射用水:葡萄糖:人血白蛋白(蛋白質):氯化鈉:氯化鉀:氯化鈣質量比為100:5:5:0.85:0.03:0.028。

3.如權利要求1-2任一項所述細胞低溫轉運保存液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將滅菌注射用水、葡萄糖、人血白蛋白、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣混勻后，過濾，氮氣保護分裝。

4.如權利要求1-2任一項所述細胞低溫轉運保存液的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：將細胞(干細胞和免疫細胞細胞)與權利要求1-2任一項所述細胞低溫轉運保存液混合均勻得到細胞懸浮液，移入無菌血液轉移袋然后放入疫苗箱中，疫苗箱隔板放入冰盒。

5.根據權利要求4所述細胞低溫轉運保存液使用方法，其特征在于，細胞懸浮液中細胞濃度為1×106-1×108個/ml。

技術總結
本發明提出一種細胞低溫轉運保存液的配方配比，其組分包括：滅菌注射用水100g，葡萄糖5g，人血白蛋白(蛋白質)5g，氯化鈉0.85g，氯化鉀0.03g，氯化鈣0.028g。本發明公開了上述細胞低溫轉運保存液的使用方法，包括如下步驟：將細胞與上述細胞低溫轉運保存液混合均勻得到細胞懸液，移入無菌血液轉移袋然后放入裝有冰盒并提前預冷的疫苗箱中進行保存。

技術研發人員：焦鵬,閻贏,梁秀麗,楊海艷
受保護的技術使用者：深圳市依林醫療管理有限公司
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28