本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種中性粒細胞減少癥模型的構建方法及其應用。

背景技術：

1、中性粒細胞由骨髓造血干細胞分化而來，是機體最重要的防御細胞，其主要功能是吞噬和殺傷細菌，包括粘附、趨化、吞噬和釋放作用四個方面，在免疫系統中起重要作用。中性粒細胞減少癥是一種以血液中中性粒細胞數量大量減少為特征的疾病，是癌癥患者接受細胞毒性化療和放療后最常見和最嚴重的并發癥之一。

2、實驗動物是生物醫學研究中不可或缺的工具，實驗動物在探究基因基礎功能、探尋疾病的發病機制以及應用藥物的臨床前篩選等方面都有著十分重要的作用。小鼠在發育和代謝上與人類具有極大的相似性，其基因與人類基因也具有極高的相似度（小鼠99%的基因能在人類基因組中找到同源基因），且其生命周期短，被認為是哺乳動物中理想的模式生物。因此提供一種中性粒細胞減少癥模型的構建方法對于中性粒細胞減少癥的基礎和臨床研究是非常必要的。

技術實現思路

1、為彌補現有技術的不足，本發明提供了一種中性粒細胞減少癥模型的構建方法及其應用。

2、為實現上述目的，本發明采用如下技術方案。

3、本發明的第一方面提供了一種中性粒細胞減少癥模型的構建方法，所述方法包括通過條件性敲除hax1基因的方式構建中性粒細胞減少癥模型。

4、進一步，所述條件性敲除為對hax1基因的hax1-201轉錄本進行條件性敲除。

5、進一步，所述hax1-201轉錄本的條件性敲除的位置為hax1-201轉錄本的2,3號外顯子。

6、進一步，所述條件性敲除選自基于位點特異性重組酶系統的條件性敲除。

7、進一步，所述位點特異性重組酶系統的條件性敲除所使用的系統為cre/loxp系統。

8、進一步，所述方法具體包括：

9、1）構建hax1基因條件性敲除的打靶載體；

10、2）步驟1）中的打靶載體轉染至es細胞中；

11、3）步驟2）中的陽性es細胞注入供體動物中；

12、4）步驟3）中的供體動物與flp動物雜交；

13、5）步驟4）中的陽性動物與特異性表達cre酶的動物雜交，得到中性粒細胞減少癥模型。

14、進一步，步驟1）中構建打靶載體的方法為infusion方法。

15、進一步，步驟2）中轉染的方法為電轉。

16、進一步，步驟4）所述特異性表達cre酶的動物為髓系細胞中特異性表達cre酶的動物。

17、進一步，所述動物選自哺乳類動物。

18、進一步，所述哺乳類動物選自嚙齒類動物。

19、進一步，所述嚙齒類動物選自鼠類。

20、進一步，所述鼠類選自小鼠。

21、進一步，步驟3）所述供體動物選自c57bl/6j品系小鼠。

22、本發明的第二方面提供了一種中性粒細胞減少癥模型，所述模型由本發明第一方面所述的方法構建而成。

23、本發明的第三方面提供了本發明第一方面所述的方法在構建中性粒細胞減少癥模型中的應用。

24、本發明的第四方面提供了一種篩選預防/治療中性粒細胞減少癥的候選藥物的方法，所述方法包括將待測試藥物施用于本發明第一方面所述的方法構建得到的中性粒細胞減少癥模型或本發明第二方面所述的模型中，選擇能夠改善中性粒細胞減少癥癥狀的待測試藥物。

25、本發明的第五方面提供了本發明第一方面所述的方法構建得到的模型或本發明第二方面所述的模型在篩選預防/治療中性粒細胞減少癥的藥物中的應用。

26、本發明的第六方面提供了本發明第一方面所述的方法構建得到的模型或本發明第二方面所述的模型在中性粒細胞減少癥的疾病機理/疾病靶點研究中的應用。

27、本發明的優點和有益效果：

28、通過本申請的方法構建的模型可用于探究多種針對中性粒細胞減少癥以及其他中性粒細胞分化發育障礙疾病相關靶點的研究，具備體內模擬性和整體性，且本申請的模型表型明顯，側重對骨髓髓系細胞的特異性敲除，不影響其他細胞組織的基因表達，在保證顯著表型的同時保證動物正常的生存繁殖狀態，有利于開展長周期實驗。

技術特征：

1.一種中性粒細胞減少癥模型的構建方法，其特征在于，所述方法包括通過條件性敲除hax1基因的方式構建中性粒細胞減少癥模型。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述條件性敲除為對hax1基因的hax1-201轉錄本進行條件性敲除；

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述條件性敲除選自基于位點特異性重組酶系統的條件性敲除；

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法具體包括：

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟1）中構建打靶載體的方法為infusion方法；

6.一種中性粒細胞減少癥模型，其特征在于，所述模型由權利要求1-5任一項所述的方法構建而成。

7.權利要求1-5任一項所述的方法在構建中性粒細胞減少癥模型中的應用。

8.一種篩選預防/治療中性粒細胞減少癥的候選藥物的方法，其特征在于，所述方法包括將待測試藥物施用于權利要求1-5任一項所述的方法構建得到的中性粒細胞減少癥模型或權利要求6所述的模型中，選擇能夠改善中性粒細胞減少癥癥狀的待測試藥物。

9.權利要求1-5任一項所述的方法構建得到的模型或權利要求6所述的模型在篩選預防/治療中性粒細胞減少癥的藥物中的應用。

10.權利要求1-5任一項所述的方法構建得到的模型或權利要求6所述的模型在中性粒細胞減少癥的疾病機理/疾病靶點研究中的應用。

技術總結
本發明公開了一種中性粒細胞減少癥模型的構建方法及其應用。通過本申請的方法構建的模型可用于探究多種針對中性粒細胞減少癥以及其他中性粒細胞分化發育障礙疾病相關靶點的研究，具備體內模擬性和整體性，且本申請的模型表型明顯，側重對骨髓髓系細胞的特異性敲除，不影響其他細胞組織的基因表達，在保證顯著表型的同時保證動物正常的生存繁殖狀態，有利于開展長周期實驗。

技術研發人員：白琳,樂涵薇,石桂英,湯家鳴,李欣悅
受保護的技術使用者：中國醫學科學院醫學實驗動物研究所
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28