本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)，具體涉及白刺組織培養(yǎng)快繁方法。

背景技術(shù)：

1、白刺是蒺藜科白刺屬的灌木，分枝多而密集，呈叢生狀，具有很強(qiáng)固沙阻沙能力。白刺為旱生型陽性植物，不耐水濕積澇，耐旱、耐鹽堿。枝條一般平鋪地面，積沙成丘，為優(yōu)良固沙植物。白刺分布于中國陜西北部、內(nèi)蒙古西部、甘肅河西等地，常生于荒漠和半荒漠的湖盆沙地、河流階地、山前平原積沙地、有風(fēng)積沙的粘土地。

2、一般采用播種、嫩枝扦插及硬枝扦插育苗三種方式。但從育苗上看，播種育苗方式最佳，成活率高于其它兩種方式。目前來看，白刺繁殖方式單一，育種效率低，育苗總數(shù)少。因此，急需采取新的育苗繁殖方式來提高白刺繁殖速度以滿足生產(chǎn)需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決白刺繁殖育種的問題，本發(fā)明提供了一種白刺組織培養(yǎng)快繁方法。本發(fā)明的白刺組織培養(yǎng)快繁技術(shù)能夠突破傳統(tǒng)的育種手段，解決育種年限長，育種方式單一，繁殖緩慢的問題，通過組培的方法可實(shí)現(xiàn)一年多代的快速繁殖，從而解決育種短缺的難題。為此，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

2、本發(fā)明的一種白刺組織培養(yǎng)快繁方法，包括下述步驟：

3、（1）白刺種子無菌處理；

4、（2）發(fā)芽培養(yǎng)：放到接種的發(fā)芽培養(yǎng)基上；所述發(fā)芽培養(yǎng)基是在ms培養(yǎng)基中添加萘乙酸naa、赤霉酸ga3和活性炭ac；

5、（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)：下胚軸切1-2厘米放到誘導(dǎo)培養(yǎng)基；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在ms培養(yǎng)基中添加生長素2ad、6-芐基嘌呤6-ba?、萘乙酸naa?和活性炭ac；

6、（4）增殖分化培養(yǎng)：放到增殖分化培養(yǎng)基；所述增殖分化培養(yǎng)基是在改良b5培養(yǎng)基中添加6-芐基嘌呤6-ba、激動(dòng)素kt和活性炭ac；

7、（5）生根培養(yǎng)：最后放到生根培養(yǎng)基；所述生根培養(yǎng)基是在1/2?ms培養(yǎng)基中添加吲哚丁酸iba和活性炭ac。采用吲哚丁酸可促使根部生長形成根系。

8、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（1）種子無菌處理是將白刺種子用75%（v/v）酒精和0.1wt%氯化汞先后浸泡處理。

9、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（2）所述發(fā)芽培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+naa（0.1-0.5mg/l）+ga3（0.08-0.2mg/l）+ac（0.5-1.5mg/l），更優(yōu)選的組成為：ms培養(yǎng)基+naa（0.2-0.3mg/l）+ga3（0.1-0.2mg/l）+ac（0.8-1.2mg/l），最優(yōu)選的組成為：ms+naa0.3mg/l+ga3?0.1mg/l+ac?1mg/l。

10、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+2ad（0.5-1.2mg/l）+6-ba（0.1-0.5mg/l）+naa（0.1-0.5mg/l）+ac（0.5-1.5mg/l），更優(yōu)選的組成為：ms培養(yǎng)基+2ad（0.8-1.2mg/l）+6-ba（0.1-0.3mg/l）+naa（0.1-0.3mg/l）+ac（0.8-1.2mg/l），最優(yōu)選的組成為：ms+2ad?1mg/l+6-ba?0.2mg/l+naa?0.2mg/l+ac?1mg/l。

11、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（4）增殖分化培養(yǎng)基組成為：改良b5培養(yǎng)基+6-ba（0.1-0.3mg/l）+kt（0.01-0.04mg/l）+ac（0.5-1.5mg/l）mg/l，更優(yōu)選的組成為：改良b5培養(yǎng)基+6-ba（0.1-0.2mg/l）+kt（0.01-0.02mg/l）+ac（0.8-1.2mg/l）mg/l，最優(yōu)選的組成為：改良b5+6-ba?0.15mg/l+kt?0.01mg/l+ac?1mg/l，所述改良b5是在b5培養(yǎng)基中添加0.24-0.26mg/l的2,4-d和0.83-0.85mg/l的kt優(yōu)選添加0.24mg/l的2,4-d和0.833mg/l的kt。

12、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（5）生根培養(yǎng)基組成為：

13、1/2?ms培養(yǎng)基+iba（0.2-0.8mg/l）+ac（0.1-0.5mg/l），更優(yōu)選的組成為：1/2?ms培養(yǎng)基+iba（0.4-0.6mg/l）+ac（0.1-0.3mg/l），最優(yōu)選的組成為：1/2?ms+iba?0.5mg/+ac0.2mg/l。

14、優(yōu)選的，對(duì)于上述所述的方法，其中步驟（2）發(fā)芽培養(yǎng)、步驟（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)、步驟（4）增殖分化培養(yǎng)、步驟（5）生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件均可以為：23-26℃光照6-8小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1000-4000lux。一般的，對(duì)于常見植物光照時(shí)間在12h以上為佳，而發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的光照時(shí)間過長并不利于白刺的組培成長，光照強(qiáng)度則可以3000lux為佳。

15、優(yōu)選的，對(duì)于上述所述的方法，其中步驟（2）發(fā)芽培養(yǎng)、步驟（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)間以12-20天為佳15-16天最佳，而步驟（4）增殖分化培養(yǎng)時(shí)間以50-80天為佳60-65天最佳，步驟（5）生根培養(yǎng)時(shí)間以25-40天為佳30-35天最佳。

16、作為一種較為優(yōu)選的技術(shù)方案，本發(fā)明所述的白刺組織培養(yǎng)快繁方法，包括下述步驟：

17、（1）種子無菌處理：取白刺種子用75%（v/v）酒精浸泡10-30s，再用無菌水沖洗，然后用0.1?wt?%氯化汞浸泡0.5-2min，再以無菌水沖洗；

18、（2）發(fā)芽培養(yǎng)：放到發(fā)芽培養(yǎng)基上培養(yǎng)15-16天，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；發(fā)芽培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+naa?0.3mg/l+ga3?0.1mg/l+ac?1mg/l；

19、（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)：下胚軸切1-2厘米放到誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15-16天，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：ms+2ad?1mg/l+6ba?0.2mg/l+naa0.2mg/l+ac?1mg/l；

20、（4）增殖分化培養(yǎng)：放到增殖分化培養(yǎng)基培養(yǎng)60-65天，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；增殖分化培養(yǎng)基組成為：改良b5+6-ba?0.15mg/l+kt?0.01mg/l+ac1mg/l；

21、（5）生根培養(yǎng)：最后放到生根培養(yǎng)基培養(yǎng)30-35天，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；生根培養(yǎng)基組成為：1/2?ms+iba?0.5mg/+ac?0.2mg/l。

22、本發(fā)明的有益效果在于：

23、1.本發(fā)明的組培快繁技術(shù)不受時(shí)間和空間限制，從一粒白刺種子到發(fā)芽再誘導(dǎo)愈傷，通過愈傷不斷分化，即可生根，從而可以在較短時(shí)間內(nèi)（約3-4個(gè)月）獲得大量固沙植株白刺，一年可完成多代繁殖，從而滿足育種需求。

24、2.技術(shù)前景：可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，加快育種速度。

25、3.保護(hù)野生資源：通過組培快繁技術(shù)，可以減少對(duì)野生白刺資源的依賴，有助于野生植物資源的保護(hù)。

26、4.綜合來看，白刺組培快繁技術(shù)在促進(jìn)沙生植物大量可持續(xù)發(fā)展、保護(hù)植物資源方面具有廣泛的應(yīng)用前景。