專利名稱：測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法
技術領域：
本發明涉及測定水中細菌總數的方法，尤其涉及一種測定工業用水中細 菌總數的方法。
背景技術：
細菌滋生是影響工業循環水質量的一個主要問題。在菌藻大量滋生、繁 殖的情況下，對冷卻水系統的后果是十分嚴重的。其主要危害形式就是形成 生物粘泥和對系統材質的腐蝕，進而導致水質惡化、管道堵塞、設備腐蝕和 系統傳熱效率下降。主要應對措施就是使用多種氧化和非氧化殺菌劑進行綜 合殺菌處理。而有效地進行殺菌處理的基礎就是及時地掌握循環水系統細菌 滋生情況，即迅速準確地監測水系統的細菌總數。
目前，"GB/T14643.1工業循環冷卻水中粘液形成菌的測定"平皿計數 法"是國標中允許的檢測工業冷循環水中細菌總數的唯一標準方法。平皿計 數法的測定步驟為以無菌操作方法吸取lmL粘液制成的水樣，注入盛有 9mL滅菌水的試管中，混勻成l: IO的稀釋液。然后再吸取l: IO的稀釋液 lmL，注入盛有9mL滅菌水的試管中，混勻成1: 100的稀釋液，按同法稀 釋成l: 1000、 1: 10000稀釋液等備用。用滅菌管吸取2 3個適宜濃度的稀 釋液lmL，分別注入滅菌的培養皿中，在20分鐘之內傾注10 15mL已融化 并冷卻到45。C左右的營養瓊脂培養基，立即旋搖培養皿；使水樣與培養基 充分混合，帶冷卻凝固后，將培養皿翻轉過來，底面向上，放入37t:恒溫 箱內培養72小時，選擇合適密度的平皿，操作人員手動進行菌落計數。
平皿培養法雖然比較穩定、可靠。但其需要在29± 1 "條件下培養72 小時，分析時間比較長；同時需對多個梯度進行稀釋培養，工作量也比較大。 夏季細菌滋生迅速，如化工冷循環系統的硝化細菌滋生時，只需數天時間就 會將系統中的亞硝酸鹽緩蝕劑轉化殆盡。利用國標分析方法進行細菌監測，
分析周期滯后于現場要求的快速、基本準確的要求。

發明內容
本發明旨在解決國標方法分析工作量大、速度慢，滯后于現場要求的缺 陷，提供一種測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法。本發明的測定簡便方法 能減少工作量，較快地測定細菌量，簡化工作程序。
本發明是這樣實現的-
一種測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，它按照下述步驟執行
歩驟一根據GB/T 14643.1工業循環冷卻水中粘液形成菌的測定的平皿計數 法，制備一系列細菌濃度的試樣平皿；
歩驟二，對步驟一制備的試樣平皿拍攝顯微照片作為標準照片；
歩驟三，直接用無菌操作方法用滅菌刻度吸液管吸取lml被測工業水粘液制 成的水樣，注入到滅菌后的培養皿中；
步驟四，在步驟三的培養皿中，傾注營養瓊脂培養基，立即旋搖培養皿，使 水樣與培養基充分混合，冷卻；
步驟五，將步驟四中經過冷卻的培養皿翻過來，底面向上，放入37。C恒溫培 養箱內培養24小時，從培養箱取出培養皿，在顯微鏡下觀察并參照步驟二獲得的 標準照片比較確定細菌濃度數量級。
所述的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法的步驟四和步驟三之間的時 間間隔小于20分鐘。
所述的測定工業冷循環水中細菌總數的方法的步驟一當中所述的細菌濃度系 列為l(^個/mL、 10'個/mL、 1()2個/mL、 103個亂、1()4個/mL和1()5個/mL。
所述的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法的步驟四所用的營養瓊脂培 養基為10~15mL已融化并冷卻到45'C左右的營養瓊脂培養基。
所述的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，當被測水樣的細菌濃度 〉1()S個/mL時，在步驟三之前需要對被測水樣按照GB/T 14643.1工業循環冷卻水 中粘液形成菌的測定的平皿計數法中的稀釋方法作一次稀釋。
所述的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，在第二次測定時候，只需 從歩驟三開始。
本發明所需培養時間由三天縮短為一天；計數方法不再是人工計數，而是通 過與預先建立的標準照片(標準照片可以是根據以往培養的平皿拍照留下來的照 片)進行比較而得出數目，雖然讀數結果的精密度較國標法較低，只能得出濃度 數量級，但己滿足現場控制的要求；計數方法的更改簡化了分析步驟，使總菌數 《1(^個/mL的水樣分析都省略了稀釋濃度梯度的工作。而總菌數>106個/11^的水 樣只需做一次稀釋。使工作量減至原來的1/4-1/2。也就是說，用國標法分析一個 水樣的總菌數需培養6-8塊平皿(每個水樣做雙樣)，而新方法分析一個水樣一般 需要培養2塊平皿(每個水樣做雙樣)，濃度過高則需培養4塊平皿；隨著分析水 樣需培養的細菌培養皿個數的減少，分析成本也同樣程度的降低。
具體實施例方式
下面，給出本發明的
具體實施例方式
一種測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，它按照下述步驟執行
歩驟一根據GB/T 14643.1工業循環冷卻水中粘液形成菌的測定的平皿計數 法，按照1(^個/mL、 10'個/mL、 1()2個/mL、 103個/mL、 1()4個/mL和1()5個/mL 的細菌濃度制備一系列細菌濃度的試樣平皿；
步驟二，對步驟一制備的試樣平皿拍攝顯微照片作為標準照片；
歩驟三，直接用無菌操作方法用滅菌刻度吸液管吸取lmL被測工業水粘液制 成的水樣，注入到滅菌后的培養皿中；
步驟四，20分鐘內，在步驟三的培養皿中，傾注10~15mL己融化并冷卻到 45'C左右的營養瓊脂培養基，立即旋搖培養皿，使水樣與培養基充分混合，冷卻；
歩驟五，將步驟四中經過冷卻的培養皿翻過來，底面向上，放入37i:恒溫培 養箱內培養24小時，從培養箱內取出培養皿，在顯微鏡下觀察并對照步驟二獲得 得標準照片比較確定細菌濃度數量級。
當被測水樣的細菌濃度>106個/mL時，在步驟三之前需要對被測水樣按照 GB/T 14643.1工業循環冷卻水中粘液形成菌的測定的平皿計數法中的稀釋方法作 一次稀釋。
在第二次測定時候，只需從步驟三開始，可以直接利用第一次測定時候獲得 的標準照片。
為了驗證上述方法的準確性，取寬厚板連鑄清循環的粘液制成的水樣。按照 直接比較法，做平行樣。培養后，對照標準照片，對出兩塊平皿總菌數均為103 個/ mL。
為檢驗數據的準確性，用國標法同樣對水樣進行分析，得出總菌數為3.6x103
個/ mL。
工業循環水細菌分析的控制指標為<105個/毫升。現場加藥控制，只需要知道 循環水中的細菌個數達到哪個數量級就足夠了，并不需要精確知道細菌有多少個。 可見，兩種分析方法得出的數據結果相符。
權利要求
1. 一種測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，其特征在于，它包括下述步驟步驟一根據GB/T 14643.1工業循環冷卻水中粘液形成菌的測定的平皿計數法，制備一系列細菌濃度的試樣平皿；步驟二，對步驟一制備的試樣平皿拍攝顯微照片作為標準照片；步驟三，直接用無菌操作方法用滅菌刻度吸液管吸取1ml被測工業水粘液制成的水樣，注入到滅菌后的培養皿中；步驟四，在步驟三的培養皿中，傾注營養瓊脂培養基，立即旋搖培養皿，使水樣與培養基充分混合，冷卻；步驟五，將步驟四中經過冷卻的培養皿翻過來，底面向上，放入37℃恒溫培養箱內培養24小時，從培養箱取出培養皿在顯微鏡下觀察并對照步驟二獲得的標準照片比較確定細菌濃度數量級。
2. 根據權利要求1所述的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，其特征 在于，所述的步驟四和步驟三之間的時間間隔小于20分鐘。
3. 根據權利要求1或2所述的測定工業冷循環水中細菌總數的方法，其特征 在于，步驟一當中所述的細菌濃度系列為1()G個/mL、 101個/11^、 1(^個/mL、 103 個/mL 、 104個/mL和105個/mL 。
4. 根據權利要求1或2所述的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，其 特征在于，步驟四所用的營養瓊脂培養基為10~15mL已融化的并冷卻到45'C左右 的營養瓊脂培養基。
5. 根據權利要求1或2所述的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，其 特征在于，當被測水樣的細菌濃度〉l(^個/mL時，在步驟三之前需要對被測水樣 按照GB/T 14643.1工業循環冷卻水中粘液形成菌的測定的平皿計數法中的稀釋方法作一次稀釋。
6. 根據權利要求1或2所書的測定工業冷循環水中細菌總數的簡便方法，其 特征在于，在第二次測定時候，只需從步驟三開始。
全文摘要
本發明涉及測定水中細菌總數的方法，尤其涉及一種測定工業用水中細菌總數的方法。測定步驟為無需稀釋濃度梯度，直接用無菌操作方法用滅菌刻度吸液管吸取1mL粘液制成的水樣，注入到滅菌后的培養皿中，在20分鐘之內傾注10～15mL已融化并冷卻到45℃左右的營養瓊脂培養基，立即旋搖培養皿；使水樣與培養基充分混合，待冷卻凝固后，將培養皿翻過來，底面向上，放入37℃恒溫培養箱內培養24小時，取出皿觀察并對照標準照片比較確定細菌濃度數量級。本發明的測定簡便方法能減少工作量，較快地測定細菌量，簡化工作程序。
文檔編號C12Q1/06GK101205554SQ200610147720
公開日2008年6月25日 申請日期2006年12月21日 優先權日2006年12月21日
發明者劉亭伶 申請人:上海寶鋼工業檢測公司