專利名稱：從低值海水魚及下腳料蛋白中提取抗氧化劑的技術的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從低值海洋魚及加工后其頭、皮、骨、內臟等下腳料蛋白中提取抗氣 化劑的技術，屬生物技術領域。技術背景眾所周知，為防止或延緩食品成分氧化變質而所使用的一種食品添加劑稱之抗氧化 劑，食品的氧化變質主要表現如油脂及富脂食品的酸敗、食品的褪色、褐變、維生素破壞 等。對人體而言活性氣自由基對機體具有較大的損傷作用，引起蛋白質損傷、酶失活、脂 質過氧化，導致衰老、腫瘤、心血管疾病等。人工合成的二丁基羥基甲苯(BHT)、 丁基羥 基茴香醚(朋A)以及沒食子酸丙酯(PG)等雖然具有良好的清除自由基的作用，但近年 來的研究表明，它們具有致癌作用。因此，尋找對人體安全而又髙效的新型抗氣化劑有著 重要的意義。發明內容為解決上述現有技術的不足，本發明是一種從海水魚或海水魚經加工后的頭、皮、骨、 內臟等下腳料蛋白為原料提取抗氧化劑的方法。海洋低值魚及下腳料蛋白質資源豐富，目前多數用于生產飼料魚粉，少部分用于提取 食用水解蛋白或作為調味料，蛋白質水解產物具有抗氣活性的研究也有一些報道，但目前 還未得到有效的應用。蛋白質被水解為復合多肽并經過金厲螯合修飾后這種抗氧化作用得 到加強，有的接近于Vit.E的抗氧化活性。有關海洋蛋白質酶水解物復合多肽金厲螯合物 髙抗氧化活性還未見報道。為解決上述的提取技術，本發明通過對上述原料的復合酶水解、獲得多肽復合物，再 經過金屬螯合修飾與分級分離，獲得抗菌劑，具體工藝技術方案為原料—前處理—復合 酶水解—離心過濾—超濾—螯合修飾—離心分離—酵沉—真空干燥—粉碎—成品本發明依據上述的技術方案(1) 使用的原料為新鮮的低值海水魚及其經加工后的頭、皮、骨、內臟等下腳料作 為原料；(2) 前處理原料清洗后用粉碎機粉碎，按1比2-4的比例加入水，即1份重量的 原料加入2-4份原料重量的水，磨成肉漿；(3) 復合酶水解調整肉漿pH為5-7，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酶(固體 粉末，40萬IU)和風味酶(液體，200萬IU),酶量控制為600-2400IU，在溫度為40-60 'C的條件下有限水解2-4小時 將水解液加熱到901C-100TC,并保持15分鐘殺滅皞的活 力；(4 )離心過濾和超濾釆用板框過濾機或離心機粗過濾酶解液，再用膜孔徑為0. 2-0. 5P m的超濾膜過濾，得到超濾水解液；(5) 螯合修飾—離心分離—酵沉調整超濾水解液的pH至6-8，在不斷攪拌的條件下，緩慢加入按重量/體積比50份超濾水解液加入1份濃度為1-4%的氣化亞鐵或氣化鈣溶 液，并保持15-60分鐘;靜置放置3小時后離心分離得到沉淀A;濾液加入無水乙醇至體 系終濃度達到50-60%靜置2小時再次離心分離得到沉淀B;再補加無水乙酵至終濃度達到 80%并靜置2小時，離心分離得到沉淀C;(6) 真空干燥將沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氧化劑成品。 所述的低值海水魚指新鮮的或經冷凍的小型的、價廉的， 一般不被消費者購來食用的，其特點是價格低廉，至于加工后的下腳料如魚皮、骨、內臟等則價格更為低廉。應用上述技術得到的抗氧化劑，開辟了海水魚中低值魚或加工后的下腳料蛋白類資源的髙值化開發途徑，經亞鐵或鈣螯合后得到的抗氧化劑，不僅具有防氧化的作用，而且也是一種補鐵(鈣)的營養強化劑，尚未見到有關亞鐵(或鈣)復合物或肽及氨基酸鐵(鈣)整合物具有抗氧化活性的報導. 本發明具有如下優點(1) 以海洋低值魚或加工后下腳料為原料，生產制備三種抗氧化劑，生產過程中的 酒精可以回收利用，生產成本低，可以實現水產品髙值化開發與髙度利用；(2) 生產工藝技術對設備要不高，設備投資少， 一般水產加工企業都具備開發的條件和能力；(3) 因為從魚蛋白中提取，所以產品具有純天然特點，具有顯著的抗氧化生物活性， 其抗氧化活性達到維生素E的57.1-94. 4%，可以廣泛應用于食品工業及相關工業。
具體實施方式
本發明實施例一(1) 使用的原料為新鮮的低值海水魚及其經加工后的皮、骨、內臟等下腳料作為原料；(2) 前處理原料清洗后用粉碎機粉碎，按1比2的比例加入水，即1份重量的原 料加入2份原料重量的水，磨成肉漿；(3) 復合酶水解調整肉漿pH為5，按活力l比l的比例加入木瓜蛋白酶(固體粉 末，40萬IU)和風味酶(液體，200萬IU)，酶量控制為600IU,在溫度為40-60X:的條 件下有限水解2小時。將水解液加熱到90iC，并保持15分鐘殺滅酶的活力；(4) 離心過濾和超濾采用板框過濾機或離心機粗過濾酶解液，再用膜孔徑為0.2 H m的超濾膜過濾，得到超濾水解液；(5) 螯合修飾爿離心分離—醇沉調整超濾水解液的PH至6，在不斷攪拌的條件下， 緩慢加入按重i/體積比50份超濾水解液加入l份濃度為1%的氣化亞鐵或氣化鈣溶液，并 保持15分鐘；靜置放置3小時后離心分離得到沉淀A;濾液加入無水乙酵至體系終濃度達到50 4靜置2小時再次離心分離得到沉淀B;再補加無水乙醇至終濃度達到80%并靜置2小 時，離心分離得到沉淀C;(6)真空干燥將沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氣化劑成品。所述的低值海水魚指新鮮的或經冷凍的小型的、價廉的， 一般不被消費者購來食用的， 其特點是價格低廉，至于加工后的下腳料如魚皮、骨、內臟等則價格更為低廉，本發明實施例二(1) 使用的原料為新鮮的低值海水魚及其經加工后的皮、骨、內臟等下腳料作為原料；(2) 前處理原料清洗后用粉碎機粉碎，按1比3的比例加入水，即1份重量的原 料加入3份原料重量的水，磨成肉漿；(3) 復合酶水解調整肉漿pH為6，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酵(固體粉 末，40萬IU)和風味睥(液體，200萬IU),酶量控制為15001(J，在溫度為50C的條件 下有限水解3小時。將水解液加熱到951C,并保持15分鐘殺滅酶的活力；(4) 離心過濾和超濾采用板框過濾機或離心機粗過濾酶解液，再用膜孔徑為0.3 P m的超濾膜過濾,得到超濾水解液；(5) 螯合修飾—離心分離—酵沉調整超濾水解液的pH至7，在不斷攪拌的條件下， 緩慢加入按重量/體積比50份超濾水解液加入1份濃度為2. 5%的氣化亞鐵或氣化鈣溶液， 并保持40分鐘；靜置放置3小時后離心分離得到沉淀A;濾液加入無水乙酵至體系終濃度 達到50%靜置2小時再次離心分離得到沉淀B;再補加無水乙酵至終濃度達到80%并靜置2 小時，離心分離得到沉淀C;(6) 真空干燥將沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氣化劑成品. 本發明實施例三(1) 使用的原料為新鮮的低值海水魚及其經加工后的皮、骨、內臟等下腳料作為原料；(2) 前處理原料清洗后用粉碎機粉碎，按1比4的比例加入水，即1份重量的原 料加入4份原料重董的水，磨成肉漿；(3) 復合酶水解調整肉漿pH為7，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酶(固體粉 末，40萬IU)和風味酶(液體，200萬IU),酶量控制為2400IU,在溫度為60"C的條件 下有限水解3小時。將水解液加熱到lOOt),并保持15分鐘殺滅酶的活力；(4) 離心過濾和超濾采用板框過濾機或離心機粗過濾酶解液，再用膜孔徑為0.5 nm的超濾膜過濾，得到超濾水解液；(5) 螯合修飾—離心分離—酵沉調整超濾水解液的PH至8，在不斷攪拌的條件下， 緩慢加入按重量/體積比50份超濾水解液加入l份濃度為4%的氯化亞鐵或氣化鈣溶液，并 保持60分鐘；靜置放置3小時后離心分離得到沉淀A;濾液加入無水乙醇至體系終濃度達 到50%靜置2小時再次離心分離得到沉淀8;再補加無水乙酵至終濃度達到80X并靜置2小時，離心分離得到沉淀C;(6)真空干燥將沉淀A、 B、 C真空干燥即得到抗氣化劑成品。 通過上述實例例所得到的本發明的抗氧化劑，采用TBA法，即硫代巴比妥酸法.其抗 氧化效果見下表所示多肽復合物及螯合修飾物與Vit.E抗氧化活性的比較(采用TBA法，即硫代巴比妥酸法)試樣多肽復合多肽象合物亞鐵螯合修飾物多肽復合物鈣螯合條飾物VE物ABCABC和生育酸6876.892.457.194.4385.2279. 07100的比較oo由上表可以明顯看出，多肽復合物與多肽復合物的螯合修飾物的3種分級分離組分都 表現出不同程度的抗氣化活性；亞鐵螯合修飾物A、 B、 c三組分抗氧化活性達到生育酚氣 化抑制率的76. 8、 92. 4沐57.1%;鈣螯合修飾物A、 B、 C三組分分別達到94. 43%、 85. 22X 和79.0754與多肽復合物相比較，鉤螯合修飾物A、 B、 C三組分抗氧化活性均得到較顯著的 提髙；與生育酚對比，亞鐵螯合修飾物B組分及鈣螯合修飾物A組分到生育酚氧化抑制率 為92.4%和94.43沐，結果同樣表明，酵溶性較低的組分均有較好的抗氧化能力，其抗氧化 能力髙于未螯合的活性肽；而酵溶性較髙的組分，其抗氧化能力較弱，但仍髙于未螯合的 活性肽(復合多肽)。
權利要求
1. 從低值海水魚及加工后下腳料蛋白中提取抗氧化劑的技術，其特征在于，其提取方法為(1)原料使用的原料為新鮮的低值海水魚及其經加工后的頭、皮、骨、內臟等下腳料作為原料；(2)前處理原料清洗后用粉碎機粉碎，按1比2-4的比例加入水，即1份重量的原料加入2-4份原料重量的水，磨成肉漿；(3)復合酶水解調整肉漿pH為5-7，按活力1比1的比例加入木瓜蛋白酶，為固體粉末，40萬IU，和風味酶，為液體，200萬IU，酶量控制為600-2400IU，在溫度為40-60℃的條件下有限水解2-4小時。將水解液加熱到90℃-100℃，并保持15分鐘殺滅酶的活力；(4)離心過濾和超濾采用板框過濾機或離心機粗過濾酶解液，再用膜孔徑為0.2-0.5μm的超濾膜過濾，得到超濾水解液；(5)螯合修飾→離心分離→醇沉調整超濾水解液的pH至6-8，在不斷攪拌的條件下緩慢加入按重量/體積比50份超濾水解液加入1份濃度為1-4％的氯化亞鐵或氯化鈣溶液，并保持15-60分鐘；靜置放置3小時后離心分離得到沉淀A；濾液加入無水乙醇至體系終濃度達到50-60％靜置2小時再次離心分離得到沉淀B；濾液再補加無水乙醇至終濃度達到80％并靜置2小時，離心分離得到沉淀C；(6)真空干燥將沉淀A、B、C真空干燥即得到天然抗菌劑成品。
全文摘要
本發明公開一種從低值海水魚及加工后下腳料蛋白中提取抗氧化劑的技術。上述原料加2-4倍重量的水，磨成肉漿，肉漿pH調整為5-7，按活力1比1加入木瓜蛋白酶和風味酶水解，酶量控制在600-2400IU，過濾酶解液，將所得到的超濾水解液其pH調整為6-8，在不斷攪拌下，按重量/體積比50份超濾水解液加入1份1-4％的氯化亞鐵或氯化鈣溶液螯合，離心分離得到沉淀A，濾液加入無水乙醇，至終濃度50-60％，靜置后離心分離得到沉淀B，在濾液中，再加入乙醇至終濃度80％，靜置后離心分離所得到沉淀C，真空干燥A、B、C得到抗菌劑，其抗氧化活性達到維生素E的57.1-94.4％，可應用于食品工業和相關工業。
文檔編號A23L1/327GK101233950SQ20071006714
公開日2008年8月6日 申請日期2007年1月29日 優先權日2007年1月29日
發明者超 謝, 鄧尚貴 申請人:浙江海洋學院