專利名稱：二羥基丙酮高產菌的快速篩選方法
技術領域：
本發明涉及一種二羥基丙酮高產菌的快速篩選方法，屬于工業微生物 工程領域。(二) 背景技術二羥基丙酮，又稱為1, 3-二羥基丙酮(1, 3-Dihydroxyacetone )(以下 簡稱DHA),是最單的酮糖，帶有甜味的白色粉末狀結晶，易溶于水、乙 醇、丙酮和乙醚等有機溶劑。這種化學物質的分子量為90.08。DHA用途廣泛，市場容量大，用生物轉化甘油生產二羥基丙酮的研 究具有重要的意義，微生物轉化法生產DHA與化學合成法相比具有許多 優點專一性強、反應條件溫和、底物利用率高、轉化率高、生產工藝簡 單等優點。國外用微生物法轉化甘油為二羥基丙酮的研究己有很多專利和文獻 報道，所用的用于產生甘油脫氫酶的微生物主要是葡糖桿菌屬(G/wc,6acfer) (US 5770411 )和醋桿菌屬(JcetoZ^"w) ( US 4076589 ) 微生物，尤其是氧化葡糖桿菌(G/wc朋Wacfer orj^ara )和弱氧化醋桿菌(^ceZ)o^cter SWoxj^ws )的凈艮道居多，此外還研究過芽孢桿菌屬(Sac〃/船)的枯草桿菌(5ac/〃w"wto7^FERMP-10524) (JP 2286089)、 單孢絲菌屬(M/crawo"o^ora ) ( JP 62210994 )， 假單孢菌屬(尸化Mfifomowas )、沙雷氏菌屬(&rra"a )、克霉伯氏菌屬(K/efe/e〃a )、 區欠文藝節目氏菌屬(五rvWw/a )、曲霉屬(y45perg/〃ws )、青霉屬(尸ew/c/〃/wm )、 根霉屬(i /n'加; ^ ) ( US 4576913 )。盡管轉化甘油生產二羥基丙酮的微生物較多，但真正用于生產DHA 的高產菌還比較少，有關轉化甘油為二羥基丙酮的微生物的快速篩選方面 的報道更是空白。
發明內容本發明目的在于提供一種快速、方便的二羥基丙酮高產菌篩選方法。 本發明采用的技術方案是二羥基丙酮高產菌的篩選方法，所述方法包括如下順序步驟(1) 取待篩選菌株，接種至多孔板培養基中，28 37"下培養至長出 單菌落，加入變林試劑，25 35。C下放置10 60min，單菌落周圍 顯現棕紅色暈斑，為陽性菌抹；所述多孔板培養基組成如下 甘油20 50g/L,酵母粉2 5g/L,瓊脂18 20g/L,溶劑為水， pH5.0 7.0;(2) 另取陽性菌株接種至斜面培養基，28 37。C下培養l 2天，獲得 陽性菌林的斜面菌種；所述斜面培養基組成如下甘油 20 50g/L,酵母粉2 5g/L,瓊脂18~20g/L,溶劑為水，pH5.0 7.0;(3) 將陽性菌株的斜面菌種接種至發酵培養基，28 37°C 、 100 200rpm振蕩培養24 60h,得到發酵液，測定發酵液中DHA 含量，經發酵獲得的發酵液中DHA含量高于2g/L的陽性菌抹， 即為二羥基丙酮高產菌；所述發酵培養基組成如下甘油 10 50g/L,酵母粉2 20 g/L,蛋白胨1 20 g/L,NaH2P04'2H20 1 5 g/L, CaC03 1 4g/L,;容劑為水，pH4.0 7.0。本發明可直接應用于已知菌抹的選育，也可應用于篩選土壤中的未知 微生物。應用于篩選土樣中微生物時，方法如下取待測土樣，粉碎，加入無菌生理鹽水，振蕩，取上清液涂布于平皿培養基，28 37。C培養1~2 天，獲得的單菌落作為待篩選菌株，按照步驟(1 ) (3 )步驟進行篩選； 所述平皿培養基組成如下甘油20~50g/L,酵母粉2~5g/L,瓊脂18 20g/L， 溶劑為水，pH5.0~7.0。本發明涉及的多孔板培養基、斜面培養基與平皿培養基是組成成分范 圍相同的固體培養基。按如下方法進行配制加熱條件下往lOOOmL水中 加入瓊脂18 20g使之溶化，再加入甘油20 50g和酵母粉2 5g， 121。C滅 菌20min,冷卻到60。C時，在無菌環境中將培養基加入到多孔板的每個 小孔中，經冷卻得到多孔板培養基；在無菌環境中將培養基倒入無菌的試 管中，經冷卻得到斜面培養基;在無菌環境中將培養基倒入無菌的平亞中， 冷卻得到平亞培養基。所述發酵培養基按如下方法進行配制，1000mL水中加入甘油10 50 g,酵母粉2 20g,蛋白胨l 20g， NaH2P04.2H20 1 5 g,用0.1mol/LHCl 或NaOH調pH至4.0 7.0，最后加入CaC03 1 4g, 121。C滅菌20min,冷 卻得到發酵培養基。變林試劑為定性實驗用試劑，其用量不受限制，本領域技術人員可根 據需要、按照常識添加，通常，在多孔板中操作時，每孔添加0.1 0.2mL 變林試劑即可。所述步驟(l)中，待測菌抹各平行接種至少2孔進行培養，培養得 到單菌落，其中至少1孔添加斐林試劑進行顯色反應，呈陽性反應的待測 菌抹對應的未添加雯林試劑的孔中得到的單菌落用于下一步操作，這樣可 以節省操作時間，并可實現批量4喿作。具體的，所述方法如下(1) 取待測土樣，粉碎，加入無菌生理鹽水，振蕩，取上清液涂布于平皿培養基，28 37。C培養l 2天，獲得的單菌落，作為待篩選菌抹； 所述平jnL培養基組成如下甘油20 50g/L,酵母粉2 5g/L,瓊脂 18~20g/L,;容劑為水，pH5.0 7.0;(2) 無菌條件下，取待篩選菌林，平行接種至多孔板培養基的2孑L, 28 37。C下培養至長出單菌落，在其中1孔中加入變林試劑 0.1 0.2mL, 25 35。C下放置10 60min，單菌落周圍顯現棕紅色暈斑， 為陽性菌林，相應未添加變林試劑的孔中得到的陽性菌株的單菌落用于下一步^:乘作；所述的多孔板培養組成同平皿培養基；(3) 取陽性菌抹接種至斜面培養基，28 37。C下培養1 2天，獲得陽性 菌株的斜面菌種；所述斜面培養基組成同平皿培養基；(4) 將陽性菌株的斜面菌種接種至發酵培養基，28 37°C、 100 200rpm 振蕩培養24 60h,得到發酵液，測定發酵液中DHA含量，經發酵 獲得的發酵液中DHA含量高于2g/L的陽性菌抹，即為二羥基丙酮 高產菌；所述發酵培養基組成如下甘油10 50g/L,酵母粉2 20 g/L, 蛋白胨1~20 g/L， NaH2P04'2H20 1 5 g/L, CaC03 l 4g/L,溶劑為 水，pH4.0 7.0。優選的，所述方法如下a) 取待測土樣，粉碎，加入無菌生理鹽水，振蕩，取上清液涂布于平 皿培養基，28。C培養l天，獲得的單菌落，作為待篩選菌株；所述 平皿培養基組成如下甘油20g/L,酵母粉2g/L,瓊脂18g/L，溶 劑為水，pH5.0;b) 無菌條件下，取待篩選菌抹，平行接種至多孔板培養基的2孔中，28。C下培養至長出單菌落，在其中1孔中加入變林試劑O.lmL, 25。C下放置60min，單菌落周圍顯現棕紅色暈斑，為陽性菌林，相 應未添加變林試劑的孔中得到的陽性菌抹的單菌落用于下一步操 作；所述多孔板培養基組成如下甘油20g/L,酵母粉2g/L,瓊脂 18g/L，溶劑為水，pH5.0;c) 取陽性菌林接種至斜面培養基，28。C下培養l天，獲得陽性菌林的 斜面菌種；所述斜面培養基的組成如下甘油20g/L,酵母粉2g/L, 瓊脂18g/L，溶劑為水，pH5.0;d) 將陽性菌抹的斜面菌種接種至發酵培養基，30°C、 200rpm振蕩培 養24h,得到發酵液，測定發酵液中DHA含量，經發酵獲得的發 酵液中DHA含量高于2g/L的陽性菌抹，即為二羥基丙酮高產菌； 所述發酵培養基組成如下甘油10g/L,酵母粉2 g/L,蛋白胨1 g/L, NaH2P04.2H20 1 g/L, CaC03 lg/L，溶劑為水，pH5.0。變林試劑包括A、 B兩種溶液，A溶液為質量濃度為0.044g/mL的硫 酸銅溶液，B溶液為質量濃度分別為0.258g/mL的酒石酸鉀鈉與 0.142g/mL的氫氧化鈉混合溶液，使用時，取等量A、 B液混合后立即使 用。所述雯林試劑可按如下方法進行配制A液用34.6g CuS04-5H20溶于200mL水中,再加0.5mL濃H2S04，混勻后，用水稀釋到500mL; B液用173g酒石酸鉀鈉(KNaC4H406.4H20 )和71gNaOH固體溶在400mL水中，再稀釋成500mL溶液，使用時，取等量A、 B液混合后立即使用。本發明中，DHA的分析方法可采用氣相色語與薄層層析方法進行DHA薄層層析方法實驗采用G型硅膠板(20mmxl0mm ),展開劑 氯仿-曱醇一蒸餾水混合溶劑(體積比為80:19:1 ),顯色劑組成為磷鉬酸 3g，甲醇45mL,蒸餾水45mL和濃硫酸10mL。具體操作步驟將點樣 后的硅膠薄板以基準線向下放置在裝有展開劑的層析缸中展開10 ~ 15min,直至展開劑擴散至距離薄板頂端1 ~2cm處。取出薄板，吹干， 碘缸中熏蒸2 5min,顯色，放入烘箱中，在110。C下烘烤10min左右， 即可呈現DHA斑點，采用CAMMA的薄層掃描儀測定DHA含量。DHA氣相色譜分析方法所用的儀器瓦里安varian cp-3800氣相色 語儀，帶氫火焰離子化檢測器；PY-2020iD型裂解器(Frontier Laboratories Ltd. Japan )。所用試劑TMAH ( 25%水溶液)，二羥基丙酮(色譜純)，甘 油、無水曱醇(分析純)，蒸餾水。色譜條件Ultra ALLOY-5不銹鋼毛 細管柱(30 mx0.25 mmx0.25 |im);汽化溫度400。C;檢測器溫度280°C; 柱溫50。C開始以rC/min升至60°C,再以10°C/min升至280°C;分流比 30:1;載氣，氮氣；柱流量lmL/min。加樣0.2)iL發酵上清夜和0.4(iL TMAH ( 25%水溶液)。本發明的原理以甘油為底物，利用微生物產生的甘油脫氫酶催化反 應生產l， 3-二羥基丙酮，產物二羥基丙酮能與變林試劑發生顯色反應， 生成棕紅色的沉淀。基于這個顯色原理，設計了產二羥基丙酮微生物快速、 高通量的篩選模型。實踐表明該模型在菌種篩選的試驗中，收到了良好的 效果。通過這個模型，篩選到了幾抹能高產二羥基丙酮的微生物菌株。本發明有益效果為操作簡單、結果判斷直觀方便，能快速、高通量 篩選產二羥基丙酮的微生物菌抹，大大減少勞動量，提高勞動效率。 具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述,但本發明的保護范圍并不僅限于此 實施例1:(1) 變林試劑的制備A液用34.6gCuS04.5H20溶于200mL水中，再加0.5mL濃H2S04,混勻后， 用水稀釋到500mL,B液用173g酒石酸鉀鈉(KNaC4H406.4H20 )和71g NaOH固體溶解在 400mL水中，再稀釋成500mL溶液， 使用時候，取等量A、 B液混合后立即使用；(2) 培養基的制備平皿培養基、多孔板培養基與斜面培養基制備所述的平皿培養基、多孔 板培養基與斜面培養基是組成成分相同的固體培養基，其組份如下甘油 20g,酵母粉2g，瓊脂18g，水1000mL， pH值5.0。按如下方法制備加 熱條件下往lOOOmL水中加入瓊脂18g使之溶化，再加入甘油20g和酵母 粉2g, 12rC滅菌20min,冷卻到60。C時，在無菌的環境中將培養基加入 到無菌的96孔多孔板的每個小孔中，然后冷卻得到多孔板培養基，待用； 在無菌的環境中將培養基倒入無菌的平i中，冷卻得到平皿培養基，待用； 在無菌的環境中將培養基倒入無菌的試管，冷卻得到斜面培養基，待用； 發酵培養基制備發酵培養基組成如下甘油10g,酵母粉2g,蛋白胨10g, NaH2P04'2H20 lg， CaC03 lg,水lOOOmL, pH值5.0;(3) 將要篩選的土樣研碎，加入無菌生理鹽水，充分振蕩，取上清液待用；(4) 分離培養將步驟(3)制備的上清夜涂布于平皿培養基上，在28。C培養1天，逐個 挑選單菌落，平行接種到2個同樣的多孔板培養基(多孔板X,多孔板Y)上相互對應的小孔中，將多孔板;故置在28。C培養1天，小孔中將長出單菌落；(5) 初步篩選將新配制的變林試劑，在多孔板X的小孔中加入變林試劑O.lmL，在25。C 下放置60min，肉目艮觀察，若在菌落周圍出現棕紅色的暈斑為陽性反應， 以二鞋基丙酮標準品作為陽性對照，然后在多孔板Y上相對應的小孔中挑 選陽性單菌落，接種到斜面培養基，28。C下培養l天；(6) 復篩將培養好的斜面菌林接種到發酵培養基中，在30°C、 200rpm的恒溫搖床 上振蕩培養24h,測定DHA含量，DHA含量高于2g/L的作為產二羥基丙 酮的孩￡生物。在此次篩選過程中，篩選到2抹產二羥基丙酮的微生物菌抹，2005年 10月18日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC):葡萄牙棒孢酵母(C/av&;x ra /^/tow'"e),保藏編號為CCTCC No. M 205116;月莫醭畢赤酵母(Pz'c/h'g wem6raw/flc/m )， j呆藏編號為CCCTCC No. M 205117。實施例2:(1)變林試劑的制備A液用34.6gCuS04.5H20溶于200mL水中，再加0.5mL濃H2S04， 混勻后，用水稀釋到500mL;B液用173g酒石酸鉀鈉(KNaC4H4CV4H20)和71gNaOH固體溶 在400mL水中，再稀釋成500mL溶液；使用時候，取等量A、 B液混合后立即使用；
(2) 培養基的制備
平皿培養基、多孔板培養基與斜面培養基制備所述的平皿培養基、多
孔板培養基與斜面培養基是組成成分相同的固體培養基，其組份如下甘 油30g,酵母4分3g,瓊脂20g,水1000mL, pH值6.0;按如下方法制備 加熱條件下往1000mL水中加入瓊脂20g使之溶化，再加入甘油30g和酵 母粉3g， 12rC滅菌20min,冷卻到60。C時，在無菌的環境中將培養基加 入到在無菌的96孔多孔板的每個小孔中，然后冷卻得到多孔板培養基，待 用；在無菌環境中將培養基倒入無菌的平皿中，然后冷卻得到平皿培養基， 待用；在無菌的環境中將培養基倒入無菌的試管中，然后冷卻得到斜面培 養基，待用；
發酵培養基制備發酵培養基組成如下甘油50g，酵母粉20 g， 蛋白胨lg, NaH2P04.2H20: 5 g, CaC03: 4g,水1000mL， pH值5.0,
(3) 將要篩選的土樣研碎，加入無菌生理鹽水，充分振蕩，取上清液待
用；
(4) 分離培養:
將步驟(3 )制備的上清夜涂布于平皿培養基上，在37。C培養1天，逐個 挑選單菌落，平行接種到2個同樣的多孔板培養基(多孔板X,多孔板Y) 上相互對應的小孔中，將多孔板放置在37。C培養1天，小孔中將長出單
菌落；
(5) 初步篩選
將新配制的變林試劑，在多孔板X的小孔中加入變林試劑0.2mL,在30°C 下放置30min，肉眼觀察，若在菌落周圍出現棕紅色的暈斑為陽性反應， 以二羥基丙酮標準品作為陽性對照，然后在多孔^反Y上相對應的小孔中挑選陽性單菌落，接種到斜面培養基，28。C下培養l天； (6)復篩
將培養好的斜面菌抹接種到發酵培養基中，在3(TC、 200rpm的恒溫搖床 上振蕩培養36h,測定DHA含量，DHA含量高于2g/L的作為產二羥基 丙酮的微生物。
在此次篩選過程中，篩選到1抹產二羥基丙酮的微生物菌抹，于2006年 8月29日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC):地衣芽孢桿 菌B-05571 (to/腸//c/髓/o謹.s B-05571 ),保藏號CCTCC No. M 206082。
實施例3:
(1) 變林試劑的制備
A液用34.6g CuS04.5H20溶于200 mL水中，再加0.5mL濃H2S04,混勻 后，用水一希孝奪到500mL,
B液用173g酒石酸鉀鈉(KNaC4H406.4H20 )和71g NaOH固體溶解在 400mL水中，再稀釋成500mL溶液5 使用時候，取等量A、 B液混合后立即使用；
(2) 培養基的制備
平jm培養基、多孔板培養基與斜面培養基制備所述的平皿培養基、多孔
板培養基與斜面培養基是組成成分相同的固體培養基，其組份如下甘油 50，酵母粉5，瓊脂20，水lOOOmL, pH值7.0, 4要如下方法制備加熱 條件下往lOOOmL水中加入瓊脂20g使之溶化，再加入甘油50g和酵母粉 5g, 121。C滅菌20min,冷卻到6(TC時，
在無菌的環境中將培養基加入到無菌的384孔多孔板的每個小孔中，然后冷卻得到多孔板培養基待用；
在無菌環境中將新鮮配制的培養基，倒入無菌的平亞中，冷卻得到平皿培 養基，待用；
在無菌的環境中將新鮮配制的培養基倒入無菌的試管，制備得到斜面培養 基待用。
發酵培養基制備發酵培養基組成如下甘油50 g,酵母粉5 g,蛋白 胨20 g， NaH2P04.2H20: 1 g, CaC03: 4 g,水lOOOmL, pH值7.0， (3)
將要篩選的土樣研碎，加入無菌生理鹽水，充分振蕩，取上清液待用；
(4) 分離培養
將步驟(3)制備的上清夜涂布于平皿培養基上，在30。C培養2天，逐個 挑選單菌落，平行接種到2個同樣的多孔板培養基(多孔板X,多孔板Y) 上相互對應的小孔中，將多孔板放置在30。C培養1天，小孔中將長出單菌 落；
(5) 初步篩選
將新配制的變林試劑,在多孔板X的小孔中加入變林試劑0.1 mL,在35 。C 下放置20min，肉眼觀察，若在菌落周圍出現棕紅色的暈斑為陽性反應， 以二羥基丙酮標準品作為陽性對照，然后在多孔板Y上相對應的小孔中挑 選陽性單菌落，接種到斜面培養基，30。C下培養l天；
(6) 復篩
將培養好的斜面菌抹接種到發酵培養基中，在30°C、 100rpm的恒溫搖床 上振蕩培養48h，測定DHA含量，DHA含量高于2g/L的作為產二羥基丙 酮的微生物。
在此次篩選過程中，篩選到1林產二羥基丙酮的微生物菌林氧化葡糖桿
權利要求
1.二羥基丙酮高產菌的快速篩選方法，所述方法包括如下順序步驟(1)取待篩選菌株，接種至多孔板培養基中，28～37℃下培養至長出單菌落，加入斐林試劑，25～35℃下放置10～60min，單菌落周圍顯現棕紅色暈斑，為陽性菌株；所述多孔板培養基組成如下甘油20～50g/L，酵母粉2～5g/L，瓊脂18～20g/L，溶劑為水，pH5.0～7.0；(2)另取陽性菌株接種至斜面培養基，28～37℃下培養1～2天，獲得陽性菌株的斜面菌種；所述斜面培養基的組成如下甘油20～50g/L，酵母粉2～5g/L，瓊脂18～20g/L，溶劑為水，pH5.0～7.0；(3)將陽性菌株的斜面菌種接種至發酵培養基，28～37℃、100～200rpm振蕩培養24～60h，得到發酵液，測定發酵液中DHA含量，經發酵獲得的發酵液中DHA含量高于2g/L的陽性菌株，即為二羥基丙酮高產菌；所述發酵培養基組成如下甘油10～50g/L，酵母粉2～20g/L，蛋白胨1～20g/L，NaH2PO4·2H2O 1～5g/L，CaCO3，1～4g/L，溶劑為水，pH4.0～7.0。
2. 如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法為取待測土樣，粉 碎，加入無菌生理鹽水，振蕩，取上清液涂布于平亞培養基，28 37°C 培養1 2天，獲得的單菌落作為待篩選菌抹，按照步驟(1 ) (3 )步 驟進行篩選；所述平亞培養基組成如下甘油20 50g/L,酵母粉2 5g/L， 瓊脂18 20g/L,溶劑為水，pH5.0~7.0。
3. 如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下(1) 取待測土樣，粉碎，加入無菌生理鹽水，振蕩，取上清液涂布于平皿培養基，28 37。C培養1~2天，獲得的單菌落，作為待篩選 菌抹；所述平亞培養基組成如下甘油20 50g/L,酵母粉2 5g/L, 瓊脂18 20g/L，溶劑為水，pH5.0 7.0;(2) 無菌條件下，取待篩選菌抹，平行接種至多孔板培養基的2孔中， 28 37。C下培養至長出單菌落，在其中1孔中加入變林試劑 0.1 0.2mL， 25 35。C下放置10 60min,單菌落周圍顯現棕紅色暈 斑，為陽性菌林，相應未添加變林試劑的孔中得到的陽性菌抹的 單菌落用于下一步操作；所述多孔板培養基組成如下甘油 20~50g/L，酵母粉2 5g/L,瓊脂18 20g/L,溶劑為水，pH5.0 7.0;(3) 取陽性菌抹接種至斜面培養基，28 37。C下培養1 2天，獲得陽 性菌抹的斜面菌種；所述斜面培養基的組成如下甘油20 50g/L, 酵母4分2 5g/L，瓊脂18 20g/L,溶劑為水，pH5.0 7.0;(4) 將陽性菌林的斜面菌種接種至發酵培養基，28 37°C、 100 200rpm 振蕩培養24 60h，得到發酵液，測定發酵液中DHA含量，經發 酵獲得的發酵液中DHA含量高于2g/L的陽性菌抹，即為二羥基 丙酮高產菌；所述發酵培養基組成如下甘油10 50g/L,酵母粉 2 20 g/L,蛋白胨1 20 g/L, NaH2P04'2H20 1 5 g/L, CaC03 l 4g/L， -容劑為水，pH4.0 7.0。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述方法如下(1)取待測土樣，粉碎，加入無菌生理鹽水，振蕩，耳又上清液涂布于 平皿培養基，28。C培養l天，獲得的單菌落，作為待篩選菌抹； 所述平皿培養基組成如下甘油20g/L，酵母粉2g/L，瓊脂18g/L,溶劑為水，pH5.0;(2) 無菌條件下，取待篩選菌抹，平行接種至多孔板培養基的2孔中， 28。C下培養至長出單菌落，在其中1孔中加入變林試劑O.lmL, 25。C下放置60min,單菌落周圍顯現棕紅色暈斑，為陽性菌林， 相應未添加斐林試劑的孔中得到的陽性菌林的單菌落用于下一 步操作；所述多孔板培養基組成如下甘油20g/L,酵母粉2g/L, 瓊脂18g/L,溶劑為水，pH5.0;(3) 取陽性菌株接種至斜面培養基，28。C下培養l天，獲得陽性菌抹 的斜面菌種；所述斜面培養基的組成如下甘油20g/L，酵母粉 2g/L，瓊脂18g/L，溶劑為水，pH5.0;(4) 將陽性菌抹的斜面菌種接種至發酵培養基，30°C、 200rpm振蕩培 養24h,得到發酵液，測定發酵液中DHA含量，經發酵獲得的 發酵液中DHA含量高于2g/L的陽性菌抹，即為二羥基丙酮高產 菌；所述發酵培養基組成如下甘油10g/L,酵母粉2g/L,蛋白 胨1 g/L, NaH2P04'2H20 1 g/L, CaC03 lg/L,;容劑為水，pH5.0。
全文摘要
本發明涉及二羥基丙酮高產菌的快速篩選的方法，將待選菌落接種至多孔板培養基中培養至長出單菌落，加入斐林試劑進行檢測，單菌落周圍顯現棕紅色暈斑，為陽性菌株；另取陽性菌株接種至斜面培養基，28～37℃下培養1～2天，獲得陽性菌株的斜面菌種；斜面菌種接種至發酵培養基中，振蕩培養得發酵液，測定發酵液中DHA的含量，經發酵獲得的發酵液中DHA含量高于2g/L的陽性菌株，即為二羥基丙酮高產菌；本發明有益效果操作簡單、結果判斷直觀方便，能快速、高通量篩選或復壯產二羥基丙酮的微生物菌株，大大減少勞動量，提高勞動效率。
文檔編號C12Q1/04GK101225431SQ20081005951
公開日2008年7月23日 申請日期2008年1月25日 優先權日2008年1月25日
發明者沈寅初, 胡忠策, 薛亞平, 鄭裕國 申請人:浙江工業大學