專利名稱：人參和西洋參快速鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明術(shù)語(yǔ)中藥材來(lái)源品種鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及用特異的SNP鑒定人參和西洋參的方法。
背景技術(shù)：
人參(Panax ginseng)和西洋參(Panax quinquefolius)分別為五加科人參屬植物和干燥根，皆系名貴中藥材，因補(bǔ)虛治病效果顯著，臨床應(yīng)用日趨廣泛。二者的性狀非常相似，顏色基本一致，用傳統(tǒng)方法很難將其區(qū)別。但兩者在藥性和功效上有很大差別，人參具補(bǔ)氣、固脫、生津、益智、安神的功效。西洋參具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，益胃生津，清熱除煩之功效。 這就需要尋找到一種穩(wěn)定可靠的方法將人參和西洋參藥材、飲片和粉未加以鑒定區(qū)分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一個(gè)目的在于提供人參和西洋參鑒定用SNP。本發(fā)明第二個(gè)目的在于提供人參和西洋參鑒定用SNP在人參和西洋參鑒定用的應(yīng)用。本發(fā)明第三個(gè)目的在于提供人參和西洋參鑒定方法本發(fā)明提供的人參和西洋參鑒定用SNP，其核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示，其中， 自SEQ ID No. 1所示序列的5，端起第32位為C或T和/或第43位為T或C。本發(fā)明提供的SNP可用于鑒定人參和西洋參，如果自SEQ ID No. 1所示序列的5’ 端起第32位為C和/或第43位為T，則鑒定為人參，如果自SEQ ID No. 1所示序列的5’端起第32位為T和/或第43位為C，則鑒定為西洋參。本發(fā)明提供的人參和西洋參鑒定方法，其包括如下步驟1)以待測(cè)樣品DNA為模板，擴(kuò)增含有SEQ ID No. 1所示序列的片段；2)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，拼接后去除序列兩端5. 8S和26S基因區(qū)，獲得完整ITS2 基因間隔區(qū)，通過(guò)分析SEQ ID No. 1所示的序列，確定自SEQ ID No. 1所示序列的5’端起第32位和/或第43位的堿基。其中，如果自SEQ ID No. 1所示序列的5’端起第32位為C和/或第43位為T，則鑒定為人參，如果自SEQ ID No. 1所示序列的5’端起第32位為T和/或第43位為C，則鑒定為西洋參。本發(fā)明發(fā)明人通過(guò)大量的引物設(shè)計(jì)和篩選，意外地發(fā)現(xiàn)一對(duì)特異性好，擴(kuò)增效率高的引物，其序列為ITS2-F :AACCATCGAGTCTTTGAACGC ；ITS2-R CCTTGTAAGTTTCTTTTCCTCC 上述引物用于擴(kuò)增人參或西洋參的ITS2序列。本發(fā)明還提供含有上述引物的人參和西洋參鑒定試劑盒。本發(fā)明方法適用性更廣，能檢測(cè)所有能提取出DNA的人參和西洋參任何樣品。因此，能夠?qū)崿F(xiàn)人參、西洋參原植物、藥材、生飲片和粉未的快速、準(zhǔn)確鑒定。


圖1所示為ITS2序列的擴(kuò)增結(jié)果。圖2所示為人參和西洋參ITS2序列的比對(duì)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例11)從不同產(chǎn)地收集的39份人參和17份西洋參樣品，分別取20mg藥材，在MM400 球磨儀(德國(guó)Retsch)上進(jìn)行研磨，用天根生化科技(北京)有限公司的植物基因組DNA 試劑盒提取總DNA。表1人參和西洋參樣品序號(hào)樣品編號(hào)釆樣地點(diǎn)
1ZJFR-1-1 人參(根)__吉林撫松萬(wàn)良鎮(zhèn)高升村
2ZJFR-1-2 人參(根)__吉林撫松萬(wàn)良鎮(zhèn)高升村
3ZJFR-1-3 人參(根)__吉林撫松萬(wàn)良鎮(zhèn)高升村
4ZJFR-1-4 人參(根)__吉林撫松萬(wàn)良鎮(zhèn)高升村
5ZJCR-1-2—人參(根)—吉林長(zhǎng)白新房子鎮(zhèn)景秀村
6ZJCR-1-4 人參(根)__吉林長(zhǎng)白新房子鎮(zhèn)景秀村
7“ ZJCR-1-5_人參(根)_吉林長(zhǎng)白新房子鎮(zhèn)景秀村
8ZJJR-I 人參(根)__吉林集安頭道溝團(tuán)結(jié)村
9ZJAR-I 人參(根)__吉林安圖萬(wàn)寶鎮(zhèn)金化村
10ZJDR-I 人參(根)__吉林敦化黃泥河鎮(zhèn)威虎嶺村
11ZJYR-I 人參(根)__吉林靖宇燕平鎮(zhèn)三道溝村
12ZLQR-I 人參(根)__31寧清源大蘇河鄉(xiāng)長(zhǎng)沙村
13ZLXR-I 人參(根)__31寧新賓紅甸子朝族村
14ZJTR-I 人參(根)__遼寧新賓紅甸子朝族村
15ZJHR-I 人參(根)__吉林琿春涼水鎮(zhèn)石頭村
16ZJNR-I 人參(根)__吉林琿春涼水鎮(zhèn)石頭村
_0/ 17ZJNR-I-6 人參(根)__吉林琿春涼水鎮(zhèn)石頭村----
18ZHNR-I 人參(根)__黑龍江安寧臥龍鄉(xiāng)西尚子村
19ZLKR-I-1 人參(根)__還寧寬甸振江鎮(zhèn)石柱村
20ZLKR-I-5 人參(根)__還寧寬甸振江鎮(zhèn)石柱村
21ZR-1-1人參(根)吉林省撫松縣泉陽(yáng)鎮(zhèn)撫安林場(chǎng)
22ZR-2-1人參(根)吉林省撫松縣泉陽(yáng)鎮(zhèn)撫安林場(chǎng)
23ZR-2-3人參(根)吉林省撫松縣泉陽(yáng)鎮(zhèn)撫安林場(chǎng)
24ZR-3-1人參(根)吉林省撫松縣泉陽(yáng)鎮(zhèn)撫安林場(chǎng)
25ZR-3-3人參(根)吉林省撫松縣泉陽(yáng)鎮(zhèn)撫安林場(chǎng)
26ZR-4-1人參(根)吉林省撫松縣泉陽(yáng)鎮(zhèn)撫安林場(chǎng)
27ZR-4-3人參(根)吉林省撫松縣泉陽(yáng)鎮(zhèn)撫安林場(chǎng)
28ZLKR-2-1 人參(根)__31寧寬甸振江鎮(zhèn)石柱村
29ZLKR-3-1 人參(根)__遼寧寬甸振江鎮(zhèn)石柱村
30ZLKR-4-1 人參(根)__遼寧寬甸振江鎮(zhèn)石柱村
31HNR-I-2 人參(葉)__黑龍江寧安臥龍鄉(xiāng)西崗子村
32“ LXR-1-1_人參(葉)_遼寧新賓紅甸子朝族村
33LKR-2-3 人參(葉)__遼寧寬甸振江鎮(zhèn)石柱村
34LQR-2-5 人參(葉)__還寧清源大蘇河鄉(xiāng)長(zhǎng)沙村
35JJR-1-2人參(葉)吉林集安頭道溝團(tuán)結(jié)村
權(quán)利要求
1.人參和西洋參鑒定用SNP標(biāo)記，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID No. 1所示，其中，自SEQ ID No. 1所示序列的5，端起第32位為C或T和/或第43位為T或C。
2.權(quán)利要求1所述的SNP在鑒定人參和西洋參中的應(yīng)用，其特征在于，如果自SEQID No. 1所示序列的5’端起第32位為C和/或第43位為T，則鑒定為人參，如果自SEQ ID No. 1所示序列的5’端起第32位為T和/或第43位為C，則鑒定為西洋參。
3.人參和西洋參鑒定方法，其包括如下步驟1)以待測(cè)樣品DNA為模板，擴(kuò)增含有SEQID No. 1所示序列的片段；2)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，拼接后去除序列兩端5.8S和26S基因區(qū)，獲得完整ITS2基因間隔區(qū)，通過(guò)分析SEQ ID No. 1所示的序列，確定自SEQ ID No. 1所示序列的5’端起第32 位和/或第43位的堿基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，如果自SEQID No.l所示序列的5’端起第32位為C和/或第43位為T，則鑒定為人參，如果自SEQ ID No. 1所示序列的5’端起第 32位為T和/或第43位為C，則鑒定為西洋參。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，用于擴(kuò)增含有SEQID No. 1所示序列的片段的引物為ITS2-F :AACCATCGAGTCTTTGAACGC ；ITS2-R CCTTGTAAGTTTCTTTTCCTCC
6.含有權(quán)利要求5中所述的引物的人參和西洋參鑒定試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人參和西洋參鑒定方法，其包括如下步驟1)以待測(cè)樣品DNA為模板，擴(kuò)增含有SEQ ID No.1所示的序列；2)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，分析SEQ ID No.1所示的序列，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第32位為C和/或第43位為T，則鑒定為人參，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第32位為T和/或第43位為C，則鑒定為西洋參。本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)人參、西洋參原植物、藥材、生飲片和粉未的快速、準(zhǔn)確鑒定。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102505045SQ201110355478
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月10日
發(fā)明者姚輝, 宋經(jīng)元, 陳士林, 陳曉辰, 韓建萍 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所