專利名稱：林蛙油功能肽及其發酵乳飲料制備方法
技術領域：
本發明屬于保健食品領域，特別是涉及林蛙油功能肽及其發酵乳飲料的制備方法。
背景技術：
目前，我國林蛙產品的開發主要是蛤蟆油原干品，此外還有冰糖蛤士蟆油，林蛙油口服液、林蛙油膠囊、飲料等。從目前開發的有關林蛙產品看，存在著產品種類不全、產品用途單一等缺點，因此有必要采用現代加工新技術，如現代分離純化技術，生物酶工程技術， 微膠囊包埋技術等進行林蛙產品(包括食品、保健品、藥品等)的開發研究，以確保原料中有效成分生理活性不損失，高效利用。近年來，小肽類產品開發受到人們廣泛關注，因為肽類物質是由氨基酸分子聚合成的小分子物質，比蛋白質更易被人體消化吸收和利用，而且還具有特殊功能，如抗疲勞、 抗衰老、降血壓、排毒養顏等功效。為提高林蛙油利用率和營養價值，本發明研究采用酶工程技術對林蛙油進行可控水解，既改善了林蛙油的溶解性和風味特點，又使其中的蛋白質分解成低分子量的肽類物質，并且隨著水解程度的提高，使得具有特殊活性成分的游離雌二醇的利用也得以發揮更大功效。研究林蛙油生物酶解制備功能肽及發酵乳飲料，采用生姜汁蛋白酶作為生物酶之一，既改善了飲料風味，增加了林蛙油保健食品的花色品種，對提高人體免疫力、抗疲勞、抗缺氧和抗氧化等具有重要作用，從而促進林蛙產業的可持續發展。

發明內容
1)、技術問題本發明所要解決的技術問題是提供一種林蛙油功能肽發酵乳飲料的制備方法。2)、技術方案本發明解決問題的技術方案是本發明涉及一種林蛙油功能肽及其發酵乳飲料的制備方法，其特征在于該方法步驟如下(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按一定料液比向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹10h-15h，勻漿，按5% -20% 添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 2% -0. 5%加入生物酶，酶解時間為!3h-6h， 85°C20分鐘滅酶，3000轉/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2 %的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量1. 5-2倍的蒸餾水，用組織搗碎機搗碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內儲存備用。(2)功能肽發酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩定劑、山梨酸鉀溶液一混合調配原料乳一預處理一殺菌一冷卻一發酵一冷卻攪拌一混合調配一預熱均質一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調配選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發酵制得發酵乳，再加入1-5倍純凈水和肽液、白砂糖和檸檬酸等配料制備功能性發酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，lOmin，冷卻到43°C，采用3% _5%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發酵，攪拌混入配料，均質后二次殺菌(85°C，20min)罐裝制得成品。(3)功能肽發酵乳飲料的配方組成功能肽發酵乳飲料的口味與穩定性受多種因素的影響。選用功能肽酶解液、白砂糖、檸檬酸三個主要影響因素的添加量進行口味試驗；選用磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、 黃原膠、單甘脂等作為穩定性試驗因素，在單因素實驗基礎上分別進行正交設計。以感官評定作為比較指標，確定最佳配方為林蛙油功能肽酶解液10% -20%，白砂糖8% -15%，檸檬酸0. 1% -0.5%，穩定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)0. 1-0.6%，山梨酸鉀 0. 01-0. 05%。(4)功能肽發酵乳飲料的質量指標感官指標根據飲料的組織狀態、氣味、口感等綜合評分，10位有經驗教師和研究生參加評定。理化指標和微生物指標測定根據國標。經分析功能肽發酵乳飲料色澤呈乳白色， 澄清，無肉眼可見的外來雜質；口感酸甜，無異味，具有乳香味。蛋白質含量大于1. %;總酸(以檸檬酸計)為0. 23 %，細菌總數20個/ml ；大腸菌群數3個/IOOml ；致病菌未檢出。(5)林蛙油功能肽發酵乳飲料抗缺氧、抗疲勞動物實驗模型的建立與效果將小鼠隨機分為4組，每組12只，組間體重經t檢驗無顯著差異。對照組、低劑量、中劑量組和高劑量組喂標準小鼠飼料。試驗組每IOg體重每日每鼠灌胃給藥o.ani，其中低劑量、中劑量組和高劑量組分別含林蛙油功能肽發酵乳飲料為25%，50%和100%， 對照組同途徑給予等量的生理鹽水。飼養7天后進行試驗，測定各指標。①常壓抗缺氧實驗將試驗組和對照組于末次給予受試物30min后，將小鼠單個放入盛有7. 5克碳酸鈣和7. 5克氫氧化鈉的250ml廣口瓶中，瓶口和瓶塞涂抹凡士林后蓋嚴，使之不漏氣，立即計時，以呼吸停止為指標，觀察并記錄小鼠存活時間。研究證明實驗組與對照組相比， 高劑量組缺氧存活時間提高了 48% (ρ <0.01)，中劑量組缺氧存活時間提高了 33% (ρ < 0. 05)；低劑量組缺氧存活時間提高不明顯。表明林蛙油功能肽發酵乳飲料具有抗缺氧作用。②游泳試驗末次給予受試物30min后，給小鼠負體重5%重量，將小鼠放于水深不少于30cm，水溫25士 1 °C的游泳箱中。記錄自游泳開始至頭部全部沉入水中8s不能浮出水面的時間作為小鼠游泳時間。實驗組與對照組相比，高劑量組游泳時間提高了 64% (p<0.01)，中劑量組游泳時間提高了 38% (ρ < 0. 05)，低劑量組游泳時間提高不明顯。③肝糖原的測定末次給予受試物30min后，將小鼠放于水溫30士 1°C的水中游泳60min后停止， 立即處死小鼠取出肝臟，精確稱取200mg ；加Λ TCA4ml，每管勻漿Imin，3000r/min離心 15min，取上清液轉移至另一試管內。在沉淀中加入TCA^il，勻漿lmin，再次離心15min，取上清液；與第一次離心的上清液合并，充分混勻。取Iml上清液，每管加入95%的乙醇細1， 充分混勻至兩種液體間不留有界面。室溫放置過夜。沉淀完全后將試管于3000r/min離心15min。小心倒掉上清液并使試管放置lOmin，用Iml蒸餾水振蕩溶解后測定。高劑量組肝糖原含量為對照組的2. 75倍(ρ < 0. 001)，中劑量組肝糖原含量為對照組的1. 88倍(ρ <0.01)，低劑量提高不明顯。④血乳酸的測定末次給予受試物30min后，將小鼠放于水溫30 士 1°C的水中負重4%游泳IOmin停止，分別從游泳前、游泳之后的小鼠眼內眥靜脈叢取血。于5ml離心管中加入NaF溶液 0. 48ml，準確吸取全血20μ 1加入試管底部。用試管上清液沖洗微量吸管數次，再加入蛋白沉淀劑1. 5ml，振蕩混勻，3000r/min離心lOmin，取上清液測定。高中劑量組游泳后與游泳前相比，血乳酸含量與對照組相比分別減少63. 5% (ρ <0.01)和35. 6% (ρ < 0. 05)，并且趨于游泳前的乳酸水平，而低劑量組血乳酸含量與對照組相比變化不明顯。從以上②③④結果可以看出，高中劑量實驗組與對照組相比游泳時間顯著提高； 肝糖原含量顯著性提高，游泳后與游泳前相比，血乳酸含量變化較小，表明林蛙油功能肽發酵乳飲料具有延緩疲勞出現的作用。在本發明中所述的發酵劑選自保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌混合發酵劑。本發明中所述的生物酶選用姜汁蛋白酶和木瓜蛋白酶或姜汁蛋白酶和堿性蛋白酶組合。本發明涉及的林蛙油功能肽發酵乳飲料配方中的白砂糖可以用蜂蜜、糖醇和甜蜜素等甜味劑代替。本發明涉及的林蛙油功能肽發酵乳飲料配方中的穩定劑主要有磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等。本發明制得的產品證明具有抗疲勞和抗缺氧作用。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。實施例1一種林蛙油功能肽發酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹12h，勻漿，按10%添加生姜汁后加熱煮沸池，冷卻到60°C，按0. 4%加入木瓜蛋白酶，酶解時間為4h，85°C 20分鐘滅 酶，3000轉/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷 卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量2倍的蒸餾水，用組織搗碎機搗碎 后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內 儲存備用。(2)功能肽發酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩定劑、山梨酸鉀溶液一混合調配原料乳一預處理一殺菌一冷卻一發酵一冷卻攪拌一混合調配一預熱均質一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調配選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發酵制 得發酵乳，再加入2倍純凈水和15%的林蛙油功能肽酶解液，8%的白砂糖，0. 15%的檸檬 酸，0.3%的穩定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0. 05%的山梨酸 鉀等配料制備功能性發酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 3%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發酵，攪拌混入配料，均質后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。實施例2一種林蛙油功能肽發酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷 卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹10h，勻漿，按10%添加生 姜汁后加熱煮沸池，冷卻到60°C，按0. 4%加入堿性蛋白酶，酶解時間為證，850C 20分鐘滅 酶，3000轉/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷 卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量1. 5倍的蒸餾水，用組織搗碎機搗 碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱 內儲存備用。(2)功能肽發酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩定劑、山梨酸鉀溶液一混合調配原料乳一預處理一殺菌一冷卻一發酵一冷卻攪拌一混合調配一預熱均質一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調配
選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發酵制得發酵乳，再加入3倍純凈水和10%的林蛙油功能肽酶解液，10%的白砂糖，0. 2%的檸檬酸，0.4%的穩定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0.03%的山梨酸鉀等配料制備功能性發酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 3%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發酵，攪拌混入配料，均質后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。實施例3—種林蛙油功能肽發酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹12h，勻漿，按15%添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 5%加入木瓜蛋白酶，酶解時間為5h，85°C 20分鐘滅酶，3000轉/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量1. 5倍的蒸餾水，用組織搗碎機搗碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內儲存備用。(2)功能肽發酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩定劑、山梨酸鉀溶液一混合調配原料乳一預處理一殺菌一冷卻一發酵一冷卻攪拌一混合調配一預熱均質一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調配
選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發酵制得發酵乳，再加入4倍純凈水和15%的林蛙油功能肽酶解液，15%的白砂糖，0.3%的檸檬酸，0.5%的穩定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0. 04%的山梨酸鉀等配料制備功能性發酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 4%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發酵，攪拌混入配料，均質后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。實施例4一種林蛙油功能肽發酵乳飲料，是按照下列配方與制備方法制得(1)林蛙油功能肽的制備精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按料液比1 20向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹13h ，勻漿，按15%添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 5%加入堿性蛋白酶，酶解時間為3h，85°C 20分鐘滅酶，3000轉/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。姜汁的制備是將生姜去皮后洗凈，加入姜重量2倍的蒸餾水，用組織搗碎機搗碎后四層紗布過濾得粗姜汁，再3000轉/分20分鐘離心去除顆粒，得生姜汁放于4°C冰箱內儲存備用。(2)功能肽發酵乳飲料的制備工藝過程檸檬酸溶液、穩定劑、山梨酸鉀溶液一混合調配原料乳一預處理一殺菌一冷卻一發酵一冷卻攪拌一混合調配一預熱均質一殺菌 —冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調配 選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發酵制得發酵乳，再加入2倍純凈水和10%的林蛙油功能肽酶解液，12%的白砂糖，0.3%的檸檬酸，0.5%的穩定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)和0. 03%的山梨酸鉀等配料制備功能性發酵乳飲料。此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用 5%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌(1 1)發酵，攪拌混入配料，均質后二次殺菌(85°C， 20min)罐裝制得成品。
權利要求
1.一種林蛙油功能肽發酵乳飲料，其特征在于其制備方法如下檸檬酸溶液、穩定劑、山梨酸鉀溶液一混合調配原料乳一預處理一殺菌一冷卻一發酵一冷卻攪拌一混合調配一預熱均質一殺菌一冷卻一灌裝一成品功能肽和白砂糖溶液一混合調配選用鮮牛奶作為基料，通過保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌兩種活性乳酸菌發酵制得發酵乳，再加入1-5倍純凈水和肽液、白砂糖和檸檬酸等配料制備功能性發酵乳飲料；此工藝中殺菌方法采用95°C，10min，冷卻到43°C，采用3% 保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌 (1 1)發酵，攪拌混入配料，均質后二次殺菌(85°C，20min)罐裝制得成品。
2.根據權利要求1所述的林蛙油功能肽發酵乳飲料的制備，其特征在于所涉及的林蛙油功能肽的制備方法如下精選林蛙油一浸泡一勻漿一酶解一離心分離一上清液滅酶一脫腥脫色一過濾冷卻一功能肽酶解溶液按一定料液比向精選林蛙油中加入蒸餾水，浸泡溶脹10h-15h，勻漿，按5% -20%添加生姜汁后加熱煮沸2h，冷卻到60°C，按0. 2% -0. 5%加入生物酶，酶解時間為!3h-6h， 85°C 20分鐘滅酶，3000轉/分20分鐘離心分離，上清液活性炭吸附(40°C，2%的活性炭處理Ih)，過濾冷卻，即得功能肽酶解液。
3.根據權利要求2所述的林蛙油功能肽的制備，其特征在于所述的生物酶選用姜汁蛋白酶和木瓜蛋白酶或姜汁蛋白酶和堿性蛋白酶組合。
4.根據權利要求1所述的林蛙油功能肽發酵乳飲料，其特征在于工藝配方為添加林蛙油功能肽酶解液10 % -20 %，白砂糖8 % -15 %，檸檬酸0.1^-0.5%,穩定劑(磷酸二氫鈉、 羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)0. 1-0. 6%，山梨酸鉀0. 01-0. 05%。
5.根據權利要求1和權利要求4所述的林蛙油功能肽發酵乳飲料，其特征在于配方中的白砂糖可以用蜂蜜、糖醇和甜蜜素等甜味劑代替。
6.根據權利要求1-5所述制備的林蛙油功能肽發酵乳飲料，其特征在于經質量指標檢測完全符合產品標準，且每天食用一定劑量具有抗疲勞和耐缺氧作用。
全文摘要
本發明公開了一種林蛙油功能肽發酵乳飲料及其制備方法，屬于保健食品技術領域。該發酵乳飲料的制備包括林蛙油功能肽的制備和功能肽發酵乳飲料的制備。它的工藝配方為林蛙油功能肽酶解液，白砂糖，檸檬酸，穩定劑(磷酸二氫鈉、羧甲基纖維素鈉、黃原膠、單甘脂等)，山梨酸鉀。本發明涉及的發酵乳飲料原料簡單易得，產品酸甜可口，色香味協調愉悅，可接受性強。本發明采用酶工程技術對林蛙油進行可控水解，既改善了林蛙油的溶解性和風味特點，又使其中的蛋白質分解成低分子量的肽類物質，使其更易吸收并提高其營養功能特性。本發明涉及的林蛙油功能肽發酵乳飲料質量指標經檢測完全符合產品標準，經功能試驗證明其具有抗疲勞和抗缺氧作用。
文檔編號A23J3/04GK102440347SQ201110404740
公開日2012年5月9日 申請日期2011年12月8日 優先權日2011年12月8日
發明者葉海青, 張鐵華, 梁海艷, 鄭健, 陳玉江 申請人:吉林大學