專利名稱：抑制酪氨酸酶表達的雙鏈rna寡核苷酸的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的用于降低酪氨酸酶表達的雙鏈RNA寡核苷酸，其在化妝和/或藥學目的上的用途，以及它與大小小于或等于I μ m、ζ電勢為10_80mV的陽離子型顆粒的締
八
口 ο
背景技術：
酪氨酸酶(單苯酚二羥基苯丙氨酸氧氧化還原酶EC I. 14. 18. I)是參與皮膚色素形成機制的必需酶。它具體催化以下反應依靠其羥化酶活性催化酪氨酸轉變成多巴 (二羥基苯丙氨酸)并且依靠其氧化酶活性將多巴轉化成多巴醌(dopaquinone)。酪氨酸酶只有在某些生物因子的作用下處于成熟狀態時才起作用。該酶在治療如黑色素瘤(Riley等，J. Immunother. 2001，21，212-220)或者 Vogt-Koyanagi-Harada 病(Read 等，Curr. Opin. Ophthalmol. , 2000,11,437-442)的疾病中也是有利的。皮膚色素形成的形成機制，也就是黑色素的形成，是特別復雜的，且示意性地包括下面的主要步驟酪氨酸一多巴一多巴醌一多巴色素一黑色素因此,人類皮膚的色素形成是由樹突細胞、黑色素細胞合成黑色素而導致的。后者含有被稱為黑素體的細胞器，其是黑色素生物合成的部位。黑素體在沿著樹突遷移后，從黑素細胞轉移到角質形成細胞。然后在表皮分化過程中，角質形成細胞被轉運到皮膚表面 (Gilchrest BA,Park HY,Eller MS,Yaar M,Mechanisms of ultraviolet light-induced pigmentation. Photochem Photobiol 1996 ;63 :1-10 ;Hearing VJ, Tsukamodo K, Enzymatic control of pigmentation in mammals. FASEB J 1991 ；5 :2902-2909)。在黑素原生成酶中，酪氨酸酶是催化黑色素合成前兩個步驟的關鍵酶。酪氨酸酶的純合突變導致I型眼皮膚白化病，所述I型眼皮膚白化病特征是黑色素合成的完全喪失(Toyofuku K， Wada I,Spritz RA,Hearing VJ,The molecular basis of oculocutaneous albinism type I (OCAl) sorting failure and degradation of mutant tyrosinases results in a lack of pigmentation. Biochem J. 2001 ；355 :259-269)。由于著色過度紊亂是由黑色素生產的增加導致的，所以人們發現開發新的治療方法很重要，其原理是基于抑制酪氨酸酶的活性。大多數已知的亮膚(skin-lightening)化合物是酹類/兒茶酹類。這些化合物抑制酪氨酸酶，但是這些化合物的絕大多數對黑色素細胞具有細胞毒性，這會導致皮膚的永久性褪色。因此，看起來既高效又表現出好的耐受性的新的酪氨酸酶抑制化合物應用于人類是有利的。最近，雙鏈RNA dsRNA寡核苷酸，且更具體是siRNA寡核苷酸(12至40個核苷酸的)的應用，使得在如皮膚護理或頭發護理的化妝領域，以及皮膚病學領域和藥學領域獲得特別的活性成為可能。然而，已知siRNA在體內應用存在各種困難。除了在局部應用這些siRNA時，為使其到達靶細胞的這些siRNA的穿透問題之外，特別是由于穿過角質層的困難，經驗已顯示施用siRNA，如很多出版物報道的會觸發干擾素應答(Sledz CA 等，Activation of the interferon system by short-interfering RNAs. Nat Cell Biol. 2003 ；9 :834-9. Katalin Kariko 等，Small Interfering RNAs Mediate Sequence-Independent Gene Suppression and Induce Immune Activation by Signaling through Toll-Like Receptor 31. J. Immunol. 2004 ; 172 :6545-6549.Judge AD 等，Sequence-dependent stimulation of the mammalian innate immune response by synthetic siRNA. Nat Biotechnol. 2005 ；23 :457-62)，而且還會誘導或抑制非 siRNA 革巴向的基因的表達(Jackson等，Expression profiling reveals off-target gene regulation by RNAi. Nat Biotechnol. 2003 ；21 :635-7)，這兩種現象都是非常不合需要的。專利申請US 2004/0215006描述了有抗酪氨酸酶活性的雙鏈的和反義單鏈的RNA 寡核苷酸；所用的實施例只涉及反義單鏈RNA寡核苷酸。具體地，它沒有證明與這些反義 RNA同源的siRNA是否有效。一些作者已強調，如siRNA的雙鏈RNA寡核苷酸和反義單鏈RNA寡核苷酸具有不同的祀，且反義RNA的活性不能外推到相同序列的siRNA(Xu等,Effective small interfering RNAs and phosphorothioate antisense DNAs have different preferences for target sites in the luciferase mRNAs. BBRC 2003;306:712-717)。此外，在該文獻US 2004/0215006中，提出的siRNA的濃度是50_200nM。如上所指出的，Jackson等已經描述了未被在濃度為IOOnM時使用的siRNA靶向的基因的強的正調節和負調節。類似地，在WO 2005/060536中，描述了特異性抑制酪氨酸酶的siRNA，其所提出的濃度范圍非常寬，且可能導致組合物中包含了非常大量的siRNA，由此會觀察到非siRNA靶向的基因的正調節和負調節。在化妝或治療用途的范圍內，這種非靶向基因的調節是不能接受的，特別是由于它不可預見的特性。本申請人已開發了特異性抑制酪氨酸酶表達的新的siRNA，從所述siRNA中選擇展示一定活性的siRNA，從而所述siRNA可在小于或等于InM的劑量下使用。除了解決涉及誘導非特異基因的問題之外，本申請人已證實了這些siRNAs序列不會誘導干擾素應答。為此，按照Invitrogen 公司銷售的 “BLOCK-iT RNAi Stress Response Control Kit(Human)for monitoring interferon-mediated stress response to double-stranded RNA in human cells”的手冊中描述的方案,測量了已知受干擾素誘導的0AS-1和IFIT-I (干擾素誘導的三十四肽(tetratricop印tide)重復結構域)基因的表達(Stefan F. Wieland 等，Searching for Interferon-Induced Genes that inhibitHepatitis B Virus Replication in Transgenic Mouse Hepatocytes, J. of Virology 2003,77 :1227-1236)。此外，這些酪氨酸酶特異性siRNA與大小小于或等于I μ m、ζ電勢為10_80mV的陽離子型顆粒締合，使得可能非常顯著地提高所述siRNA向如皮膚的三維模型的靶細胞的穿透。一旦穿透，酪氨酸酶特異性siRNA就變得有活性。穿透可通過與siRNA附著的熒光標記進行評價，且其活性可通過定量PCR對靶信使進行定量或通過測定對應于靶信使的蛋白而進行評價。本發明的陽離子型顆粒可以是表面活性劑膠束、嵌段或非嵌段聚合物膠束、 陽離子脂質體和非離子表面活性劑微囊(niosome)、陽離子油質體、陽離子毫微乳劑 (nanoemulsion)、以及陽離子有機或無機顆粒和毫微膠囊(nanocapsule)。

發明內容
這樣，本發明的第一個主題涉及一種選自寡核苷酸序列SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 和 48，任選地經過修飾的雙鏈 RNA 寡核苷酸(也稱作dsRNA或siRNA)。利用dsRNA，且更具體是siRNA (短干擾RNA)，使得通過降解編碼靶蛋白的mRNA而獲得特異性抑制該蛋白合成的活性成為可能。靶mRNA的降解通過RISC復合體(RNA誘導的沉默復合體)的活化而實現，所述RISC復合體通過dsRNA的反義鏈與mRNA的結合而發揮其作用(參見 Tuschl T. Chem. Biochem. 2001 ；2 :239-245 ；Nykanen A & al, Cell 2001 ； 107 :309-321 ；Dorsett Y.和Tuschl T.Nat Rev Drug Discov. 2004；3 :318-329 ；Downward J. BMJ. 2004 ；328 :1245-1248 ；Shanker P.等，JAMA 2005 ；293 :1367-1373)。實現的分子結構包括由12-40個核苷酸，優選23-27個核苷酸組成的雙鏈RNA片段。這些雙鏈RNA寡核苷酸可優選地由同源的有義鏈以及與人酪氨酸酶 mRNA(GenBank登記號NM_000372)序列互補的反義鏈組成。該雙鏈RNA寡核苷酸具有平頭末端或者有2-6個核苷酸的不配對末端。雙鏈RNA寡核苷酸可通過多種手動的或自動的、體內的或體外的方法合成。體外合成方法可以是化學方法或者酶法，例如利用RNA聚合酶(例如通過，T3、T7 或者SP6)，其會對選定的DNA(或者cDNA)序列模型進行轉錄。下列文獻中描述了許多種體內合成雙鏈RNA的方法；它們可在各種細菌細胞類型，或者高等生物細胞類型中進行(Sambrook等，Molecular Cloning, A Laboratory Manual,第二版(1989), DNA cloning,第 I 卷和第 II 卷，D. N. Glover (1985 版), Oligonucleotide Synthesis, M. J. Gaits (1984 版),Nucleic Acid Hybridation, B. D. Hames 和 S. J. Higgins(1984 版)，Transcription and Translation B. D. Hames 和 S. J. Higgins(1984 版)，Animal Cell Culture, R. I. Freshney(1986 版)，Immobilized Cells and Enzymes, IRL Press (1986), B. Pertal, A Practical Guide to Molecular Cloning(1984), Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells, J. H. MiIIer 和 M.P.Calos, Cold Spring Harbor Laboratory(1987 版),Methods in Enzymology,154卷，Wu 和 Grossman,以及 155 卷，ffu, Mayer 和 Walker (1987), Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology, Academic Press, London, Scopes (1987), Protein Purification !Principle and Practice,第二版，Springer-Verlag, N.-Y.以及 Handbook of Experimental Immunology,第 I-IV 卷，C. D. Weir 和 CC. Blackwell (1986))。還可參考專利申請WO 01/36646、W001/75164以及US 2003/0088087中描述的合成方法。優選地，本發明的雙鏈RNA寡核苷酸通過在2’-位置添加_0_甲基基團進行修飾。雙鏈RNA寡核苷酸可進行各種修飾，所述修飾具體是如文獻US2004/014956中所述的修飾。有利地，修飾會導致雙鏈RNA寡核苷酸更為穩定，而且更優選地，導致雙鏈RNA寡核苷酸不會引起干擾素應答，這種性質對于體內應用是必需的。這些雙鏈RNA寡核苷酸還可對有義鏈進行修飾，從而使得其不能被整合入RISC，并從而不會引起副作用。優選地，將使用SEQ ID N0S. 1、2、4、13、16、35、37、40和42的雙鏈RNA寡核苷酸， 按照下文實施例2的方案所測量的，其在0. 016nM時具有的酪氨酸酶mRNA降解效率大于 50%。本發明的主題還涉及包含至少一種選自寡核苷酸序列SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 和 48 的雙鏈 RNA 寡核苷酸的組合物。在該組合物中，雙鏈RNA寡核苷酸的存在濃度是小于或等于100 μ M，優選小于或等于10 μ Μ，且更優選小于或等于I μ M0本發明的組合物優選適于局部施用于身體表面，也就是皮膚、體被、粘膜以及眼睛。在本發明的一個優選的實施方案中，雙鏈RNA寡核苷酸與大小小于或等于I μ m、 ζ電勢為10-80mV的陽離子型顆粒締合。在該實施方案中，雙鏈RNA寡核苷酸會粘附到顆粒的表面，后者用作為載體以使其穿透進入皮膚結構和進入皮膚、粘膜或眼睛的靶細胞而用于化妝、皮膚病學和/或眼的應用。本發明的陽離子型顆粒是這樣的顆粒，其大小小于或等于I μ m，優選小于或等于 500nm,更為優選小于或等于300nm,可能采用，例如Brookhaven公司的激光顆粒分級器的 BI90 plus型測量所述大小，且ζ電勢為10_80mV,所述電勢可用Coultronics公司的ζ 儀DELSA 440型進行測量。陽離子型顆粒可選自表面活性劑膠束，具體是非離子兩親型表面活性劑和陽離子表面活性劑膠束，嵌段聚合物膠束，具體是陽離子兩親型嵌段聚合物膠束、非離子兩親型嵌段聚合物和陽離子兩親型嵌段聚合物膠束和非離子兩親型嵌段聚合物和陽離子表面活性劑膠束，非離子和陽離子表面活性劑脂質體，非離子表面活性劑微囊，油質體，毫微乳劑顆粒，毫微膠囊，有機顆粒或無機顆粒。
具體實施例方式下面且以未窮盡的方式列舉根據本發明可用的陽離子型顆粒。表面活性劑膠束
我們回想一下，膠束是當兩親型分子溶于水中或油中，在超過某一特定的稱為臨界的CMC濃度時自發形成的聚集體。可用于本發明范圍內的膠束由至少一種陽離子表面活性劑組成。該陽離子表面活性劑可與一種或多種非離子兩親型表面活性劑締合。本領域技術人員可以從McCutcheons 的 “emulsifiers and detergents” 1998 版以及其后的版本中方便地選擇非離子和陽離子的表面活性劑。作為非限制性的例子，下面列出了本發明范圍內可用的陽離子表面活性劑。非限制地，可用的非離子表面活性劑是ΡΕ0、甘油和聚甘油、氧乙烯化或未氧乙烯化的山梨聚糖、蔗糖、氧乙烯化或未氧乙烯化的葡萄糖、麥芽糖、PPO-PEQ的烷基和聚烷基 (C6至C30，飽和的或未飽和的，分支的或未分支的)酯或醚。就非離子表面活性劑和陽離子表面活性劑的混合物來說，其各自的重量比將為 99/1 至 1/99。形成膠束的表面活性劑的量將取決于后者的CMC。然而，在本發明中，膠束表面活性劑的濃度以其重量計算相對于組合物總重量為O. 1-10%，且優選為O. 2-5%。嵌段聚合物膠束兩親型嵌段聚合物膠束可按照文獻WO 04/035013中描述的方法進行制備。用于制備與根據本發明的dsRNAs締合的膠束的嵌段共聚物具體是兩親型嵌段聚合物，其優選為非離子的，二嵌段或三嵌段，且其與水接觸能形成膠束。它們具體是二嵌段 (A-B)或三嵌段(A-B-A)的類型，A對應于非離子親水聚合物嵌段而B對應于疏水聚合物嵌段。該聚合物的分子量可為1000至100000，而Α/B的比率可為1/100至50/1。在本發明中，可用到三種類型的膠束-陽離子兩親型嵌段聚合物膠束；-非離子兩親型嵌段聚合物與陽離子兩親型嵌段聚合物締合的混合膠束；和-非離子兩親型嵌段聚合物與陽離子表面活性劑締合的膠束。非離子親水聚合物嵌段可選自聚環氧乙烷(PEO)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。疏水聚合物嵌段可選自聚苯乙烯、聚(叔丁基苯乙烯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、 聚(丙烯酸乙酯)、聚(丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(乙酸乙烯酯)、聚己酸內酯、聚己內酰胺、聚二甲基硅氧烷、聚(C3-C6環氧烷)、聚(天冬氨酸)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚亮氨酸、聚丁二烯、聚乙烯、聚丙烯、聚丁烯。嵌段共聚物優選選自下列嵌段共聚物-聚環氧丙烷/聚環氧乙烷-聚苯乙烯/聚氧乙烯-聚(甲基丙烯酸甲酯)/聚氧乙烯-聚(甲基丙烯酸丁酯)/聚氧乙烯-聚氧化丁烯/聚氧乙烯-聚己酸內酯/聚氧乙烯-聚乙烯/聚氧乙烯-聚氧乙烯/聚氧化丁烯/聚氧乙烯。在本發明中，有必要向膠束組合物中添加
-陽離子兩親型嵌段聚合物，所述嵌段中的一種是陽離子的且舉例來說可選自-聚(聚甲基丙烯酸三甲基乙銨)；-季銨化的聚(甲基丙烯酸二甲氨基乙酯)；-聚甲基乙烯基咪唑鐵(polymethyvinylimidazolium)；-聚(乙烯基苯甲基三甲基氯化銨)(poly(viny Ibenzy I trimethyl ammonium chloride))。非離子兩親型嵌段聚合物與陽離子兩親型嵌段聚合物的締合為使兩者之間的比率為99/1至1/99 ；和/ 或-如下面所列的至少一種陽離子表面活性劑。在這種情況下，非離子兩親型嵌段聚合物與陽離子表面活性劑的各自比率將為 50/50 至 99/1。在本發明中，與陽離子表面活性劑締合或未締合的膠束嵌段聚合物的濃度，以其重量計算相對于組合物的總重量將為0. 1-10%,且優選0. 2-5%。在本明的一個變形中，也可能形成由如上所述的陽離子兩親型嵌段聚合物組成的膠束。脂質體和非離子表面活性劑微囊能夠形成非離子脂質體的非離子兩親型脂質具體是專利申請EP O 582503中描述的那些。具體地，非離子兩親型脂質可由至少一種多元醇和至少一種脂肪酸的酯混合物組成，其中所述多元醇選自含有1-60個環氧乙烷單元的聚乙二醇、山梨聚糖、具有2-60個環氧乙烷單元的山梨聚糖、具有2-30個環氧乙烷單元的甘油、含有2-15個甘油單元的聚甘油、蔗糖、具有2-30個環氧乙烷單元的葡萄糖，所述脂肪酸含有線性或分支的、飽和或不飽和的C5-C17烷基鏈，每個多元醇基團的烷基鏈數目為1-10。術語“酯混合物”不但包括不同化學族的純酯的混合物，也包括以各種比例含有相同族的多元醇的幾種化學純酯的任何產品。具體地，在其親水部分具有統計學化學式的產品就是這樣，例如化學式CO-(OCH2-CHOH-CH2)n-OH的聚甘油酯，其中η是統計學值，且其可含有n = l,n = 2，n = 3，n = 4等的各種比例的酯；在其親脂部分含有幾種烷基鏈的酯也是這樣，例如椰油酸酯，其含有C5-C17烷基鏈，或異硬脂酸酯，其中C17烷基鏈是同分異構形式的復雜混合物；由相同多元醇的單_、二 _、三-或聚酯的混合物組成的產品也是這樣。需注意的是，只含有能夠形成小泡的單酯和另一種類型雜質的產品不能用于本發明。商品酯可單獨地用于本發明，因為它們實際上是酯的混合物，它們為例如下述的- “ICI”公司出售的商品名為“SFAN 20，40，60和80”的山梨聚糖(或山梨糖醇酐)和脂肪酸的偏酯；- “ΝΙΚΚ0”公司出售的商品名為“SI 10 R NIKK0L”的異硬脂酸山梨聚糖酯；- “ICI”公司出售的名為“TWEEN 61”的、具有4個環氧乙烷單元的硬脂酸山梨聚
糖酷；- “ICI”公司出售的名為“MYR J 45”的、含有8個環氧乙烷單元的硬脂酸聚乙二
9醇酯；- “ΝΙΚΚ0”公司出售的名為“MYS 4”的化學式為EMI6. I的單硬脂酸聚乙二醇酯， 其中化學式η等于4;-“UNICHEMA”公司出售的化學等級或生物技術生產的等級的分子量為400的硬脂
酸聚乙二醇酯；- “H0ECHST”公司出售的名為“HOSTACERINE DGS”的、具有4個環氧乙烷單元的硬
脂酸二甘油酯；- “ΝΙΚΚ0”公司出售的名為“TETRAGLYN 1S”的硬脂酸四甘油酯；- “S0LVAY”公司出售的異硬脂酸二甘油酯；- “ΝΙΗ0Ν”公司出售的名為“EMALEX DSG 2”的二硬脂酸二甘油酯；- “CR0DA”公司出售的名為“F50、F70、F110 和 F160CR0DESTA” 的單-、二-和三硬
脂酸棕櫚酸蔗糖酯；- “GRILL0”公司出售的名為“GRILLOTEN PSE 141 G”的單硬脂酸棕櫚酸蔗糖酯和二硬脂酸棕櫚酸蔗糖酯的混合物；- “ICI”公司出售的名為“ARLAT0NE 2121”的硬脂酸蔗糖酯和椰油酸蔗糖酯的混合物；- “AMERCH0L”公司出售的名為“GLUCAM E 20 DI STEARATE的、具有20個環氧乙烷單元的二硬脂酸甲基葡萄糖酯。當然，可以使用以上已經是混合物的產品相互之間的混合物，或者這些產品與純的產品的混合物。陽離子表面活性劑選自下文所列的，且從而它們賦予分散體的pH為5-8 ;在脂質相中，非離子兩親型脂質的量與陽離子表面活性劑的量的重量比為50/1到50/25，且分散體的脂質相與水相的重量比為1/1000到300/1000。油質體本發明涉及的油質體在專利申請EP O 705 593中有描述。它們包括一種水包油類型的乳劑，其由帶有層狀液晶包被的油質小球構成，分散在水相中，其特征是每個油質小球作為一個單位，包被著單層的或多層的層(經冷凍斷裂(cryofracture)后利用透射電子顯微鏡術可以觀測到ι- ο個薄片)，所述層由至少一種親脂表面活性劑、至少一種親水的表面活性劑以及至少一種陽離子表面活性劑得到，賦予乳劑的PH為5-8，所述被包被的油質小球的平均直徑小于500納米。親脂表面活性劑和親水表面活性劑各含有至少一種具有超過約12個碳原子的飽和脂肪鏈。更為優選的是，該脂肪鏈含有16至22個碳原子。根據本發明的另一個優選的實施方案，親脂表面活性劑的HLB為約2至約5。為大家所熟知的是，術語HLB (親水-親脂平衡)用于指表面活性劑的親水基團的大小和強度與親脂基團的大小和強度之間的平衡。這樣的親脂表面活性劑的例子是二硬脂酸蔗糖酯、二硬脂酸二甘油酯、三硬脂酸四甘油酯、十硬脂酸十甘油酯、單硬脂酸二甘油酯、三硬脂酸六甘油酯、五硬脂酸十甘油酯、 單硬脂酸山梨聚糖酯、三硬脂酸山梨聚糖酯、單硬脂酸二甘醇酯、棕櫚酸和硬脂酸的甘油酯、聚氧乙烯化的單硬脂酸酯20E (包含2個氧乙烯單元)、單山崳酸甘油酯和二山崳酸甘油酯以及四硬脂酸季戊四醇酯。親水表面活性劑優選具有約8至約12的HLB。作為這樣的親水表面活性劑例子，可提及下列化合物聚氧乙烯化的山梨糖醇酐單硬脂酸酯40E、聚氧乙烯化的山梨糖醇酐三硬脂酸酯200E、聚氧乙烯化的單硬脂酸酯 80E、單硬脂酸六甘油酯、聚氧乙烯化的單硬脂酸酯100E、聚氧乙烯化的二硬脂酸酯120E以及聚氧乙烯化的二硬脂酸甲基葡萄糖酯200E。陽離子表面活性劑可選自下文中描述的化合物。毫微乳劑陽離子型顆粒還可以選自水包油的毫微乳劑，其包含在水相中分散的油相，其油質小球的數均大小小于lOOnm，特征是它們包含至少一種兩親型脂質，所述兩親型脂質含有至少一種非離子兩親型脂質和一種陽離子兩親型脂質，油相和兩親型脂質存在的含量使得油相/兩親型脂質的重量比為3到10。毫微乳劑一般具有透明至淺藍色的外觀。所述毫微乳劑的透明度通過在600nm下處于10-90%的透射系數，或者通過濁度進行測量。本發明的組合物的濁度是60到400NTU， 且優選70到300NTU，所述濁度是利用型號為2100P的HACH便攜式濁度儀在約25°C下測量的。本發明的毫微乳劑的油質小球的數均大小小于lOOnm，且優選20-80nm，且更優選 40-60nm。小球大小的降低使得可能促進活性劑穿透進入皮膚表面層(載體效應)。根據本發明的毫微乳劑優選在4_45°C的溫度制備，且因此與熱敏活性劑相容。這些分散體在下列申請中有具體的描述EP 0728 460、EP O 879 589、EP I 010 413、EP I 010 414、EP I 010 416、EP I 013 338、EP I 016 453、EP 1018 363、EP I 025 898以及EP I 120 102。在所有這些申請中都指明，為了提高顆粒的穩定性，可向非離子表面活性劑(或混合物)中加入離子表面活性劑。在本發明的情況中，一種或多種陽離子表面活性劑將專門用作離子表面活性劑。上述參考文獻中指出的比例予以保留，且以陽離子表面活性劑為例，選擇列表中對所有顆粒通用的。非離子表面活性劑，優選水溶性的或在水分散性的，含有至少一種疏水的嵌段和至少一種親水的嵌段。本發明的非離子兩親型脂質優選選自I/硅氧烷表面活性劑，2/在溫度低于或等于45°C時為液體的兩親型脂質，其選自至少一個多元醇或至少一個脂肪酸的酯，其中脂肪酸含有至少一個線性或分支的、飽和或不飽和的，且具體是不飽和的或分支的、C8-C22烷基鏈，所述多元醇選自含有I至60個環氧乙烷單元的聚乙二醇、 山梨聚糖、含有2-30個環氧乙烷單元的甘油和含有2-15個甘油單元的聚甘油，3/脂肪酸和糖的酯以及脂肪醇和糖的醚，4/在溫度等于45°C時為固體的表面活性劑，其選自脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨聚糖酯以及氧乙烯化的脂肪酸山梨聚糖酯、乙氧基化的脂肪醚以及乙氧基化的脂肪酸酯，5/環氧乙烷(A)和環氧丙烷(B)的嵌段共聚物，以及這些表面活性劑的混合物。I/可根據本發明使用的硅氧烷表面活性劑是含有至少一個氧乙烯化
其中R”R2 和 R3 彼此獨立地代表 C1-C6 烷基自由基或者-(CH2) x_ (OCH2CH2) y- (OCH2CH2CH2) z-0R4自由基，至少一個自由基RpR2或R3不是烷基自由基；R4是氫、烷基自由基或者酰基自
由基；A是O至200的整數；B是O至50的整數；限定條件是A和B不同時等于零；X是I至6的整數；y是I至30的整數；ζ是O至5的整數。根據本發明一個優選的實施方案，在式(X)的化合物中，烷基自由基是甲基自由基，X是2-6的整數，且y是4-30的整數。
作為式(II)的硅氧烷表面活性劑的例子，可以提及式(III)的化合物 (CH3)3SiO-[(CH3)2SiO]A-(CH3SiO)B-Si(CH3)3
I(HI)
(CH2)2-(OCH2CH2)y-OH
其中A是20至105的整數，B是2至10的整數，并且y是10至20的整數。 作為式(II)的硅氧烷表面活性劑的例子，還可以提及式(IV)的化合物H-(OCH2CH2)y-(CH2)3-[(CH3)2SiO] A' -(CH2)3-(OCH2CH2)y-OH (IV)其中A’和y是10至20的整數。作為硅氧烷表面活性劑，可具體使用由Dow Corning公司出售的名為DC 5329,DC 7439-146、DC 2-5695 和 Q4-3667 的產品。化合物 DC 5329、DC 7439-146 和 DC 2-5695 是式(XI)的化合物，其中分別地，A是22，B是2并且y是12汸是103，B是10并且y是12 ; A是27, B是3并且y是12。化合物Q4-3667是式(IV)的化合物，其中A是15并且y是13。2/在溫度低于或等于45°C時為液體的兩親型脂質具體地可選自-UNICHEMA公司出售的名為Prisorine 3644的、分子量為400的異硬脂酸聚乙二酉享酉旨(CTFA 名:PEG_8 Isostearate)；-SOLVAY公司出售的異硬脂酸二甘油酯；-SOLVAY公司出售的名為單月桂酸二甘油酯(Diglycerin-monolaurate)的、含有兩個甘油單元的月桂酸聚甘油酯(月桂酸聚甘油-2酯)；
的鏈-OCH2CH2-和/或氧丙烯化的鏈-OCH2CH2CH2-的硅氧烷化合物；可提及文獻 US-A-5, 364，633 和 US-A-5, 411，744 中描述的那些。優選地，根據本發明使用的硅氧烷表面表面活性劑是式(II)的化合物
H3 I Hs
CISIC
H3 Q H3
clsilc
12
-ICI公司出售的名為SPAN 80的油酸山梨聚糖酯；-NIKKO公司出售的名為NIKKOL SI IOR的異硬脂酸山梨聚糖酯；-ULICE公司出售的α-丁基葡糖苷椰油酸酯或者α-丁基葡糖苷癸酸酯。3/根據本發明，可用作毫微乳劑中的非離子兩親型脂質的脂肪酸和糖的酯，優選在溫度低于或等于45°C時為固體，并且具體地選自C8-C22脂肪酸與蔗糖、麥芽糖、葡萄糖或者果糖形成的酯或酯的混合物，以及C14-C22脂肪酸與甲基葡萄糖形成的酯或酯的混合物。形成用于本發明的毫微乳劑的酯的脂肪單元的C8-C22*C14_C22脂肪酸含有飽和或不飽和的線性烷基鏈，其分別具有8-22或14-22個碳原子。酯的脂肪單元具體地可選自硬脂酸、山崳酸、花生四烯酸、棕櫚酸、肉豆蘧酸、月桂酸、癸酸及其混合物。優選使用硬脂酸。作為脂肪酸與蔗糖、麥芽糖、葡萄糖或者果糖的酯或酯的混合物的例子，可以提及單硬脂酸蔗糖酯、二硬脂酸蔗糖酯、三硬脂酸蔗糖酯及其混合物，例如Croda公司出售的名為Crodesta F50、F70、FllO和F160的產品，其HLB (親水-親脂平衡)分別是5、7、11和 16 ;且作為脂肪酸和甲基葡萄糖的酯或酯的混合物的例子，可以提及Goldschmidt公司出售的名為Tego-care 450的二硬脂酸聚甘油_3甲基葡萄糖酯。還可以提及葡萄糖或麥芽糖的單酯，例如ο-十六烷酰-6-D-葡糖苷甲酯和ο-十六烷酰-6-D-麥芽糖苷甲酯。根據本發明，可用作毫微乳劑中的非離子兩親型脂質的脂肪醇和糖的醚，在溫度低于或等于45°C時為固體，且具體地選自C8-C22脂肪酸與蔗糖、麥芽糖、葡萄糖或者果糖形成的醚或醚的混合物，以及C14-C22脂肪酸與甲基葡萄糖形成的醚或醚的混合物。具體地是烷基聚葡糖苷。形成用于本發明的毫微乳劑的醚的脂肪單元的C8-C22或者(14_(22脂肪醇含有飽和或不飽和的線性烷基鏈，其分別具有8-22或14-22個碳原子。醚的脂肪單元具體地可選自癸基、鯨蠟基、二十二烷基、二十烷基、硬脂基、棕櫚基、肉豆蘧基、月桂基、辛基和十六烷酰單元，以及它們的混合物，例如鯨臘硬脂基(cetearyl)。作為脂肪醇和糖形成的醚的例子，可以提及如癸基葡糖苷和月桂基葡糖苷的烷基聚葡糖苷，其例如由Henkel公司分別以商品名Plantaren 2000和Plantaren 1200出售的產品，任選作為與十六醇十八醇混合物的混合物的鯨蠟硬脂基葡糖苷，其例如由Seppic公司出售的Montanov 68、Goldschmidt公司出售的Tego-care CG90以及Henkel公司出售的 Emulgade KE3302,以及二十燒基葡糖苷,例如Seppic公司出售的名為Montanov 202的花生醇和山崳醇與二十烷基葡糖苷的混合物的形式。作為這種類型的非離子兩親型脂質，更具體地使用單硬脂酸蔗糖酯、二硬脂酸蔗糖酯、三硬脂酸蔗糖酯及其混合物、二硬脂酸聚甘油-3甲基葡萄糖酯和烷基聚葡糖苷。4/根據本發明，可用作毫微乳劑中的非離子兩親型脂質的甘油脂肪酸酯，在溫度低于或等于45°C時為固體，具體地可選自由至少一種含有16-22個碳原子的飽和線性烷基鏈的酸和ι- ο個甘油單元形成的酯。一種或多種這樣的甘油脂肪酸酯可用于本發明的毫微乳劑。這些酯具體地選自硬脂酸酯、山崳酸酯、花生酸酯、棕櫚酸酯及其混合物。優選使用硬脂酸酯和棕櫚酸酯。作為可用于本發明的毫微乳劑的表面活性劑的例子，可以提及單硬脂酸十甘油 (10個甘油單元)酯、二硬脂酸十甘油(10個甘油單元)酯、三硬脂酸十甘油(10個甘油單元)酯和五硬脂酸十甘油(10個甘油單元)酯(CTFAg Polyglyceryl-10 stearate、 Polyglycery1-10 distearate、 Polyglyceryl-IOtristearatPolyglyceryl-10 pentastearate)，例如 Nikko 公司分別以名稱 Nikkol Decaglyn 1-S、2_S、3_S 和 5-S 出售的產品，以及單硬脂酸二甘油酯(CTFAg :Polyglyceryl_2 stearate),例如Nikkol公司以名Nikkol DGMS出售的產品。根據本發明，可用作毫微乳劑中的非離子兩親型脂質的山梨聚糖脂肪酸酯，在溫度低于或等于45°C時為固體，具體地可選自由C16-C22脂肪酸和山梨聚糖形成的酯以及由 C16-C22脂肪酸和山梨聚糖形成的氧乙烯化的酯。它們是由至少一種含有至少一條分別具有 16-22個碳原子的飽和線性烷基鏈的脂肪酸和山梨糖醇或乙氧基化的山梨糖醇形成的。氧乙烯化的酯一般含有1-100個環氧乙烷單元，且優選2-40個環氧乙烷(EO)單元。這些酯可具體地選自硬脂酸酯、山崳酸酯、花生酸酯、棕櫚酸酯及其混合物。優選使用硬脂酸酯和棕櫚酸酯。作為可用于本發明的毫微乳劑的山梨聚糖脂肪酸酯以及氧乙烯化的山梨聚糖脂肪酸酯的例子，可以提及ICI公司以名Span 60出售的單硬脂酸山梨聚糖酯(CTFA 名Sorbitan stearate), ICI公司以名Span 40出售的單棕櫚酸山梨聚糖酯(CTFAg Sorbitan palmitate),以及ICI公司以名Tween65出售的三硬脂酸山梨聚糖酯20E0(CTFA 名Polysorbate 65)。根據本發明，可用作毫微乳劑中的非離子兩親型脂質的乙氧基化的脂肪族醚，在溫度低于或等于45°C時為固體，優選為由1-100個環氧乙烷單元和至少一個具有16-22個碳原子的脂肪醇鏈形成的醚。醚的脂肪族鏈具體選自二十二烷基、二十烷基、硬脂基和鯨蠟基單元及其混合物，如鯨蠟硬脂基。作為乙氧基化的脂肪族醚的例子，可以提及含有5、10、 20 和 30 個環氧乙燒單兀的山箭醇醚(CTFA 名Beheneth_5、Beheneth-10、Beheneth-20、 Beheneth-30)，例如Nikko公司以名Nikkol BB5、BB10、BB20和BB30出售的產品，以及含有兩個環氧乙烷單元的硬脂醇醚(CTFA名Steareth-2)，例如ICI公司以名Brij 72出售的
女口
廣叩ο根據本發明，可用作毫微乳劑中的非離子兩親型脂質的乙氧基化的脂肪酸酯，在溫度低于或等于45°C時為固體，是由1-100個環氧乙烷單元和至少一個具有16-22個碳原子的脂肪酸鏈形成的酯。酯的脂肪族鏈具體選自硬脂基、二十二烷基、二十烷基和棕櫚基單元及其混合物。作為乙氧基化的脂肪酸酯的例子，可以提及含有40個環氧乙烷單元的硬脂酸酯，例如ICI公司以名Myrj 52 (CTFA名PEG_40 stearate)出售的產品以及含有8個環氧乙燒單兀的山箭酸酯(CTFAg :PEG_8 behenate),例如Gattefosse公司以名Compritol HD5 ATO出售的產品。5/根據本發明，可用作毫微乳劑的非離子兩親型脂質的環氧乙烷和環氧丙烷的嵌段共聚物，具體地可選自式(V)的嵌段共聚物HO (C2H4O) X (C3H6O) y (C2H4O) zH (V)其中x、y和ζ是整數，從而x+z的范圍為2-100，y的范圍為14-60，以及它們的混合物，且更具體選自HLB為2-16的式(V)的嵌段共聚物。這些嵌段共聚物可具體選自泊洛沙姆，且具體選自泊洛沙姆231，如ICI公司以名 Pluronic L81出售的式(V)(其中x = ζ = 6，y = 39) (HLB 2)的產品；泊洛沙姆282，如ICI公司以名Pluronic L92出售的式(V)(其中x = ζ = 10，y = 47) (HLB 6)的產品；以及泊洛沙姆124,如ICI公司以名Pluronic L44出售的式(V)(其中x = ζ = 11, y = 21) (HLB 16)的產品。作為非離子兩親型脂質，還可提及文獻EP-A-705593中所述的非離子表面活性劑的混合物，此處將所述文獻引入作為參考。在非離子兩親型脂質中，可具體使用-PEG 400異硬脂酸酯或PEG-8異硬脂酸酯(含8mol環氧乙烷)，-異硬脂酸二甘油酯，-含有2單元甘油的單月桂酸聚甘油酯和含10單元甘油的硬脂酸聚甘油酯，-油酸山梨聚糖酯，-異硬脂酸山梨聚糖酯及其混合物。根據本發明，非離子兩親型脂質在毫微乳劑中的含量相對于組合物的總重量為 O. 2重量％至12重量％ ,且優選為O. 2重量％至8重量％ ,且更優選為O. 2重量％至6重量％。陽離子兩親型脂質選自下文所列的那些。它們在本發明的毫微乳劑中存在的濃度，優選為相對于毫微乳劑的總重量的O. 01 至6重量％,且更優選為O. 2至4重量％。油根據本發明的毫微乳劑的油相中含有至少一種油。可用于本發明的毫微乳劑中的油優選自-動物或植物來源的油，其由脂肪酸和多元醇的酯構成，具體是液態的甘油三酯， 例如葵花油、玉米油、大豆油、鱷梨油、霍霍巴油、骨髓油、葡萄子油、芝麻油、榛子油、魚油和 glyceryl tricaprocaprylate,或式為R9COORltl的植物或動物油，其中R9代表含有7至29 個碳原子的高級脂肪酸殘基，并且Rltl代表含有3至30個碳原子的線性的或分支的基于烴的鏈，具體是烷基或鏈烯基，例如puree 11 in油或液體霍霍巴木蠟；-天然的或合成的精油，例如桉葉油、雜熏衣草油、熏衣草油、韋惕蔚油、山蒼子油、 朽1檬油、檀香油(sandlewood oil)、迷迭香油、春黃菊油、香薄荷油、肉豆蘧油、肉桂油、海索草油(hyssop oil)、貫蒿子油、橙油、香葉醇油、杜松油和香檸檬油；-合成油,例如parleam油、聚烯烴和液體羧酸酯；-礦物油，例如十六烷、異十六烷和石蠟油；-鹵代油，具體是碳氟化合物，例如氟代胺(fluOToamine)，如全氟三丁胺，氟代烴，例如全氟代十氫化萘(perfluorodecahydro-naphthalene)、氟代酯和氟代醚；-揮發性或非揮發性的硅油。可用作合成油的聚烯烴具體是聚α -烯烴，且更具體是那些氫化的或未氫化的聚丁烯類型，且優選氫化的或未氫化的聚異丁烯類型。可用作合成油的液體羧酸酯可以是單羧酸酯、二羧酸酯、三羧酸酯或四羧酸酯。酯的總碳數目一般大于或等于10，且優選小于100，且更優選小于80。它們具體是飽和或不飽和的、線性的或分支的C1-C26脂族酸與飽和或不飽和的、線性的或分支的C1-C26脂族醇形成的單酯，酯的總碳數目一般大于或等于10。也可以使用C4-C22 二羧酸或三羧酸與C1-C22醇形成的酯，以及一羧酸、二羧酸或三羧酸與C2-C26 二羥基、三羥基、四羥基或五羥基醇形成的酯。在上面所述的酯中，優選使用棕櫚酸烷基酯，例如棕櫚酸乙酯、棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸2-乙基己酯、棕櫚酸2-辛基癸酯；肉豆蘧酸烷基酯，例如肉豆蘧酸異丙酯、肉豆蘧酸丁酯、肉豆蘧酸鯨蠟酯、肉豆蘧酸2-辛基十二醇酯；硬脂酸烷基酯，例如硬脂酸己酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸異丁酯；蘋果酸烷基酯，例如蘋果酸二辛酯；月桂酸烷基酯，例如月桂酸己酯和月桂酸2-己基癸酯；異壬酸異壬酯；辛酸鯨蠟酯。有利地，根據本發明的毫微乳劑含有至少一種分子量大于或等于400的油，具體是400至10000，更好地是400至5000，或甚至為400至2500。分子量大于或等于400的油可選自動物或植物來源的油、礦物油、合成油和硅油，以及它們的混合物。作為這種類型的油，舉例來說，可以提及棕櫚酸異鯨蠟酯、硬脂酸異鯨蠟酯、鱷梨油和霍霍巴油。根據本發明的毫微乳劑包含一定量的油相(除兩親型脂質之外的油和其它脂肪物質)，所述量優選相對于毫微乳劑的總重量為2-40重量％，且更具體是4-30重量％，且更優選是4-20重量％。油相和兩親型脂質(非離子和離子的兩親型脂質)優選在根據本發明的毫微乳劑中按照油相的量和兩親型脂質的量的重量比為3至10存在，且更為優選的范圍是3至6。 術語“油相的量”在本文中指的是這種油相的成分的總量，不包括兩親型脂質的量。根據本發明的毫微乳劑除了上述式(I)的尿素衍生物之外，如果必要的話，還可含有溶劑，具體用于提高組合物的透明度。這些溶劑優先選自-C1-C8低級醇，例如乙醇；- 二元醇，例如甘油、丙二醇、1，3-丁二醇、一縮二丙二醇或者含有4至16個，且優選8至12個環氧乙烷單元的聚乙二醇；-糖類，例如葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖或者蔗糖。這些溶劑可作為混合物使用。當它們存在于本發明的毫微乳劑中時，可使用的濃度優選相對于毫微乳劑的總重量為O. 01-30重量％，且更好地為相對于毫微乳劑的總重量的5-20重量％。醇和/或糖的量相對于毫微乳劑的總重量優選為5-20重量％，并且二元醇的量相對于毫微乳劑的總重量優選為5-15重量％。制備方法制備上面所限定的毫微乳劑的方法是，將含有尿素衍生物的水相和油相在溫度范圍10°C -80°c下通過強烈攪拌進行混合，在大于5X107Pa的壓力下進行高壓勻漿步驟，且任選地加入所用的聚合物。根據本發明優選的實施方案，隨后在大于5X IO7Pa的壓力下再進行另外一個高壓勻漿步驟。高壓勻漿優選在壓力為6X IO7Pa至ISXlO7Pa下進行。剪切優選為2X IOV1至5X ΙΟΥ1，且更好地是I X IO8s-1至3X IOiV1 (s-1表示秒-1)。該方法使得可能生產出與熱敏的活性化合物相容的毫微乳劑，它可以含有油和具體的香料，其中含有脂肪物質，而不會使其變性。毫微膠囊本發明的毫微膠囊是專利申請EP O 447 318、EP O 557 489、EP O 780115、EP I 025 901、EP I 029 587、EP I 034 839、EP I 414 390、FR 2 830776、EP I 342 471、FR 2
16=848 879和FR 04/50057所描述的那些。毫微膠囊是具有油質芯和聚合物殼的芯-殼顆粒。上述的各個申請涉及各族聚合物以及各種獲得它們的方法。膠囊的大小總是小于I μ m，且其可能具有小于SOnm的大小。這些顆粒可用層狀液晶相包被，所述液晶相最常見由卵磷脂或聚二甲基硅氧烷共聚醇組成。包被必須由在與水接觸時能夠自發形成層狀液晶相的兩親型脂質組成。向這種能夠形成層狀相的兩親型脂質加入能夠賦予顆粒(毫微膠囊)正(電勢的陽離子表面活性劑。 形成層狀相的兩親型脂質與陽離子表面活性劑的重量比為99/1-75/25。可用的陽離子表面活性劑如下文中所列。有機顆粒本發明的有機顆粒是固體毫微球體(nanosphere),其不具有內腔,可通過各種方法形成(在水中分散、毫微沉淀(nanoprecipitation)、微乳劑等)，并且由至少一種聚合物或者至少一種共聚物，或者它們的混合物組成。由于聚合物或共聚物是陽離子的，或者由于它(們)是非離子的且使用了如下文所述的陽離子表面活性劑，所以顆粒是陽離子的，具有上文限定的 電勢。陽離子表面活性劑的量相對于聚合物為0-25%。無機顆粒本發明的陽離子無機顆粒舉例來說，可以基于硅石、Ti02、Zn0、氧化鋁等。例如，可以提及如Nalco公司的Nanomer 2顆粒的水中膠體分散體中的氧化招顆粒。Clariant和 Grace也提供這種類型的顆粒。可用于制備本發明的陽離子型顆粒的陽離子表面活性劑可根據本發明使用的陽離子表面活性劑在下文列舉，該列舉是非限制性的。陽離子兩親型脂質優選選自季銨鹽和脂肪族胺及其鹽。季銨鹽舉例來說為-具有如下式(IV)的那些
權利要求
1.組合物，其包含至少一種選自SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、 40、41、42、43、44、45、46、47或48的序列的雙鏈RNA寡核苷酸，所述寡核苷酸與大小小于或等于I μ m、ζ電勢為10-80mV的陽離子型顆粒締合。
2.根據權利要求I的組合物，其特征在于該寡核苷酸通過在2’-位置添加-O-甲基基團而被修飾。
3.根據權利要求I或2的組合物，其特征在于該雙鏈RNA寡核苷酸存在的濃度小于或等于100 μ M。
4.根據權利要求1-3任一項的組合物，其特征在于該陽離子型顆粒選自表面活性劑膠束、嵌段聚合物膠束、非離子和陽離子表面活性劑脂質體、非離子表面活性劑微囊、油質體、 毫微乳劑顆粒、毫微膠囊、有機顆粒或無機顆粒。
5.根據權利要求1-4任一項的組合物，其特征在于該陽離子型顆粒的大小小于或等于 500nm。
6.根據權利要求1-5任一項的組合物，其特征在于該陽離子型顆粒的大小小于或等于 300nmo
7.根據權利要求1-6任一項的組合物，其特征在于該陽離子型顆粒是非離子兩親型表面活性劑和陽離子表面活性劑形成的膠束。
8.根據權利要求1-6任一項的組合物，其特征在于該嵌段聚合物膠束選自陽離子兩親型嵌段聚合物膠束、非離子兩親型嵌段聚合物和陽離子兩親型嵌段聚合物形成的膠束以及非離子兩親型嵌段聚合物和陽離子表面活性劑形成的膠束。
9.至少一種選自SEQ ID N0S. 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、 45、46、47或48的序列的雙鏈RNA寡核苷酸在抑制酪氨酸酶表達中的用途。
10.至少一種選自SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48的序列的雙鏈RNA寡核苷酸在抑制酪氨酸酶表達中的用途，其特征在于所述的寡核苷酸與大小小于或等于I μ m、ζ電勢為IO-SOmV的陽離子型顆粒締合。
11.根據權利要求9或10的用途，作為用于皮膚的漂白劑和/或作為抗褐變劑。
12.根據權利要求9-11任一項的用途，用于預防形成和/或消除色素形成斑，和/或老年斑，和/或用于增亮和/或漂白褐色皮膚和/或使褐色皮膚顏色均勻。
13.至少一種選自SEQ ID N0S. 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47或48的序列的雙鏈RNA寡核苷酸在制備用于皮膚脫色的組合物中的用途。
14.至少一種選自SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、 44、45、46、47或48的序列的雙鏈RNA寡核苷酸在制備用于皮膚脫色的組合物中的用途，其特征在于所述的寡核苷酸與大小小于或等于I μ m、ζ電勢為IO-SOmV的陽離子型顆粒締
15.根據權利要求14的用途，其特征在于該組合物用于治療特發性黑斑病、妊娠或者oestro-progestin避孕相關的著色過度、偶發性著色過度、由白斑病和/或白癜風引起的著色過度。
16.用于漂白和/或增亮膚色和/或使褐色皮膚顏色均勻的化妝方法，其包括局部施用至少一種選自 SEQ ID N0S. 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 或48的序列的雙鏈RNA寡核苷酸。
17.用于漂白和/或增亮膚色和/或使褐色皮膚顏色均勻的化妝方法，其包括局部施用至少一種選自 SEQ ID N0S. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47 或48的序列的雙鏈RNA寡核苷酸，其特征在于所述的寡核苷酸與大小小于或等于I μ m、ζ 電勢為10-80mV的陽離子型顆粒締合。
18.根據權利要求16或17的方法，其特征在于所述的寡核苷酸以小于或等于100μ M 的濃度配制在局部組合物中。
19.根據權利要求16-18任一項的方法，其特征在于局部施用前進行選自剝離、化學去皮、機械皮膚磨擦術、施用一種或多種具有脫脂效果的溶劑以及用去污劑發泡產品清潔皮膚的皮膚預處理。
20.根據權利要求16-19任一項的方法，其特征在于局部施用后進行封閉的后處理。
全文摘要
本發明涉及抑制酪氨酸酶表達的雙鏈RNA寡核苷酸。本發明涉及新的用于降低酪氨酸酶表達的雙鏈RNA寡核苷酸，其在化妝和/或藥學目的上的用途，以及它與大小小于或等于1μm、ζ電勢為10-80mV的陽離子型顆粒的締合。
文檔編號C12N15/113GK102579274SQ201210065389
公開日2012年7月18日 申請日期2006年9月20日 優先權日2005年9月21日
發明者C·科林-迪詹戈恩, J·-T·斯蒙納特 申請人:萊雅公司