專利名稱：一種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及果樹授粉受精技術領域，具體的說，涉及一種提高庫買提花粉萌發和生長的培養基。
背景技術：
杏(Armeniaca vulgaris Lam)為落葉小喬木,薔薇科,杏果含有豐富的維生素A、維生素C、糖類、檸檬酸、蘋果酸等營養成分，性味甘酸、微溫，故具有生津止渴，清熱解毒之特點，有一定的保健和防癌作用，無論鮮食還是加工后食用都備受人們的青睞。中國杏廣泛分布于河北、北京、河南、山東、山西、陜西、甘肅、新疆等地，有2000多個品種。庫買提為新疆優良杏品種之一，可制干或鮮食，在新疆輪臺等地作為主栽或授粉品種，有較大面積的種植。果實呈橢圓形，平均單果重22. 6g，果皮緑白色；果面光滑無毛。果肉白緑色；肉質硬脆，纖維細、少，汁多，味甜；可溶性固形物含量12.6%，離核；品質中上；常溫下果實可貯放5d左右。大多數杏品種為自交不親和，自交結實率低，生產上必須合理配置授粉品種，才能獲得相應的產量和品質。也常因花期低溫、沙塵和陰雨等不良氣候條件影響正常授粉而減產和降低品質，人工授粉是提高杏產量的重要手段。人工授粉用人工方法把植物花粉傳送到柱頭上以提高坐果率的技術措施。有目的地選擇親本進植物雜交育種的必要手段。在果樹生產上，對自花不結實、雌雄同株而異花以及雌雄異株的果樹；在缺乏授粉樹或花期氣候惡劣、影響正常自然授粉的情況下，也常需進行人エ授粉。在生產上為提高人工授粉的效率常用液體噴粉，并常在溶液中添加促進花粉萌發和花粉管生長的物質，如硼酸、蔗糖等，以提高授粉效果和節省花粉用量。適宜溫度和pH值是保證培養基中花粉萌發和花粉管生長重要條件，過高或過低的溫度和PH值都會抑制花粉萌發和花粉管生長。張紹鈴等的研究結果表明果梅花粉萌發和花粉管生長所需的最適PH值為6. 5，丁長奎等對枇杷花粉研究表明其適宜pH值為4. 0
6.O。培養溫度對花粉萌發和花粉管生長也有重要影響。促進花粉萌發和生長的生長調節劑主要有吲哚こ酸(IAA)、萘こ酸(NAA)、赤霉素(GA3)、2，4-ニ氯苯氧こ酸(2，4-D)、6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)和比久(B9)等。除生長調節類物質促花粉萌發和生長外，某化學物質對花粉萌發和生長也有作用。花期應用礦質營養元素促進花粉萌發和花粉管生長，促進植物授粉受精和提高座果率，已在油茶、紅葉李、枇杷、葡萄等植物上取的明顯的效果，但目前礦質營養元素促進杏花粉萌發和花粉管生長的研究報道很少。現有文獻記載
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發明內容
本發明的目的在于，提供一種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基，該培養基是由瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑為赤霉素、萘こ酸、吲哚こ酸或2，4_ ニ氯苯氧こ酸制成，或由瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入化學元素為硝酸鉀、氯化鎂、尿素、硝酸鈣、鑰酸銨、鑰酸鈉、硫酸亞鐵、硫酸鋅或硫酸銅制成。該培養基解決了其花粉萌發率低，花粉管較短和不易授粉受精的問題，為庫買提找到ー種提高萌發率的有效途徑。通過本發明所述的培養基提高了庫買提花粉萌發和生長，操作簡便、成本低、周期短、萌發率高。本發明所述的ー種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基，該培養基是由質量比瓊脂1%、蔗糖15-20%和硼酸0. 00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑為赤霉素60-80mg/L、萘こ酸0. 5-lmg/L、卩引哚こ酸0-lmg/L或2,4- ニ氯苯氧こ酸10_20mg/L制成；或由質量比瓊脂I %、鹿糖15-20%和硼酸0. 00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入化學元素為硝酸鉀10-20mg/L、氯化鎂40-60mg/L、尿素80_100mg/L、硝酸鈣20_40mg/L、鑰酸銨l-10mg/L、鑰酸鈉l-10mg/L、硫酸鐵0. 5-lmg/L、硫酸鋅0. 5-lmg/L或硫酸銅0. 5-lmg/L 制成。所述培養基，由質量比瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑的各培養基分別為瓊脂1%、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和赤霉素60-80mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和萘こ酸0. 5-lmg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%,硼酸0. 00-0. 01 %和吲哚こ酸0-lmg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01 %和2，4- ニ氯苯氧こ酸10-20mg/L。所述培養基由質量比瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入化學元素的各培養基分別為瓊脂1%、鹿糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和硝酸鉀10-20mg/L ;或瓊脂1%、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0.01%和氯化鎂40-601^/1;或瓊脂1%、蔗糖15-20%,硼酸0. 00-0. 01%和尿素80-100mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20 %、硼酸0. 00-0. 01%和硝酸鈣20-40mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和鑰酸銨l-10mg/L ;或瓊脂
I%、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和鑰酸鈉l-10mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和硫酸亞鐵0. 5-lmg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和硫酸鋅0. 5-lmg/L ;或瓊脂 I %、蔗糖 15-20%、硼酸 0. 00-0. 01%和硫酸銅 0. 5-lmg/L。 所述培養基的制備方法，將質量比為瓊脂1%、蔗糖15-20%和硼酸0. 00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑為赤霉素60-80mg/L、萘こ酸0. 5-lmg/L、吲哚こ酸0-lmg/L或2，4-ニ氯苯氧こ酸10-20mg/L，溫度為25_30°C，pH值為6. 0-7. 0進行混合培養即可。所述培養基的制備方法，將質量比為瓊脂1%、蔗糖15-20%和硼酸0.00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入化學元素為硝酸鉀10-20mg/L、氯化鎂40-60mg/L、尿素80-100mg/L、硝酸鈣 20-40mg/L、鑰酸銨 1-lOmg/L、鑰酸鈉 1-lOmg/L、硫酸鐵 0. 5-lmg/L、硫酸鋅0. 5-lmg/L或硫酸銅0. 5-lmg/L，溫度為25_30°C，pH值為6. 0-7. 0進行混合培養即可。本發明所述的ー種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基，是在現有技術基礎上，采用離體培養法，將采集好的花粉，用棉棒均勻的彈在鋪有培養基的載玻片上，培養基以5-25%的蔗糖、0-0. I %的硼酸和I %瓊脂為基本培養基組分，設置培養溫度為10-30°C，培養基PH值為4. 0-8. 0，再分別加入生長調節劑或化學元素培養；通過對萌發率(花粉萌發數/花粉總數)和花粉管長度指標進行測定分析，篩選最優生長組合，解決了庫買提杏花粉萌發率低，花粉管較短的問題，為庫買提杏找到有效提高花粉萌發率的途徑。本發明所述的ー種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基，通過實施可達到以下有益效果I、本發明通過選用培養基組分和培養條件進行花粉培養，促進花粉萌發和花粉管生長。2、操作方法簡單易行，不需要特殊的技術手段。3、成本低，培養基成分價格便宜，尤其是研究中使用的生長調節劑具有價格便宜，購買方便、使用簡便等優點，在進行大量的液體授粉時會具有較優的綜合效果。4、本發明解決了庫買提杏在培養基上萌發率低和生長緩慢的技術問題，可為庫買提人工授粉技術研發奠定基礎。本發明所述的ー種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基，該培養基的特點為培養基組分對花粉萌發和生長具有影響隨蔗糖濃度増大，花粉萌發率和花粉生長呈先升后降趨勢；隨硼酸濃度増大，花粉萌發率和生長呈先升后降趨勢；隨生化學試劑GA3、NAA、IAA、2，4-D、KNO3> MgCl2, Ca(N03)2、(NH4) 6Mo7024、Na2M0O4, FeSO4, ZnSO4, CuSO4濃度増大，花粉萌發率和生長呈先升后降趨勢。
培養溫度花粉萌發和生長有顯著性影響隨溫度的升高，花粉萌發和生長呈先升后降趨勢，溫度為25_30°C范圍內適宜花粉萌發和生長。培養基pH值花粉萌發和生長有顯著性影響隨pH的升高，花粉萌發和生長呈先升后降趨勢，pH為6. 0-7. 0范圍內適宜花粉萌發和生長。
具體實施例方式本發明所列舉的實施例，但并不限于所述的實施例。實施例 選用的所有試劑和儀器都為本領域熟知的。花粉的選擇與處理選取鈴鐺期花蕾，剝下花藥盛于硫酸紙盒中，放置常溫下陰干，待花藥自行開裂散出花粉，將其收集裝入I. 5ml的離心管中封閉好放在冰箱冷凍室保存；培養方法和時間培養基配置使用I %瓊脂，分別放入濃度為5%、10%、15%、20%或25%的蔗糖和濃度分別為0、0.01%、0. 03%,0. 05%或0. 1%的硼酸處理，將不同濃度的培養基倒置在載玻片上，用棉棒將花粉均勻的彈在載玻片的培養基上，放在底部鋪有濕潤紗布的培養皿中，每梯度重復3次，置于溫度25°C恒溫箱培養，24h后觀察萌發率和花粉管的長度；萌發率=已萌發的花粉粒數/花粉粒總數X 100% ;溫度在最適培養基組分下，設置培養基溫度分別為10、15、20、25和30°C進行培養，4h后取出培養基測定花粉萌發率及花粉管長度，確定最適的培養溫度；pH值在最適培養基組分下,使用lmol/L鹽酸和lmol/L氫氧化鈉溶液調節培養基pH值，pH值分別為4. 0,4. 5,5. 0,5. 5,6. 0,6. 5,7. 0,7. 5和8. 0，培養4h后取出測定花粉萌發率及花粉管長度，確定培養基的最適PH值；配制質量比為1%瓊脂、15%蔗糖和0.01%硼酸為基本培養基組分，再分別加入赤霉素(GA3)、吲哚こ酸(IAA)、萘こ酸(NAA)、2，4-ニ氯苯氧こ酸(2，4_D)或6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)混合，見表I :表I不同生長調節劑濃度梯度
權利要求
1.一種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基，其特征在干，該培養基是由質量比瓊脂I %、蔗糖15-20%和硼酸0. 00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑為赤霉素60_80mg/L、萘こ酸0. 5_lmg/L、n引哚こ酸0-lmg/L或2,4- ニ氯苯氧こ酸10_20mg/L制成；或由質量比瓊脂I %、蔗糖15-20%和硼酸0. 00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入化學元素為硝酸鉀10-20mg/L、氯化鎂40-60mg/L、尿素80_100mg/L、硝酸鈣20_40mg/L、鑰酸銨l-10mg/L、鑰酸鈉l-10mg/L、硫酸鐵0. 5-lmg/L、硫酸鋅0. 5-lmg/L或硫酸銅0. 5-lmg/L制成。
2.根據權利要求I所述的培養基，其特征在于由質量比瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑的各培養基分別為瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和赤霉素60-80mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和萘こ酸0. 5-lmg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01 %和吲哚こ酸0-lmg/L ;或瓊脂I %、蔗糖 15-20%、硼酸 0. 00-0. 01%和 2，4-ニ氯苯氧こ酸 10_20mg/L。
3.根據權利要求I所述的培養基，其特征在于由質量比瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入化學元素的各培養基分別為瓊脂1%、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和硝酸鉀10-20mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20 %、硼酸0. 00-0. 01%和氯化m 40-60mg/L ;或瓊脂 1%、蔗糖 15-20%、硼酸 0. 00-0. 01 %和尿素 80_100mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和硝酸鈣20-40mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0.01%和鑰酸銨l-10mg/L ;或瓊脂1%、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和鑰酸鈉l-10mg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和硫酸亞鐵0. 5-lmg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20 %、硼酸0. 00-0. 01%和硫酸鋅0. 5-lmg/L ;或瓊脂I %、蔗糖15-20%、硼酸0. 00-0. 01%和硫酸銅 0. 5-lmg/L。
4.根據權利要求2所述的培養基的制備方法，其特征在于將質量比為瓊脂1%、蔗糖15-20%和硼酸0. 00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑為赤霉素60_80mg/L、萘こ酸0. 5-lmg/L、卩引哚こ酸0-lmg/L或2,4-ニ氯苯氧こ酸10_20mg/L,溫度為25-30°C, pH值為6. 0-7. 0進行混合培養即可。
5.根據權利要求3所述的培養基的制備方法，其特征在于將質量比為瓊脂1%、蔗糖15-20%和硼酸0. 00-0. 01%為基本培養基組分，再分別加入化學元素為硝酸鉀10-20mg/し氯化鎂40-60mg/L、尿素80_100mg/L、硝酸鈣20_40mg/L、鑰酸銨l-10mg/L、鑰酸鈉l-10mg/L、硫酸鐵 0. 5-lmg/L、硫酸鋅 0. 5-lmg/L 或硫酸銅 0. 5-lmg/L，溫度為 25_30°C，pH值為6. 0-7. 0進行混合培養即可。
全文摘要
本發明涉及一種提高庫買提杏花粉萌發和生長的培養基，該培養基是由瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入生長調節劑為赤霉素、萘乙酸、吲哚乙酸或2，4-二氯苯氧乙酸制成，或由質量比瓊脂、蔗糖和硼酸為基本培養基組分，再分別加入化學元素為硝酸鉀、硫酸鎂、尿素、硫酸鈣、鉬酸銨、鉬酸鈉、硫酸鐵、硫酸鋅或硫酸銅制成。該培養基解決了其花粉萌發率低，花粉管生長較慢的技術問題，為庫買提找到一種提高萌發率的有效途徑。通過本發明所述的培養基提高了輪臺白杏花粉萌發和生長，操作簡便、成本低、周期短、萌發率高，在核果類果樹生物學中具有廣泛的應用前景。
文檔編號C12N5/04GK102618485SQ201210094358
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月1日 優先權日2012年4月1日
發明者孫慧瑛, 安曉芹, 廖康 申請人:新疆農業大學