專利名稱：一株產丙酸詹氏丙酸桿菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種詹氏丙酸桿菌，特別是ー種產丙酸的詹氏丙酸桿菌。
背景技術：
丙酸及其衍生物在エ業上的應用領域十分廣泛，主要應用于食品防腐、飼料儲藏、醫藥中間體合成、農業除莠劑合成、有機合成中間體等方面。2006年世界丙酸總生產能力在35萬噸/年左右，2008年達到50萬噸/年。美國是世界上最大的丙酸生產及消費國。目前我國丙酸實際年產量只有200噸左右，遠遠不能滿足實際的市場需求，毎年仍需大量進ロ來彌補國內的空缺。用于丙酸發酵的菌種主要是丙酸桿菌屬(Propionibacteria),該屬有多個種和亞 種，均為厭氧菌，丙酸桿菌是ー類G+、不產芽抱、不運動、接觸酶陽性的厭氧菌。菌落呈現白色、黃色或者褐紅色。一般情況下，最適PH為6. 5^7. 5，最適生長的溫度為28°C 37°C。丙酸的生產方法有化學合成法和微生物發酵法，化學合成法是以石油等化工產品為原料，經過加溫、加壓利用催化劑合成丙酸的方法，該方法是エ業級規模上丙酸的主要生產方法。微生物發酵法是丙酸菌在常溫、常壓下利用一般營養源通過自身代謝產生丙酸。由于微生物發酵生產丙酸能降低對石油等不可再生能源的依賴性，減輕對環境造成的壓力，因此，在當前全世界面臨環境污染、能源短缺的嚴峻情況下，微生物發酵法生產丙酸為丙酸合成提供了新的思路，同時得到了越來越多研究者的關注。但是微生物法生產丙酸仍然存在成本高，丙酸產量低等缺點。因此，篩選丙酸的高產菌株是非常有必要的。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種丙酸高產菌株詹氏丙酸桿菌(Propionibacterium jensenii) JN925,能夠高效的生產和積累丙酸。所述菌株于2012年5月3日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為=CCTCCNo M 2012153，保藏地址為中國武漢武漢大學。所述詹氏丙酸桿菌的篩選方法為其技術方案是從奶酪廠下水道淤泥中篩選出厭氧菌，根據其能耐受丙酸的性能，通過在培養基中添加丙酸來富集產丙酸菌。其具體步驟依次是取樣，添加丙酸液體富集培養，初篩，復篩，最后得到I株在厭氧條件下，能夠實現丙酸高產量生產的菌株。(I)菌株來源奶酪廠下水道淤泥(2)培養基富集培養基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸 I. 5。初篩培養基(g/L):瓊脂20 ;酵母粉10 ;蛋白胨5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸
2.50
復篩培養基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ;丙酸5。種子培養基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5。發酵培養基(g/L):酵母粉10 ;蛋白胨 5 ；K2HP04 2. 5 ；KH2P04 I. 5 ；CaC03 30 ;甘油 30 ；CoC12 0. 01。(3)富集培養的具體方法是將奶酪下水道淤泥稀釋接種到富集培養基中，每隔ー段時間轉接一次。(4)初篩的具體方法是將富集好的菌液進行稀釋，涂布初篩培養基，30° C厭氧培養4-5天。(5)復篩的具體方法是將初篩得到的菌株接入復篩培養基，30° C厭氧培養4-5 天。選擇菌濃最高的3-4株菌接入發酵培養基，30° C厭氧培養150小時，測定丙酸濃度。I.菌體干重的測定用722型可見光分光光度計，于600nm處比色測OD值。2.丙酸產量的測定用Agilent高效液相儀測定發酵上清液中丙酸濃度。
具體實施例方式實施例I :產丙酸的詹氏丙酸桿菌篩選方法取采取的一定量的淤泥，放入裝有IOOmL無菌水及玻璃珠的250mL三角瓶中稀釋不同濃度梯度，將不同濃度梯度稀釋好的樣品分別接入富集培養基中30° C靜置厭氧培養4-5天，分別重新轉接新鮮富集培養基30° C靜置厭氧培養4-5天。將富集好的培養液進行梯度稀釋，分別涂布初篩培養基30° C厭氧培養4-5天。將菌落分別接入復篩培養基中，30° C靜置厭氧培養4-5天。分別測定其菌體濃度，選擇菌濃最高的3-4株菌接入發酵培養基，進行產量檢測。將產量最高的一株菌進行菌種鑒定并做甘油管保藏。實施例2 :詹氏丙酸桿菌丙酸產量的檢測以1%接種量接種于種子培養基，待生長至對數生長期吋，以10%接種量，接種于發酵培養基，30° C厭氧培養150小時，取發酵液8000rpm，4° C離心2min。取上清液用
3.68mmol/L 硫酸定容至 10mT,n檢測條件Agilent高效液相儀，Agilent ZORBAX SB-Aq液相柱，柱溫35° C，檢測波長210nm，進樣量10 u L，流動相為19. 7g磷酸氫ニ鈉與IOmLこ腈溶于IOOOmL超純水并且用磷酸將pH調為2. O。經過高效液相色譜檢測，丙酸產量最高ー株菌命名為Propionibacteriumjensenii JN925，其厭氧瓶發酵150h丙酸產量為20. 96g/L。
權利要求
1.一株產丙酸詹氏丙酸桿菌，2012年5月3日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC No M 2012153。
2.根據權利要求I所述的詹氏丙酸桿菌，其特征在于所述詹氏丙酸桿菌能夠高效生產丙酸。
3.權利要求I所述的詹氏丙酸桿菌應用發酵生產丙酸。
全文摘要
本發明公開了一株產丙酸詹氏丙酸桿菌及其應用，于2012年5月3日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC No.M 2012153。所述詹氏丙酸桿菌是從奶酪廠下水道的淤泥中篩選所得，應用所述詹氏丙酸桿菌發酵生產丙酸的產量可達20.96g/L。
文檔編號C12N1/20GK102766589SQ20121016850
公開日2012年11月7日 申請日期2012年5月25日 優先權日2012年5月25日
發明者劉龍, 堵國成, 諸葛鑫, 陳堅 申請人:江南大學