專利名稱：一種抗流感牛奶及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種預防流感的牛奶及其制備方法，特別涉及一種從紅曲菌中提取活性成分制備紅曲抗流感牛奶的方法。
背景技術：
紅曲古代稱丹曲，是以紅曲霉為主的一種獨特的酒曲，色澤紅艷、口味香醇，它具有耐酸、耐高溫的特性，在工藝制造上也有獨到之處。所以，《本草綱目》里評價它說“此乃人窺造化之獨到巧者也”和“蓋奇藥也”。近年來，由于合成色素的安全性受到挑戰，天然色素日益受到人們的重視，特別是具有保健功能的紅曲色素更受消費者的青睞。紅曲除作為安全食用著色劑外還含有降低血 脂等有效的生理活性物質及防腐、保鮮物質，具有“天然、營養、多功能”的多重優點，是一種適應國際發展大趨勢的優良食品添加劑，其巨大的應用潛力備受世人關注。紅曲具有獨特的醫療功效。元欽膳太醫忽思慧在《飲膳正要》中說，紅曲有“健脾、益氣、溫中”之功效。《本草綱目》也記載，紅曲主治“消食治血，健脾養胃”。隨著現代人們健康意識的加強和科技水平的進步，對于紅曲的藥理活性物質研究甚豐，主要物質類型及其功能有如下幾種I、降膽固醇活性物質在發達國家，冠心病是死亡的主要原因之，美國一年有80萬人死于該病，約占年死亡率的40%。而成年人膽固醇70%來自于體內生物合成，30%是由食物攝入，在膽固醇合成途徑中，已經查明經甲基戊二酰輔酶以A (HMG-CoA)還原酶是控制合成速度的關鍵酶。因此，抑制了這個酶的活性，就能有效地減少或阻斷體內膽固醇的合成，從而達到防治高血脂病的目的。1979年遠藤章等首先報道從紅色紅曲霉M. ruber的發酵液中分離出一種強有力的HMG-CoA還原酶的抑制劑,這種物質稱為莫納可林K (monacolin K),現已知的莫鈉可林K 及關聯物質有 Monacolin J, K, L, X 和 Dihydrornrnevinolin 和 Dihydrornevinolin L0Monacolin類物質的濃度只要達到O. 001 O. 005ug / ml,膽固醇的合成就會受阻。向動物血液中注入少量的Monacolin K，不僅可以降低膽固醇，而且對重癥高膽固醇血癥患者也極為有效。特別是對導致動脈硬化最嚴重的低密度脂蛋白有優先降低的作用，這是這類活性物質藥理的一大特點。這類降膽固醇藥物已進入臨床應用。2、降血壓、降血糖活性物質V-胺基丁酸(GABA)GABA為大腦的化學傳遞物質，可調節大腦的興奮及抑制。除了治療各種癲癇外，還具有降血壓、降血糖作用。日本國立健康研究所進行飼料添加“紅曲培養物”的動物試驗中，發現添加O. 2% O. 3% “紅曲培養物”的飼料可使患有先天性高血壓癥老鼠的血壓由超過200mmHg降至180mmHg以下,其有效成分為Y -胺基丁酸及Glucosamine或紅曲霉的其他細胞壁成分。日人山內等直接以紅曲培養物做飼料進行試驗,可使兔子的血清膽固醇降低15% 18%，飼喂后O. 5h體內血糖比對比組降低23% 33%，I小時后血糖仍降低19% 29%。3、麥角固醇麥角固醇是維生素D2的前體，當它受到紫外線照射后即轉化為維生素D2。維生素D2可用于防治嬰幼兒佝僂病，對促進孕婦、老年人對鈣、磷的吸收有明顯的生理作用。自然界中維生素D2含量并不豐富，一般食品中含量很少，因此需要適當補充，尤其是嬰幼兒及孕婦、乳母等。紅曲霉菌中許多菌株能夠產生麥角固醇，有的高達2%以上。另外，麥角固醇還是生產“考的松”、激素黃酮體的原料。在食品中添加紅曲，對人類防治維生素D缺乏癥有重要作用。紅曲抗流感牛奶是一種健康、安全并具有一定醫療作用的新型功能性食品，長期飲用紅曲抗流感牛奶，可以增加機體免疫功能，抵抗流感等呼吸道病毒的感染，減輕感冒患者的癥狀，同時還能改善腸道微生態環境，清除腸道中病原菌和腐敗菌及其產生的毒素，促進機體健康。紅曲抗流感牛奶對人體安全無害。具有很好的經濟效益和社會效益。目前關于紅曲抗流感牛奶的研究鮮有報道。

發明內容
本發明目的在于公開一種從紅曲菌中提取紅曲素的方法，本發明另一目的在于公開一種含有上述紅曲素的牛奶及其制備方法。本發明目的是通過如下技術方案實現的本發明的乳液原料組成為牛奶100體積份，紅曲素O. 0Γ2體積份。本發明乳液的原料組成優選為牛奶100體積份，紅曲素O. 5體積份。本發明乳液的原料組成優選為 牛奶100體積份，紅曲素O. 25體積份。本發明乳液的原料組成優選為牛奶100體積份，紅曲素I. 5體積份。其中紅曲素的制備方法如下I、紅曲菌種培養(I)配制斜面菌種培養基稱量切成小塊狀去皮馬鈴薯40 60重量份，向其中加入90-110體積份去離子水，煮沸I小時后將所得混合物過濾，所得過濾清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根據濾液體積加瓊脂I. 5% 2%，加熱待混合液全部溶化后分裝入滅菌試管中，放入高壓滅菌鍋內，使用O. 06 O. IMPa壓力滅菌20 40min，滅菌后將試管略傾斜制成斜面，等待其自然冷卻；(2)紅曲菌接種培養在無菌條件下在(I)處所得斜面菌種培養基中接種紅曲霉原菌，在生化培養箱內經32 35°C培養7 8天，用無菌移液管吸取O. 2^1%的無菌冰醋酸溶液5體積份至試管斜面培養種子內，攪勻后用無菌吸管吸取2 3體積份菌液備用；(3)紅曲菌種三角瓶培養將2(Γ40重量份大米裝入三角瓶中，洗凈后浸泡3 4小時，將水倒出并浙凈多余的水，O. 06、. IMPa壓力下滅菌2(Γ30分鐘，冷卻后用無菌竹筷將米團打散，加入(2)處所備用的菌液I體積份，搖勻后放入25 30°C生化培養箱培養，待米粒開始發紅后，每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上，視情況加入無菌水調節濕度，培養1(Γ15天，將曲種倒出.在4(T45°C下進行烘干，使水分降到12%以下，但不低于7%，得紅曲菌種A ; 將紅曲菌種A加入100體積份的3%冰醋酸制成懸浮液B，待擴大培養使用；(4)擴大培養選擇顆粒飽滿、新鮮的大米，除去雜物，將8(Γ120重量份的大米裝入三角瓶中，洗凈后浸4飛h，洗凈后浙凈多余水分，蒸5 15min，以米透心為度，浙凈多余的水，O. 06、· IMPa壓力下滅菌30min，降溫至35 40°C后接種(3)中獲得的菌種A懸浮液B ;每100重量份滅菌后的米接種懸浮液B 15體積份，用無菌竹筷攪拌均勻，于25 35°C無菌生化培養箱中培養3 4天，培養期間每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上；(5)待全部米粒都呈深紅色，根據曲料干濕程度，進行第一次凋濕，濕度70-90%，向曲料上噴灑一定量的冰醋酸溶液至溶液pH為3. 5，并拌勻，即為洗曲，保持32 35°C保溫培養,每7、小時搖動三角瓶混勻一次；2、24小時后進行洗曲第二次，每隔4小時翻拌一次；3、24小時后進行洗曲第三次，每隔6h翻拌一次；4、每批曲7 8天可得，4(T45 °C下烘干，得成曲C ;5、成曲C加入:Γ5體積倍無菌超純水，制成均漿；加入3 8體積倍無菌超純水，放置-10°C -30°C反復凍融2 3次；在溫度4 8°C下將凍融的均漿以每分鐘8000轉離心1(Γ30分鐘，去除沉淀；用切向流超濾設備截留分子量〈30000道爾頓上清液，即為紅曲素；除菌過濾，收集備用。紅曲素的制備方法優選為I、紅曲菌種培養(I)配制斜面菌種培養基稱量切成小塊狀去皮馬鈴薯50重量份，向其中加入100體積份去離子水，煮沸I小時后將所得混合物過濾，所得過濾清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根據濾液體積加瓊脂2%，加熱待混合液全部溶化后分裝入滅菌試管中.放入高壓滅菌鍋內，使用O. IMPa壓力滅菌30分鐘，滅菌后將試管略傾斜制成斜面，等待其自然冷卻；(2)紅曲菌接種培養在無菌條件下在(I)處所得斜面菌種培養基中接種紅曲霉原菌，在生化培養箱內經32 35°C培養7 8天，用無菌移液管吸取O. 2%的無菌冰醋酸溶液5體積份至試管斜面培養種子內，攪勻后用無菌吸管吸取2體積份菌液備用；(3)紅曲菌種三角瓶培養將40重量份大米裝入三角瓶中，洗凈后浸泡T4h，將水倒出并浙凈多余的水，O. IMPa壓力下滅菌30min，冷卻后用無菌竹筷將米團打散，加入(2)處所備用的菌液I體積份，搖勻后放入3(T35°C生化培養箱培養，待米粒開始發紅后，每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上，視情況加入無菌水調節濕度，培養12天，將曲種倒出，在4(T45°C下進行烘干，使水分降到12%以下，但不低于7%，得紅曲菌種A ;將紅曲菌種A加入100體積份的3%冰醋酸制成懸浮液B，待擴大培養使用；(4)擴大培養選擇顆粒飽滿、新鮮的大米，除去雜物，將100重量份大米入三角瓶中，洗凈后浸4 6h，洗凈后浙凈多余水分，蒸5 15分鐘，以米透心為度，浙凈多余的水，O. IMPa壓力下滅菌30分鐘，降溫至35 40°C后接種(3)中獲得的菌種A懸浮液B ;每100重量份滅菌后的米接種懸浮液B15體積份，用無菌竹筷攪拌均勻，于25 30°C無菌生化培養箱中培養3 4天，培養期間每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上；(5)待全部米粒都呈深紅色，根據曲料干濕程度，進行第一次凋濕，向曲料上噴灑一定量的冰醋酸溶液至溶液PH為3. 5，并拌勻，即為洗曲，保持32 35°C保溫培養，每7 8小時搖動三角瓶混勻一次；2、24小時后進行洗曲第二次，每隔4小時翻拌一次3、24小時后進行洗曲第三次，每隔6小時翻拌一次4、每批曲7 8天可得，4(T45 °C下烘干，得成曲C ;5、成曲C加入5體積倍無菌超純水,制成均衆；加入4體積倍無菌超純水,放置于_20°C反復凍融3次；在溫度4°C下將凍融的均漿，以每分鐘8000轉離心20分鐘，去除沉淀；用切向流超濾設備截留分子量〈30000道爾頓的上清液，即為紅曲素；除菌過濾，收集備用；每15(Γ250體積份鮮奶中加入通過紅曲素的制備方法所制備的紅曲素O. θΓ . 5
體積份，即為紅曲抗流感牛奶。上述紅曲霉原菌可以天然分離，也可以向保藏機構(菌株保藏編號CPCC400017，中國醫學科學院醫藥生物技術研究所)購買。本發明的紅曲素抗流感牛奶健康、安全，長期服用具有預防流感和改善感冒患者癥狀的效果，同時改善腸道微生態環境，清除腸道中病原菌和腐敗菌及其產生的毒素，促進機體健康。紅曲牛奶對人體安全無害。下述實驗例用于進一步說明但不限于本發明。實驗例I本發明紅曲牛奶(實施例I制備)抵抗小鼠流感病毒感染實驗動物染毒及處死方法選用中山大學動物實驗中心6 8周齡SPF級雌性BALB/c小鼠(2(T22g)，以乙醚將小鼠輕度麻醉后，分別滴鼻感染流感病毒，感染劑量為每只50uL的IX 104PFU/mL的流感病毒。正常空白組同等條件下用蒸餾水滴鼻，在病毒感染后第5天和14天，每組分別處死5只小鼠。分組和處理將小鼠隨機分為3組(每組10只)，分為預防組(先給正常小鼠灌胃15天然后再感染流感病毒，繼續灌胃10天紅曲牛奶，每天50微升)、治療組(病毒感染小鼠后連續灌胃紅曲抗流感牛奶10天，每天50微升)，同時用普通牛奶組作為對照。I、本發明紅曲牛奶對檢測CTL細胞活性的影響肺實質細胞的制備將剪碎的肺組織放在振蕩器上與膠原酶D (200ug/mL)和DNA酶I (40ug/mL)37°C條件下作用I小時，加入10毫升RPMI 1640培養基(含10%胎牛血清、2X10-5mol/L的2-巰基乙醇和抗生素)，消化15分鐘，將上述液體用不銹鋼濾網過濾，用淋巴細胞分離液進行密度梯度離心，收集單細胞懸液。用O. IMOI的流感病毒感染鼠淋巴瘤EL-4細胞作為靶細胞，與淋巴細胞在C02中37°C培養4h，采用乳酸脫氫酶釋放實驗檢測CTL細胞活性。表I :淋巴細胞增殖試驗結果
權利要求
1.ー種抗流感牛奶，其特征在于100體積份牛奶中含有紅曲素O. 0Γ2體積份；其中紅曲素由以下方法制成 A、紅曲菌種培養 (O配制斜面菌種培養基稱量切成小塊狀去皮馬鈴薯50重量份，向其中加入100體積份去離子水，煮沸I小時后將所得混合物過濾，所得過濾清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根據濾液體積加瓊脂I. 5°/Γ2%，加熱待混合液全部溶化后分裝入滅菌試管中，放入高壓滅菌鍋內，使用O. 06、. IMPa壓カ滅菌2(T40min，滅菌后將試管略傾斜制成斜面，等待其自然冷卻； (2)紅曲菌接種培養在無菌條件下在(I)處所得斜面菌種培養基中接種紅曲霉原菌，在生化培養箱內經32 35°C培養7 8天，用無菌移液管吸取O. 2^1%的無菌冰醋酸溶液5體積份至試管斜面培養種子內，攪勻后用無菌吸管吸取2 3體積份菌液備用； (3)紅曲菌種三角瓶培養將2(Γ40重量份大米裝入三角瓶中，洗凈后浸泡3 4h，將水倒出并浙凈多余的水，O. 06、. IMPa壓カ下滅菌2(T30min，冷卻后用無菌竹筷將米團打散，加入(2)處所備用的菌液I體積份，搖勻后放入25 30°C生化培養箱培養，待米粒開始發紅后，每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上，視情況加入無菌水調節濕度，培養1(Γ15天，將曲種倒出.在4(T45°C下進行烘干，使水分降到12%以，但不低于7%，得紅曲菌種A;將紅曲菌種A加入100體積份的3%冰醋酸制成懸浮液B，待擴大培養使用； (4)擴大培養選擇顆粒飽滿、新鮮的大米，除去雜物，將8(Γ120重量份的大米裝入三角瓶中，洗浄后浸4 6h，洗浄后浙凈多余水分，蒸5 15min，以米透心為度，浙凈多余的水，O.06、· IMPa壓カ下滅菌30min，降溫至35 40°C后接種(3)中獲得的菌種A懸浮液B ;每100重量份滅菌后的米接種懸浮液B 15體積份，用無菌竹筷攪拌均勻，于25 35°C無菌生化培養箱中培養3 4天，培養期間每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上； (5)待全部米粒都呈深紅色，根據曲料干濕程度，進行第一次凋濕，向曲料上噴灑一定量的冰醋酸溶液至溶液PH為3. 5，并拌勻，即為洗曲，保持32 35°C保溫培養，每7 8小時搖動三角瓶混勻一次； B、24小時后進行洗曲第二次，每隔4小時翻拌一次； C、24小時后進行洗曲第三次，每隔6小時翻拌一次； D、每批曲7 8天可得，4(T45°C下烘干，得成曲C； E、成曲C加入3飛體積倍無菌超純水，超聲波20-30分鐘制成均漿；加入3 8體積倍無菌超純水，放置-10°C'3(TC反復凍融2 3次；在溫度4 8°C下將凍融的均漿以每分鐘8000轉離心1(Γ30分鐘，去除沉淀；用切向流超濾設備截留分子量〈30000道爾頓上清液，即為紅曲素；除菌過濾，收集備用。
2.如權利要求I所述的紅曲牛奶，其特征在于100體積份牛奶中含有紅曲素O.5體積份。
3.如權利要求I所述的紅曲抗流感牛奶，其特征在于100體積份牛奶中含有紅曲素0.25體積份。
4.如權利要求I所述的紅曲抗流感牛奶，其特征在于100體積份牛奶中含有紅曲素1.5體積份。
5.如權利要求1-4任一所述的紅曲抗流感牛奶，其特征在于按常規方法將紅曲素加入到鮮奶中，制成紅曲牛奶。
6.如權利要求1-4任一所述的紅曲牛奶，其特征在于紅曲素的制備方法包括如下步驟 A、紅曲菌種培養 (O配制斜面菌種培養基稱量切成小塊狀去皮馬鈴薯50重量份，向其中加入100體積份去離子水，煮沸I小時后將所得混合物過濾，所得過濾清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根據濾液體積加瓊脂2%，加熱待混合液全部溶化后分裝入滅菌試管中.放入高壓滅菌鍋內，使用O. IMPa壓カ滅菌30分鐘，滅菌后將試管略傾斜制成斜面，等待其自然冷卻； (2)紅曲菌接種培養在無菌條件下在(I)處所得斜面菌種培養基中接種紅曲霉原菌，在生化培養箱內經32 35°C培養7 8天，用無菌移液管吸取O. 2%的無菌冰醋酸溶液5體積份至試管斜面培養種子內，攪勻后用無菌吸管吸取2體積份菌液備用； (3)紅曲菌種三角瓶培養將40重量份大米裝入三角瓶中，洗浄后浸泡3 4h，將水倒出并浙凈多余的水，O. IMPa壓カ下滅菌30min，冷卻后用無菌竹筷將米團打散，加入(2)處所備用的菌液I體積份，搖勻后放入3(T35°C生化培養箱培養，待米粒開始發紅后，每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上，視情況加入無菌水調節濕度，培養12天，將曲種倒出，在4(T45°C下進行烘干，使水分降到12%以，但不低于7%，得紅曲菌種A ;將紅曲菌種A加入100體積份的3%冰醋酸制成懸浮液B，待擴大培養使用； (4)擴大培養選擇顆粒飽滿、新鮮的大米，除去雜物，將100重量份大米入三角瓶中，洗浄后浸4 6h，洗浄后浙凈多余水分，蒸5 15min，以米透心為度，浙凈多余的水，O. IMPa壓力下滅菌30min，降溫至35 40°C后接種(3)中獲得的菌種A懸浮液B ;姆100重量份滅菌后的米接種懸浮液B15體積份，用無菌竹筷攪拌均勻，于25KTC無菌生化培養箱中培養3 4天，培養期間每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上； (5)待全部米粒都呈深紅色，根據曲料干濕程度，進行第一次凋濕，向曲料上噴灑一定量的冰醋酸溶液至溶液PH為3. 5，并拌勻，即為洗曲，保持32 35°C保溫培養，每7 8小時搖動三角瓶混勻一次； B、24小時后進行洗曲第二次，每隔4小時翻拌一次 C、24小時后進行洗曲第三次，每隔6小時翻拌一次 D、每批曲7 8天可得，4(T45°C下烘干，得成曲C； E、成曲C加入5體積倍無菌超純水，超聲波20-30分鐘制成均漿；加入4體積倍無菌超純水，放置于_20°C反復凍融3次；在溫度4°C下將凍融的均漿，以每分鐘8000轉離心20分鐘，去除沉淀；用切向流超濾設備截留分子量〈30000道爾頓上清液即為紅曲素；除菌過濾，即得。
7.如權利要求5所述的紅曲抗流感牛奶，其特征在于紅曲素的制備方法包括如下步驟 A、紅曲菌種培養 (O配制斜面菌種培養基稱量切成小塊狀去皮馬鈴薯50重量份，向其中加入100體積份去離子水，煮沸I小時后將所得混合物過濾，所得過濾清液中加入O. 5重量份蛋白胨，根據濾液體積加瓊脂2%，加熱待混合液全部溶化后分裝入滅菌試管中.放入高壓滅菌鍋內，使用O. IMPa壓カ滅菌30分鐘，滅菌后將試管略傾斜制成斜面，等待其自然冷卻；(2)紅曲菌接種培養在無菌條件下在(I)處所得斜面菌種培養基中接種紅曲霉原菌，在生化培養箱內經32 35°C培養7 8天，用無菌移液管吸取O. 2%的無菌冰醋酸溶液5體積份至試管斜面培養種子內，攪勻后用無菌吸管吸取2體積份菌液備用； (3)紅曲菌種三角瓶培養將40重量份大米裝入三角瓶中，洗浄后浸泡3 4h，將水倒出并浙凈多余的水，O. IMPa壓カ下滅菌30分鐘，冷卻后用無菌竹筷將米團打散，加入(2)處所備用的菌液I體積份，搖勻后放入3(T35°C生化培養箱培養，待米粒開始發紅后，每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上，視情況加入無菌水調節濕度，培養12天，將曲種倒出，在4(T45°C下進行烘干，使水分降到12%以，但不低于7%，得紅曲菌種A ;將紅曲菌種A加入100體積份的3%冰醋酸制成懸浮液B，待擴大培養使用； (4)擴大培養選擇顆粒飽滿、新鮮的大米，除去雜物，將100重量份大米入三角瓶中，洗浄后浸4飛小吋，洗浄后浙凈多余水分，蒸5 15分鐘，以米透心為度，浙凈多余的水，O.IMPa壓カ下滅菌30min，降溫至35 40°C后接種(3)中獲得的菌種A懸浮液B ;每100重量份滅菌后的米接種懸浮液B15體積份，用無菌竹筷攪拌均勻，于25 30°C無菌生化培養箱中培養3 4天，培養期間每天搖動三角瓶，將瓶壁上的水珠滾到米上； (5)待全部米粒都呈深紅色，根據曲料干濕程度，進行第一次凋濕，向曲料上噴灑一定量的冰醋酸溶液至溶液PH為3. 5，并拌勻，即為洗曲，保持32 35°C保溫培養，每7 8小時搖動三角瓶混勻一次； B、24小時后進行洗曲第二次，每隔4小時翻拌一次 C、24小時后進行洗曲第三次，每隔6小時翻拌一次 D、每批曲7 8天可得，4(T45°C下烘干，得成曲C； E、成曲C加入5體積倍無菌超純水，超聲波20-30分鐘制成均漿；加入4體積倍無菌超純水，放置于_20°C反復凍融3次；在溫度4°C下將凍融的均漿，以每分鐘8000轉離心20分鐘，去除沉淀；用切向流超濾設備截留分子量〈30000道爾頓上清液，即為紅曲素；除菌過濾，即得。
全文摘要
本發明公開了一種抗流感牛奶及其制備方法。本發明抗流感牛奶是通過在普通牛奶中添加一種從紅曲菌中提取的紅曲活性提取物——紅曲素，其中制備紅曲素的過程中，采用培養、洗曲、分子截留、過濾等步驟，制得的紅曲素分子量<30000道爾頓。本發明的含紅曲素的牛奶健康、安全，長期服用具有預防流感的效果，同時改善腸道微生態環境，清除腸道中病原菌和腐敗菌及其產生的毒素，促進機體健康。抗流感牛奶對人體安全無害，對腸道中一些有益微生物不會產生影響。
文檔編號A23C9/152GK102845525SQ201210369998
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月28日 優先權日2012年9月28日
發明者陸家海, 杜啟科, 王銀香, 于忠波 申請人:山東銀香大地乳業有限公司, 王銀香