高密度培養裂壺藻的方法
【專利摘要】本發明公開了一種高密度培養裂壺藻的方法，包括菌種活化，制備豆粕水解物，種子培養，搖瓶培養，10L發酵罐培養，500L發酵罐培養。方法簡單易操作，成本低，生物量高。
【專利說明】高密度培養裂壺藻的方法
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明屬于生物【技術領域】，具體涉及高密度培養裂壺藻的方法。
[0003]
【背景技術】
[0004]裂壺藻又稱裂殖壺菌，屬于真菌門(Eumycota)、卵菌綱(Oomycetes)、水霉目(Saprolegniales)、破囊壺菌科(Thraustochytriaceae)的一類海洋真菌，單細胞、球形。裂壺藻細胞積累大量對人體有用的活性物質，如:油脂、色素、角鯊烯等，其中油脂占細胞干重的70%以上，總脂中DHA含量非常高，結構類似的脂肪酸含量低，容易分離純化，而且沒有魚腥味。是一種有潛力的DHA原料。現有培養裂壺藻的方法普遍存在生物量不高的問題。
[0005]
【發明內容】
[0006]為了克服現有【技術領域】存在的上述缺陷，本發明的目的在于，提供一種高密度培養裂壺藻的方法，解決現有技術培養裂壺藻的方法普遍存在生物量不高的問題。
[0007]本發明提供的高密度培養裂壺藻的方法，包括以下 步驟:
一、菌種活化，將保藏于-70°C的菌種轉接于斜面培養基，25°C培養3—4天；
二、制備豆柏水解物，取32g豆餅粉加入65mlIM的HCl，定容至250ml，120°C高壓水解25分鐘，加入50 mlIM的NaOH溶液，6000rpm離心8分鐘，上清液用IM的NaOH溶液調pH至7.0，6000rpm離心8分鐘除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即為40g/L的豆柏水解液；
三、種子培養，一級種子:將活化的斜面菌種接入裝有IOOmL種子培養基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培養2天；二級種子:取4ml —級種子，接入裝有IOOmL種子培養基的500mL 三角瓶，25°C、200rpm 培養 2 天；
四、搖瓶培養，取4mL二級種子液接入裝有IOOmL發酵培養基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培養5天；
五、IOL發酵罐培養,將培養好的液體種子,按4%接種量接種于發酵培養基中，在25°C和4L/min的通氣量下培養3天，通過流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自動控制發酵液pH ；
六、500L發酵罐培養，將培養好的液體種子，按10%接種量接種于發酵培養基中，在25°〇和通氣比3.48 L miiTV1的通氣量下培養4天，通過流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自動控制發酵液pH。
[0008]所述斜面培養基為60 g/L葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，20g/L瓊脂，50% v/v天然海水,pH 6.0 ;所述步驟三或四或五所用發酵培養基為60 g/L的葡萄糖,40 g/L豆柏水解物,50% v/v天然海水，pH 6.0 ;所述步驟六所用發酵培養基為125g/L葡萄糖，10g/L酵母膏,59/L大豆蛋白胨,適量自然海水。[0009]本發明提供的高密度培養裂壺藻的方法，其有益效果在于，方法簡單易操作，成本低，生物量高。
[0010]
【具體實施方式】
[0011]下面結合一個實施例，對本發明提供的高密度培養裂壺藻的方法進行詳細的說明。
[0012]
實施例
[0013]本實施例的高密度培養裂壺藻的方法，包括以下步驟:
一、菌種活化，將保藏于-70°C的菌種轉接于斜面培養基，25°C培養3—4天；
二、制備豆柏水解物，取32g豆餅粉加入65mlIM的HCl，定容至250ml，120°C高壓水解25分鐘，加入50 mlIM的NaOH溶液，6000rpm離心8分鐘，上清液用IM的NaOH溶液調pH至7.0，6000rpm離心8分鐘除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即為40g/L的豆柏水解液；
三、種子培養，一級種子:將活化的斜面菌種接入裝有IOOmL種子培養基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培養2天；二級種子:取4ml —級種子，接入裝有IOOmL種子培養基的500mL 三角瓶，25°C、200rpm 培養 2 天；
四、搖瓶培養，取4mL二級種子液接入裝有IOOmL發酵培養基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培養5天；
五、IOL發酵罐培養,將培養好的液體種子,按4%接種量接種于發酵培養基中，在25V和4L/min的通氣量下培養3天，通過流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自動控制發酵液pH ；
六、500L發酵罐培養，將培養好的液體種子，按10%接種量接種于發酵培養基中，在25°〇和通氣比3.48 L miiTV1的通氣量下培養4天，通過流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自動控制發酵液pH。
[0014]所述斜面培養基為60 g/L葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，20g/L瓊脂，50% v/v天然海水,pH 6.0 ;所述步驟三或四或五所用發酵培養基為60 g/L的葡萄糖,40 g/L豆柏水解物,50% v/v天然海水，pH 6.0 ;所述步驟六所用發酵培養基為125g/L葡萄糖，10g/L酵母膏,59/L大豆蛋白胨,適量自然海水。
[0015]此種培養方法生物量可達35g/L。
【權利要求】
1.一種高密度培養裂壺藻的方法，其特征在于:包括以下步驟: 一、菌種活化，將保藏于-70°C的菌種轉接于斜面培養基，25°C培養3—4天； 二、制備豆柏水解物，取32g豆餅粉加入65mlIM的HCl，定容至250ml，120°C高壓水解25分鐘，加入50 mlIM的NaOH溶液，6000rpm離心8分鐘，上清液用IM的NaOH溶液調pH至7.0，6000rpm離心8分鐘除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即為40g/L的豆柏水解液； 三、種子培養，一級種子:將活化的斜面菌種接入裝有IOOmL種子培養基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培養2天；二級種子:取4ml —級種子，接入裝有IOOmL種子培養基的500mL 三角瓶，25°C、200rpm 培養 2 天； 四、搖瓶培養，取4mL二級種子液接入裝有IOOmL發酵培養基的500mL三角瓶，25°C、200rpm培養5天； 五、IOL發酵罐培養,將培養好的液體種子,按4%接種量接種于發酵培養基中，在25V和4L/min的通氣量下培養3天，通過流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自動控制發酵液pH ； 六、500L發酵罐培養，將培養好的液體種子，按10%接種量接種于發酵培養基中，在25°〇和通氣比3.48 L miiTV1的通氣量下培養4天，通過流加2mol/LHCI或2mol/LNa0H自動控制發酵液pH。
2.根據權利要求1所述的高密度培養裂壺藻的方法，其特征在于:所述斜面培養基為 60 g/L葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，20g/L瓊脂，50% v/v天然海水，pH 6.0。
3.根據權 利要求1所述的高密度培養裂壺藻的方法，其特征在于:所述步驟三或四或五所用發酵培養基為60 g/L的葡萄糖，40 g/L豆柏水解物，50% v/v天然海水，pH 6.0。
4.根據權利要求1所述的高密度培養裂壺藻的方法，其特征在于:所述步驟六所用發酵培養基為125g/L葡萄糖，10g/L酵母膏，59/L大豆蛋白胨,適量自然海水。
【文檔編號】C12N1/12GK103881920SQ201210561184
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月21日 優先權日:2012年12月21日
【發明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權汗, 李之詳, 許團輝 申請人:青島中仁藥業有限公司