專利名稱：一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及ー種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
緩慢葡萄球菌(Staphylococcuslentus)屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)。該菌由Schleifer K H等在1983年將其劃分為葡萄球菌屬的ー個(gè)獨(dú)立的種，即緩慢葡萄球菌(S. lentus)。緩慢葡萄球菌曾被認(rèn)為不具有致病性，但越來(lái)越多的資料表明S.1entus是人類或許多動(dòng)物不可忽視的致病菌，可引起人類疾病并在醫(yī)院感染中占據(jù)重要地位，尤其對(duì)于新生幼兒、存在嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病或長(zhǎng)期接受醫(yī)院治療的病人等免疫力低下的人群更容易導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。由于S.1entus的多重耐藥問(wèn)題日益嚴(yán)重，S.1entus引起的感染在國(guó)內(nèi) 外呈顯著増加的趨勢(shì)。所謂微生物培養(yǎng)是ー種用人工方法使微生物生長(zhǎng)繁殖的技木，而選擇性選擇性培養(yǎng)基是用來(lái)促進(jìn)或抑制一定類型的生物體(如細(xì)胞或細(xì)菌等)而設(shè)計(jì)的選擇性培養(yǎng)基，利用這種選擇性培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來(lái)。目前臨床上普遍使用的葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基為甘露醇高鹽瓊脂(Manitol SaltAgar)，用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)。培養(yǎng)基成分為蛋白胨、雞蛋蛋白液、D-甘露醇、氯化鈉、酚紅、瓊脂。金黃色葡萄球菌菌落為黃色，大腸桿菌和沙門氏菌菌落為無(wú)色。但是，該種培養(yǎng)基并不能選擇性培養(yǎng)緩慢葡萄球菌，其原因在于在目前的選擇性培養(yǎng)基中金黃色葡萄球菌比緩慢葡萄球菌生長(zhǎng)更快，很快覆蓋了培養(yǎng)基，緩慢葡萄球菌無(wú)法生長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供ー種對(duì)緩慢葡萄球菌分離率高的選擇性培養(yǎng)基。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在，配制1000ml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ；枸櫞酸鎂0.5g;瓊脂15g;假細(xì)錐甲素8 12mg;N-こ酰基-D-葡萄糖胺3.6 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;蒸餾水加至1000ml。優(yōu)化方案中，每1000ml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg。優(yōu)化方案中，每1000ml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸0. lg。優(yōu)化方案中，每1000ml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的百合水煮液200 300ml。最優(yōu)化方案中，姆IOOOrnl選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg ；L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(I)取百合加水煮沸I小時(shí)，過(guò)濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液；(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過(guò)濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。其中所述的麥芽浸粉、雞蛋蛋白液提供碳氮源和能量；枸櫞酸鎂和磷酸ニ氫鉀為緩沖劑，并可以抑制雜菌生長(zhǎng)山-半胱氨酸屬氨基酸類，為營(yíng)養(yǎng)劑；瓊脂是選擇性培養(yǎng)基的凝固劑；假細(xì)錐甲素對(duì)于金葡菌具有特異的抑菌作用，對(duì)于緩慢葡萄球菌無(wú)效；N_こ酰基-D-葡萄糖胺為緩慢葡萄球菌特異性營(yíng)養(yǎng)劑，可以特異性的促進(jìn)緩慢葡萄球菌繁殖。雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長(zhǎng)因子、激素等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)緩慢葡萄球菌的繁殖和生長(zhǎng)都是很重要的因素，此外雞蛋蛋白液還具有維持選擇性培養(yǎng)基PH值恒定的作用。銅離子屬于重金屬離子，在5mg/L這個(gè)濃度劑量下，沉積于金葡菌內(nèi)部，導(dǎo)致胞壁消失或變薄，核糖體聚集成團(tuán)塊，最終導(dǎo)致細(xì)菌變形及破裂，呈現(xiàn)重金屬源性損傷，而緩慢葡萄球菌對(duì)重金屬的運(yùn)輸能力和滲透能力低于金葡菌，也即重金屬的抗性較高，故而加入硫酸銅可以有效地抑制金葡菌生長(zhǎng)。百合為百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb 、百合Lilium brown ii F. E. Brown var. viridulum Baker 或細(xì)葉百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉質(zhì)鱗葉，含有蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、還元糖、維生素B1、B2、泛酸、維生素C、￠-胡蘿卜素等多種成分，可以提供能量代謝、細(xì)胞發(fā)育、新陳代謝因子，有助于促進(jìn)緩慢葡萄球菌生長(zhǎng)，尤其是重金屬環(huán)境下菌落的生長(zhǎng)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、緩慢葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)際情況，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素8mg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;憐酸~■龜!鐘0. 2g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥牙浸粉；雞蛋蛋白液；氣化納；構(gòu)櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀溶于蒸餾水中，混勻過(guò)濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min,滅菌后分裝。實(shí)施例2，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素12mg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀；硫酸銅溶于蒸餾水中，混勻過(guò)濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min，滅菌后分裝。實(shí)施例3，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素IOmg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ；L-半胱氨酸0.1g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸溶于蒸餾水中，混勻過(guò)濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min，滅菌后分裝。實(shí)施例4，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素9mg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;濃度200g/L的百合水煮液200ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法(1)取百合加水煮沸I小時(shí)，過(guò)濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀；溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過(guò)濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min，滅菌后分裝。實(shí)施例5，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素Ilmg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ；L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液300ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法為
(1)取百合加水煮沸I小時(shí)，過(guò)濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過(guò)濾后，蒸 餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。所述的百合水煮液濃度為200g/L，指的是每升百合水煮液中含有生藥200g。本發(fā)明所得緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基具有檢出可靠、緩慢葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)，為臨床資料充分證明，有關(guān)資料如下。I對(duì)象與方法。1.1選擇性培養(yǎng)基制備共設(shè)3組，分別為對(duì)照組、實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組。對(duì)照組為葡萄球菌選擇性瓊脂110 (CHAPMAN瓊脂)，配方為胰酪蛋白胨、酵母浸粉、明膠、D-甘露醇、乳糖、氯化鈉、磷酸氫ニ鉀、瓊脂。實(shí)施例1方案組、實(shí)施例5方案組的配方和制備方法見(jiàn)實(shí)施例。1. 2方法將30份經(jīng)由PCR確定緩慢葡萄球菌陽(yáng)性的標(biāo)本中混入金色葡萄球菌，接種于培養(yǎng)基上，在37°C下孵育24小吋。1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS 13. 0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Pく 0. 05表示有顯著性意義。2結(jié)果在30份接種標(biāo)本中，細(xì)菌培養(yǎng)分離并鑒定為緩慢葡萄球菌的，實(shí)施例1方案組為25例，實(shí)施例5方案組為26例。對(duì)照組CHAPMAN瓊脂培養(yǎng)基菌落經(jīng)鑒定最后被證實(shí)均為金葡菌，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，本發(fā)明各實(shí)施例組與對(duì)照組比較具有明顯差異(P〈0. 001)。結(jié)果表明，本發(fā)明實(shí)施例緩慢葡萄球菌分離率明顯高于現(xiàn)有的選擇性培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在，配制IOOOml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂O. 5g ;瓊脂15g ;假細(xì)錐甲素8 12mg ；N-乙酰基-D-葡萄糖胺3. 6 g ;磷酸二氫鉀O. 2g ;蒸餾水加至1000ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有L-半胱氨酸O. lg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基，其特征在每IOOOml選擇性培養(yǎng)基還含有硫酸銅5mg ；L-半胱氨酸O.1g ;濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
6.一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取百合加水煮沸I小時(shí)，過(guò)濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液； (2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-乙酰基-D-葡萄糖胺；磷酸二氫鉀；L-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過(guò)濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種緩慢葡萄球菌選擇性培養(yǎng)基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml選擇性培養(yǎng)基的配方中含有麥芽浸粉15g；雞蛋蛋白液150ml；氯化鈉5g；枸櫞酸鎂0.5g；瓊脂15g；假細(xì)錐甲素8～12mg；N-乙酰基-D-葡萄糖胺3.6g；磷酸二氫鉀0.2g；蒸餾水加至1000ml。最佳優(yōu)化配方制備方法為取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細(xì)錐甲素；N-乙酰基-D-葡萄糖胺；磷酸二氫鉀；L-半胱氨酸及硫酸銅溶于百合水煮液中，混勻，定容，滅菌后分裝。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有檢出可靠、緩慢葡萄球菌分離率高的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/14GK103014127SQ201310010750
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2013年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月13日
發(fā)明者候素君 申請(qǐng)人:候素君