專利名稱：皺紋盤鮑微衛星分子標記及制備方法
技術領域：
本發明涉及分子標記技術，具體涉及一種可分析皺紋盤鮑野生群體的遺傳多樣性，鑒定養殖群體之間的親緣關系的皺紋盤鮑微衛星分子標記及制備方法。
背景技術：
微衛星(Microsatellite)又稱作短重復序列(ShortTandem Repeats, STRs)或者簡單重復序列(Simple Sequence Repeat, SSRs),是一類遍布于真核生物基因組中的由幾個核苷酸對(稱為核心序列，一般為l_6bp)為重復單位組成的簡單串聯重復。其重復序列長短在同一物種不同遺傳型間高度可變，但重復序列兩端一般高度保守。根據此保守序列設計引物，即可通過PCR技術分析核心序列重復次數的變異，在不同遺傳型之間檢測到多態。由于微衛星DNA具有共顯性、選擇中性和多態信息含量高等特點，它已經成為目前應用最廣泛的一種分子標記。目前微衛星分子標記的應用主要有動植物遺傳連鎖圖譜的構建、QTL定位、品種資料鑒定、遺傳多樣性分析和親子鑒定等方面。現有微衛星分子標記的制備方法基本是依次按如下步驟進行:皺紋盤鮑基因組DNA的制備、基因組酶切及目的大小片段的回收、DNA片段與接頭的連接、連接產物的預擴增、生物素探針雜交、磁珠法富集微衛星DNA片段、微衛星富集文庫的構建、微衛星陽性克隆的篩選及測序、微衛星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟。皺紋盤鮑(Haliotisdiscus hannai)屬于軟體動物門腹足綱、前鰓亞綱、原始腹足目，是鮑科貝類分布于我國北方的唯一種，也是遼寧和山東沿海海水養殖的重要對象。20世紀90年代開始，皺紋盤鮑的工廠化養殖規模增長迅速，已經成為沿海地區經濟發展新的增長點。但是，迄今為止，還沒有關于皺紋盤鮑微衛星DNA分子標記的相關報道，無法對野生鮑的遺傳資源狀況進行調查并開展育種工作，以至于皺紋盤鮑的養殖業因遺傳背景不清晰和野生種質資源的衰退，而受到了一定程度的影響。

發明內容
本發明是為了解決現有技術所存在的上述技術問題，提供一種可分析皺紋盤鮑野生群體的遺傳多樣性，鑒定養殖群體之間的親緣關系的皺紋盤鮑微衛星分子標記及制備方法。本發明的技術技術解決方案是:一種皺紋盤鮑微衛星分子標記，其特征在于:所述微衛星分子標記的標號分別為Hdl、Hd2、Hd3、Hd4、Hd5、Hd6、Hd7、Hd8、Hd9、HdlO ;各標號微衛星DNA分子標記的核苷酸序列分別為:
Hdl:
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一種上述皺紋盤鮑微衛星分子標記的制備方法，包括微衛星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟，其特征在于:所述微衛星引物的設計及PCR擴增按下表進行:
權利要求
1.一種皺紋盤鮑微衛星分子標記，其特征在于:所述微衛星分子標記的標號分別為Hdl、Hd2、Hd3、Hd4、Hd5、Hd6、Hd7、Hd8、Hd9、Hdl0 ;各標號微衛星DNA分子標記的核苷酸序列分別為: Hdl:ATACATCATATATATGCATCATTCAGTATGAAAGTCGAGTGTGTGTATATCGGACACGTTACATACATCATTCAGAATGAAAGGCGAGTGTGTGTATATGGGAAATGTATCATACATCATTCAGAATGAAAGACGATTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGAGTGTTTGTTTTGTGTGGTGTGTGATATTTGACATATTTTATGTGATATGTGCCATTATATTTCACATATGTAAGATATGTCATGTAATATGTGTCATGCGTCACGAGTCATGTAATATTGGAAATGTGACATGAGCCGTGTGATATGTGTCATCTAATATGTAATATGTGCGATGTGATATATGATATGTGTTGTGTGATGTGTCATATGATATGTGTGTGATGTGTATTGTGTTTTTTTGTCATAGTTCATGCGATATTTTATGTTTGCAATTCATCAAGTGCAATGTGATATGTGTCATGTGTCATGCTATTTGTATAATGTGATAAACGACGGGTAATAGGTGATATATATGTGTAATGTGATATGTGACATGTGACATGTGATATATGTCATGAGACGTTTTATGCGCCAAG Hd2:GGCCTATATTGGATGATTCATAGGTTTGATTACTGGTTGGGTTTTTGGGTTGTGCTTGCTTGGGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTAATGTCTGTAGGGGTGGGGGTGTCTGGTGTTGATGATATCTGTCTGCGTCTTCTCTGACTTTCTGAATGGACAGGAGTGTGCCTGTGCGGGCCTGTGTGTGTTGTGACCGTTCTTCTGTGTGTGAGTGTGTGTGTGGGAGGGTGTGATATATTTATGTGTGGAATGAAGGATAGAATGAGTGAGGGTGAGTGCTTGTGTTGTGATGTGAAATGAGTCTTCCTGTGTAGGTACATATGAGGAGGTTGACTGCTTGTGTTGTGTTG Hd3:CACCTAACGCTGTAGAGTCCGATCTTCACACACAAAGGCTGGACTGTGTGTCTTCACAATTGCACATAAATTCTGGAAAGTCACATCTACACACACACACACTGACACGCCCGGGGTGATCATCACCTTCACCACCTCCACATCCACGCCTTGCCACACCTGCCCACTTAAAAGGACCGGTCCCTATAATGCGGGTGTTCTAATTTCAACTACCGTAGAATGTCGATATGCATTTCGCHd4: TGGATTGTGTGTCGTTTGTGTTCCATTTCTGTTATGGATTATTTGTCGTTTGTGTTGCATTACATAGATCGTATGTTGTTTGTGTTGCATTACTTGGATTGTTTGTTGTTTGTGTTCCTTTACAATAATGGATTGTATGTCGTTTGTGTTGCATTACTGTCATGGATTGTATGTCGTTTGTGTTGCATTACTTAGATTGTATGTCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTAGCAGAATGTAAGATGGTATGTATTHd5:GTAGATTGTGTAATGTGTAAAGTAGATTGTGTAATGTGTAAAATAGATTGTGTAATGTGTTATGCTATTGATGATGAGTCCTGAGTAAGTTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGAAATCATATTGTTACAAAATACATTTTCCTGTTTTCAACAGATATATAGCTCCTTCGTGATTTTTCTTTAGACAGGCTGTGATATGAATTTCTGAAATGCAGTAHd6:GTATGCAATGTCATCTTGCAAGTAAGAATCCAGAGAATTTGCTTAGCTGTGTGTCCACATCTCTCTGTATGTATTGTGTGTGCAACTTCTGAGTGTCCACATCTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTACGTATGTATAAACAAGTAAACCTTTGAGGTGTATATGCGAGGCACAATAACTGTATTTGTGTCGCCATAATGCCTACGACGTATATATGCATACATCTATATGAGTACGGATTATTTCAGGAAACATGATATTTGAACTATGATGAATAAACGCAGCTGTTGTTCACTCGTGATTCATTCCATGTATGATCAAACATGTCAGATGACATATAAATTCACGTTTCCTACCTGTGGAGCAGTTGTCTCCCACCCAGCCTGGGCGGCAGTCACCAGGACACACCCCTGTCACGTGGTCGCATGTTGAATTCAGACAGTGACAGAACTCGCTGCAATTTGGGCCGAAAGTCCCATTTGAACATACTGTGATGGAAAATAAAATATGGTATTACAATGCAGTACACATTGGTTTCAAATGAAAATGACATCAGTTCACAGTTATCAATCACTCTTGCTTTTGACTTCCTAGGATHd7:TGATGATGAGTCCTGAGTAAGTGGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTATGTTGAAGAATGCCTCTGTACAGTGTGTGTGTGTGTGTAAGTTGTGTGTAACTTGAAGTCATTGTACTGGAACAGCATGTGACATCTCAACAAACCAGTTTCCTCATTTTCTTCGTCTTCTGTCTACCCAAGTCTACCATGGATTTGTTTGTTTGTTTGATGTHd8:CGCTTATTGAATAATATAAGTAGTTGTCAGCAGGACTCTGGGACCGCTCCTGGCTTCTGATTGGCCTAGAGGATCACGTGACCTCTGTGACGTTATTTTTTAGATAGACGGTCGTCTGAATGCTAAAGGTGGACCTTCATAGGTAGGCATGAACGTGATGTGATGTACGTGATGTACGTTGTGTCACCCCCATGCAAATCGGGATGTCATGTGTGTGTGTGTCTTCAAACAGACGTTGACGTTGATCAATAGAATTGTTATGCCATGCCTACGTGATGTACGTCATGTTGACAGACACACGTGGTGTTTCACGCGTGTCTTTGTGCAAAACGTGGTGTCATGTGTGTGTGTGTGTGTGTGACTACAAACATTTATTTATTATTTACAGAAAGAAAGATCGATACACATACGTGACGTTTGCACACGTGATGTACTTCGTGTCGCGATGCGAACGTAGTGTTTCATCCGTGTCHd9:TGTGGGGTGAGTGTGTGTGTGTGTGGGTATATGTGACGTAAAAGAAGTGTCCTTCTGTGTGTGTGTCTGTGCGTGTGCGTGTGTGTGAGTGTGAGTGTGTGTGTGTGTTGTGCATGTCCTCTCCACCGCCTACCTTAGATTATTGTACATTCTAAGACAATTCAGTCTACTCAACGTTGGATTGTCGGTGGAAATCTAGTTGTTTGGTTTGTCATCACAAGTCGATGGGGATTACCTTTATAATTGTHdlO:TATAGTTCTACCTGAATTTATATATATATATATATATGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTATGAGAGTGCTTGTGGCGTCCCTGTGTGAAAGCGTGTAAATGGTGTTTGTATGAGAAGTGTGAATGGCTGTTGTTTTTATGATAAAAAAAAGGGGACTCCATCATGTAATACATATATATTATGTA 。
2.一種如權利要求1所述皺紋盤鮑微衛星分子標記的制備方法，包括微衛星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟，其特征在于:所述微衛星引物的設計及PCR擴增按下表進行:
全文摘要
本發明公開一種可分析皺紋盤鮑野生群體的遺傳多樣性，鑒定養殖群體之間的親緣關系的皺紋盤鮑微衛星分子標記及制備方法，通過皺紋盤鮑微衛星(AC)n文庫的構建，微衛星序列陽性克隆的篩選、微衛星引物的設計、PCR擴增及篩選等步驟，得到了10個高度多態的微衛星分子標記Hd1、Hd2、Hd3、Hd4、Hd5、Hd6、Hd7、Hd8、Hd9、Hd10，通過多態性檢測證實，本發明的微衛星分子標記有重復性好的特點，是一種有效可靠的分子標記，可以建立皺紋盤鮑微衛星DNA標記技術體系，用于皺紋盤鮑的遺傳多樣性評估、遺傳結構分析以及鑒定養殖群體之間的親緣關系等。
文檔編號C12Q1/68GK103103182SQ20131002436
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月23日 優先權日2013年1月23日
發明者劉小林, 李楊, 劉明泰, 李丹, 許淑芬, 李旭光, 張艷 申請人:大連海寶漁業有限公司