一種對大腸桿菌進行轉化的方法
【專利摘要】本發明公開了一種對大腸桿菌進行轉化的方法。步驟如下：首先去需要進行轉化的大腸桿菌的感受態細胞，其之前需要冷藏在溫度不高于零下70度的冰箱中，且時間不少于24小時；去除后將其在冰上融化；然后將ＤＮＡ連接物加入細胞中，混合均勻后放置在溫度為零下2－零下4攝氏度的冰箱中至少十分鐘；其后進行雙酶切；復蘇后將帶有轉化子細胞的菌液離心分離；用移液器進行重懸；至于烤箱中培養１０小時即可，復蘇錢需要將其放在35攝氏度的環境下進行預熱于，雙酶切的時候，回收片段需要提取質粒。本發明的有益效果是，成本低，對環境污染小，可以作為大量制備GK8的途徑。
【專利說明】一種對大腸桿菌進行轉化的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種實驗方法，具體來說，一種對大腸桿菌進行轉化的方法。
【背景技術】
[0002]腸埃希氏菌(E.coli)通常稱為大腸桿菌,是Escherich在1885年發現的,在相當長的一段時間內，一直被當作正常腸道菌群的組成部分，認為是非致病菌。直到20世紀中葉，才認識到一些特殊血清型的大腸桿菌對人和動物有病原性，尤其對嬰兒和幼畜(禽)，常引起嚴重腹瀉和敗血癥，它是一種普通的原核生物，根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為5類:致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、腸出血性大腸桿菌(EHEC)、腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。大腸桿菌屬于細菌。大腸桿菌是與我們日常生活關系非常密切的一類細菌，學名稱作“大腸埃希菌”，屬于腸道桿菌大類中的一種。它是寄生在人體大腸里對人體無害的一種單細胞生物，結構簡單，繁殖迅速，培養容易，它是生物學上重要的實驗材料。在嬰兒剛出生的幾小時內，大腸桿菌就經過吞咽在腸道內定居了。正常情況下，大多數大腸桿菌是非常安分守己的，他們不但不會給我們的身體健康帶來任何危害，反而還能競爭性抵御致病菌的進攻，同時還能幫助合成維生素K2，與人體是互利共生的關系。只有在機體免疫力降低、腸道長期缺乏刺激等特殊情況下，這些平日里的良民才會興風作浪，移居到腸道以外的地方，例如膽囊、尿道、膀胱、闌尾等地，造成相應部位的感染或全身播散性感染。因此，大部分大腸桿菌通常被看作機會致病菌。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種對大腸桿菌進行轉化的方法，步驟如下:首先去需要進行轉化的大腸桿菌的感受態細胞，其之前需要冷藏在溫度不高于零下70度的冰箱中，且時間不少于24小時；去除后將其在冰上融化；然后將D N A連接物加入細胞中，混合均勻后放置在溫度為零下2 —零下4攝氏度的冰箱中至少十分鐘；其后進行雙酶切；復蘇后將帶有轉化子細胞的菌液離心分離；用移液器進行重懸；至于烤箱中培養I O小時即可。
[0004]本發明中，復蘇錢需要將其放在3 5攝氏度的環境下進行預熱。
[0005]本發明中，雙酶切的時候，回收片段需要提取質粒。
[0006]本發明的有益效果是，成本低，對環境污染小，可以作為大量制備GK8的途徑。【具體實施方式】
[0007]—種對大腸桿菌進行轉化的方法，步驟如下:首先去需要進行轉化的大腸桿菌的感受態細胞，其之前需要冷藏在溫度不高于零下70度的冰箱中，且時間不少于24小時；去除后將其在冰上融化；然后將D N A連接物加入細胞中，混合均勻后放置在溫度為零下
2一零下4攝氏度的冰箱中至少十分鐘；其后進行雙酶切；復蘇后將帶有轉化子細胞的菌液離心分離；用移液器進行重懸；至于烤箱中培養I O小時即可。復蘇錢需要將其放在3 5攝氏度的環境下進行預熱；回收片段需要提取質粒。 [0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此， 任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種對大腸桿菌進行轉化的方法，其特征在于，步驟如下:首先去需要進行轉化的大腸桿菌的感受態細胞，其之前需要冷藏在溫度不高于零下70度的冰箱中，且時間不少于24小時；去除后將其在冰上融化；然后將D N A連接物加入細胞中，混合均勾后放直在溫度為零下2 —零下4攝氏度的冰箱中至少十分鐘；其后進行雙酶切；復蘇后將帶有轉化子細胞的菌液離心分離；用移液器進行重懸；至于烤箱中培養I O小時即可。
2.如權利要求1所述的一種對大腸桿菌進行轉化的方法，其特征在于，復蘇錢需要將其放在3 5攝氏度的環境下進行預熱。
3.如權利要求1所述的一種對大腸桿菌進行轉化的方法，其特征在于，雙酶切的時候，回收片段需要提取質粒。
【文檔編號】C12R1/19GK103602701SQ201310525823
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】徐麗 申請人:徐麗