大麗輪枝菌培養(yǎng)基及其制備方法和培養(yǎng)大麗輪枝菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基，該大麗輪枝菌培養(yǎng)基含有1-3g/L的NaNO3、0.3-0.7g/L的KCl、0.5-2g/L的K2HPO4、0.005-0.015g/L的FeSO4、0.3-0.7g/L的MgSO4和5-15g/L的棉花組織粉末。本發(fā)明還提供了一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基的制備方法和一種培養(yǎng)大麗輪枝菌的方法。本發(fā)明能夠將大麗輪枝菌的產孢子量提高5倍以上。
【專利說明】大麗輪枝菌培養(yǎng)基及其制備方法和培養(yǎng)大麗輪枝菌的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及農業(yè)生物【技術領域】，具體地，涉及一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基，一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基的制備方法和一種培養(yǎng)大麗輪枝菌的方法。
【背景技術】
[0002]大麗輪枝菌(Verticillium dahlia),屬于半知菌亞門輪枝菌屬真菌。大麗輪枝菌的寄主范圍極廣，可為害38科660種植物，其中農作物184種，雜草153種。在中國，大麗輪枝菌的寄主植物至少涉及20科80種，例如向日葵、爺子、辣子、番茄、煙草、馬鈴薯、甜瓜、西瓜、黃瓜、花生、菜豆、綠豆、大豆、棉花、芝麻、甜菜等大田作物。其中，大麗輪枝菌能夠引發(fā)棉花的黃萎病，因此研究大麗輪枝菌的生物學特征具有重大意義。
[0003]在大麗輪枝菌的研究過程中，經(jīng)常需要大量使用大麗輪枝菌的孢子，但是，目前用于培養(yǎng)大麗輪枝菌的培養(yǎng)基(例如查比克培養(yǎng)基)在培養(yǎng)大麗輪枝菌時，產孢子量仍然較低。

【發(fā)明內容】

[0004]針對上述存在的問題和解決方法的不足，本發(fā)明將研發(fā)一種新的大麗輪枝菌培養(yǎng)基，并將其用于培養(yǎng)大麗輪枝菌，以實現(xiàn)提高大麗輪枝菌產孢子量的目的。
[0005]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基，該大麗輪枝菌培養(yǎng)基含有 l-3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KCl、0.5_2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeSO4'0.3-0.7g/L的MgSO4和5-15g/L的棉花組織粉末。
[0006]另一方面，本發(fā)明還提供了一種大I?輪枝菌培養(yǎng)基的制備方法，該方法包括:(1)將棉花組織用液氮速凍并經(jīng)過破碎和干燥，得到棉花組織粉末；(2)將所述棉花組織粉末與NANO3、KC1、K2HPO4、FESO4和MGSO4混合并配制為含有 l-3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KC1、0.5-2g/L 的 K2HP04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的 MgSO4 和 5-15g/L 的棉花組織粉末的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
[0007]再一方面，本發(fā)明還提供了一種培養(yǎng)大麗輪枝菌的方法，該方法包括:將大麗輪枝菌菌種接種到如上所述的大麗輪枝菌培養(yǎng)基中，并且進行孵育。
[0008]通過上述技術方案，本發(fā)明能夠將大麗輪枝菌的產孢子量提高5倍以上。
[0009]本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
【具體實施方式】
[0010]以下對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的【具體實施方式】僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0011]本發(fā)明提供了一種大I?輪枝菌培養(yǎng)基，其中，該大I?輪枝菌培養(yǎng)基含有l(wèi)-3g/L的NaN03、0.3-0.7g/L 的 KC1、0.5-2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的MgSO4和5-15g/L的棉花組織粉末。[0012]其中，為了進一步提高大麗輪枝菌的產孢子量，優(yōu)選情況下，該大麗輪枝菌培養(yǎng)基含有 1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L 的 KCl、0.8-1.2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的FeS04、0.4-0.6g/L 的 MgSO4 和 8_12g/L 的棉花組織粉末。
[0013]其中，所述棉花組織粉末可以來源于棉花植株的各個組成部分，包括但不限于根、莖、葉、花、果；為了進一步提高大麗輪枝菌的產孢子量，優(yōu)選情況下，所述棉花組織粉末是由棉花植株的根和/或莖形成的粉末。
[0014]其中，所述棉花植株可以為任意周齡的棉苗，優(yōu)選是4-6周齡的棉苗。
[0015]本發(fā)明還提供了一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基的制備方法，其中，該方法包括:(I)將棉花組織用液氮速凍并經(jīng)過破碎和干燥，得到棉花組織粉末；(2)將所述棉花組織粉末與NaN03、KCUK2HPO4, FeSO4 和 MgSO4 混合并配制為含有 l_3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KCl、0.5-2g/L 的 K2HP04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的 MgSO4 和 5_15g/L 的棉花組織粉末的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。 [0016]其中，為了進一步提高大麗輪枝菌的產孢子量，優(yōu)選情況下，將所述棉花組織粉末與 NaN03、KCl、K2HPO4, FeSO4 和 MgSO4 混合并配置為含有 1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L的 KCl、0.8-1.2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的 FeS04、0.4-0.6g/L 的 MgSO4 和 8_12g/L 的棉花組織粉末。
[0017]其中，所述棉花組織粉末可以來源于棉花植株的各個組成部分，包括但不限于根、莖、葉、花、果；為了進一步提高大麗輪枝菌的產孢子量，優(yōu)選情況下，棉花組織粉末是由棉花植株的根和/或莖形成的粉末。
[0018]其中，所述棉花植株可以為任意周齡的棉苗，優(yōu)選是4-6周齡的棉苗。
[0019]本發(fā)明還提供了一種培養(yǎng)大麗輪枝菌的方法，其中，該方法包括:將大麗輪枝菌菌種接種到如上所述的大麗輪枝菌培養(yǎng)基中，并且進行孵育。
[0020]其中，接種的條件可以包括:相對于每升的大麗輪枝菌培養(yǎng)基，大麗輪枝菌菌種的接種量為1-5X IO6Cfu ;所述孵育的溫度為25-28°C。
[0021]本文中液體的體積為20°C下的體積。
[0022]以下通過實施例進一步詳細說明本發(fā)明:
[0023]制備實施例1
[0024]將棉籽(合豐202，購自石家莊市萬豐種業(yè)有限公司)種于商品蛭石和營養(yǎng)土 (購自北京繁星花卉有限公司)，溫室培養(yǎng)(光周期14h，溫度25°C，相對濕度85%)4-6周，得到4_6周齡的棉苗。
[0025]將上述得到的4-6周齡的棉苗清洗干凈，取棉花植株的根和莖，剪碎，放入液氮中速凍并破碎為粉末，然后干燥，得到棉花組織粉末，備用。
[0026]實施例1
[0027]將2g 的 NaN03、0.5g 的 KClUg 的 K2HP04、0.01g 的 FeS04、0.5g 的 MgSO4 和 IOg 的制備實施例1的棉花組織粉末混合，并加水至1L，滅菌后得到本實施例的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
[0028]實施例2
[0029]將1.5g 的 NaN03、0.6g 的 KCl、0.8g 的 Κ2ΗΡ04、0.012g 的 FeS04、0.4g 的 MgSO4 和12g的制備實施例1的棉花組織粉末混合，并加水至1L，滅菌后得到本實施例的大麗輪枝菌
培養(yǎng)基。[0030]實施例3
[0031]將2.5g 的 NaNO3、0.4g 的 KCl、1.2g 的 K2HPO4、0.008g 的 FeSO4、0.6g 的 MgSO4 和 8g的制備實施例1的棉花組織粉末混合，并加水至1L，滅菌后得到本實施例的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
[0032]實施例4
[0033]將Ig 的 NaN03、0.7g 的 KCl、0.5g 的 Κ2ΗΡ04、0.015g 的 FeS04、0.3g 的 MgSO4 和 5g的制備實施例1的棉花組織粉末混合，并加水至1L，滅菌后得到本實施例的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
[0034]實施例5
[0035]將3g 的 NaN03、0.3g 的 KCl、2g 的 K2HP04、0.005g 的 FeS04、0.7g 的 MgSO4 和 15g 的制備實施例1的棉花組織粉末混合，并加水至1L，滅菌后得到本實施例的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
[0036]制備實施例2 [0037]將棉籽(合豐202，購自石家莊市萬豐種業(yè)有限公司)種于商品蛭石和營養(yǎng)土 (購自北京繁星花卉有限公司)，溫室培養(yǎng)(光周期14h，溫度25°C，相對濕度85%)4-6周，得到4_6周齡的棉苗。
[0038]將上述得到的4-6周齡的棉苗清洗干凈，取棉花植株的葉，剪碎，放入液氮中速凍并破碎為粉末，然后干燥備用。
[0039]實施例6
[0040]將2g 的 NaN03、0.5g 的 KClUg 的 K2HP04、0.01g 的 FeS04、0.5g 的 MgSO4 和 IOg 的制備實施例2的棉花組織粉末混合，并加水至1L，滅菌后得到本實施例的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
[0041]對比例I
[0042]制備查比克培養(yǎng)基，即2g NaNO3,0.5g 的 KClUg 的 K2HP04、0.018g 的 FeS04、0.5g的MgSO4和30g的蔗糖混合并加水至1L，滅菌后得到本實施例的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
[0043]測試實施例1
[0044]將大麗輪枝菌菌種(Verticillium dahliae,中國農業(yè)科學院植物保護研究所簡桂良研究員惠贈)分別接種在實施例1-6和對比例I的大麗輪枝菌培養(yǎng)基中，相對于每升的大麗輪枝菌培養(yǎng)基，大麗輪枝菌菌種的接種量為IX IO6Cfu,在28°C下孵育5天，血球計數(shù)板法統(tǒng)計孢子數(shù)量，結果顯示不同處理之間孢子形態(tài)完全一致，但孢子數(shù)量具有明顯差異，具體如表1所示。
[0045]表1
[0046]
【權利要求】
1.一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基，其特征在于，該大麗輪枝菌培養(yǎng)基含有l(wèi)-3g/L的NaN03、0.3-0.7g/L 的 KCl、0.5-2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的 MgSO4 和5-15g/L的棉花組織粉末。
2.根據(jù)權利要求1所述的大麗輪枝菌培養(yǎng)基，其中，該大麗輪枝菌培養(yǎng)基含有1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L 的 KCl、0.8-1.2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的 FeSO4'0.4-0.6g/L的MgSO4和8-12g/L的棉花組織粉末。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的大麗輪枝菌培養(yǎng)基，其中，所述棉花組織粉末是由棉花植株的根和/或莖形成的粉末。
4.根據(jù)權利要求3所述的大麗輪枝菌培養(yǎng)基，其中，所述棉花植株是4-6周齡的棉苗。
5.一種大麗輪枝菌培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，該方法包括: (1)將棉花組織用液氮速凍并經(jīng)過破碎和干燥，得到棉花組織粉末； (2)將所述棉花組織粉末與NaNO3、KCl、K2HP04、FeSO4和MgSO4混合并配制為含有l(wèi)_3g/L 的 NaN03、0.3-0.7g/L 的 KC1、0.5_2g/L 的 Κ2ΗΡ04、0.005-0.015g/L 的 FeS04、0.3-0.7g/L 的MgSO4和5-15g/L的棉花組織粉末的大麗輪枝菌培養(yǎng)基。
6.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其中，將所述棉花組織粉末與NaN03、KCl、K2HPO4,FeSO4 和 MgSO4 混合并 配置為含有 1.5-2.5g/L 的 NaN03、0.4-0.6g/L 的 KCl、0.8-1.2g/L 的Κ2ΗΡ04、0.008-0.012g/L 的 FeS04、0.4-0.6g/L 的 MgSO4 和 8_12g/L 的棉花組織粉末。
7.根據(jù)權利要求5或6所述的制備方法，其中，棉花組織粉末是由棉花植株的根和/或莖形成的粉末。
8.根據(jù)權利要求7所述的制備方法，其中，所述棉花植株是4-6周齡的棉苗。
9.一種培養(yǎng)大麗輪枝菌的方法，其特征在于，該方法包括:將大麗輪枝菌菌種接種到權利要求1-4中任意一項所述的大麗輪枝菌培養(yǎng)基中，并且進行孵育。
10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其中，接種的條件包括:相對于每升的大麗輪枝菌培養(yǎng)基，大麗輪枝菌菌種的接種量為1-5X IO6Cfu ;所述孵育的溫度為25-28°C。
【文檔編號】C12R1/645GK103602598SQ201310587450
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權日:2013年11月20日
【發(fā)明者】戴小楓, 肖紅利, 李蕾, 陳捷胤, 祁偉彥, 孔志強 申請人:中國農業(yè)科學院農產品加工研究所