本發明屬于天然活性成分分離技術領域，具體涉及一種靈芝全活性物質的制備與應用。
背景技術：
隨著生活水平的提高和生活節奏的改變，被稱為“富貴病”的“三高癥”發病率越來越高，尤其高發于50歲以上的中老年人。高血脂可以引起血管栓塞；高血壓可以引起腦出血和腦血管破裂；高血糖可以引起糖尿病。全世界每年死于心腦血管疾病的人數高達1500萬人，居各種死因首位。但目前臨床上常用的口服降血糖血脂藥均有副作用，可引起消化系統的不良反應，有些還會引起麻疹、貧血、白細胞和血小板減少、頭暈和乏力等。因此尋找開發具有增強機體免疫力作用的保健食品，以輔助藥物治療，在有效的控制血糖和血脂的同時降低副作用已引起人們的關注。
靈芝，別名“紅芝”、“丹芝”、“赤芝”和“仙草”等，屬于單子菌綱，是我國一種著名的藥食兼用的真菌，已有兩千多年的歷史記載，被稱為“不朽的蘑菇”。在秦漢時期或者更早的《神農百草經》、陶弘景的《名醫別錄》、唐朝蘇敬的《新修本草》和明朝李時珍的《本草綱目》等古典書籍上都記載了靈芝的藥用價值。
靈芝藥用價值在國內外近年來不斷地更新，其含有的生物活性物質如多糖、氨基酸多肽、天然有機鍺和三萜類化合物等，均對維護人體健康有重要的利用價值。已知靈芝的藥用保健價值有：①抗癌作用：靈芝的多糖體能刺激抗體的形成，提高并調整機體內部的防御能力，降低某些物質誘發腫瘤的發生率，并對多種化療藥物有增效作用；②抗菌、抗病毒作用；③降血壓、降血脂等；④增強免疫作用；⑤降血糖。
雖然靈芝有顯著并且明確的降血脂降血壓，以及抗癌、保肝健胃等功效，但目前在高效制備靈芝活性成分的技術上，往往存在活性物質制備不完全、制作工藝繁瑣、利用率低等問題。針對這些問題，本發明提供了一種采用極性從小到大的溶劑提取制備靈芝活性物質的方法，而目前尚未見此類報道，且此方法對促進靈芝產品大規模工業化生產具有良好的應用前景。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種靈芝全活性物質的制備方法及其應用，其可解決目前存在的活性物質制備不完全、制作工藝繁瑣、利用率低等問題，對促進靈芝產品大規模工業化生產具有良好的應用前景。
為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
一種靈芝全活性物質的制備，其是以靈芝為原料，將其粉碎后采用極性從小到大的乙醇溶液及水進行分步提取，再經復合蛋白酶酶解，分別得到靈芝85wt%-95wt%醇提物、靈芝55wt%-65wt%醇提物、靈芝水提取物及酶解物，即獲得靈芝全活性物質；
其制備方法包括如下步驟：
1）將靈芝用粉碎機磨成細粉備用；
2）將所得靈芝細粉用85wt%-95wt%的乙醇溶液為溶劑，于45-80℃條件下超聲-微波協同萃取或超聲輔助提取1-3次，每次0.5-4h，然后過濾，獲得靈芝85wt%-95wt%醇提液；
3）將步驟2）中剩余的濾渣用55wt%-65wt%的乙醇溶液為溶劑，于45-80℃條件下超聲-微波協同萃取或超聲輔助提取1-3次，每次0.5-3h，然后過濾，獲得靈芝55wt%-65wt%醇提液；
4）再將步驟3）剩余的濾渣用去離子水為溶劑，于60-90℃條件下超聲-微波協同萃取或超聲輔助提取1-3次，每次0.5-3h，然后過濾，獲得靈芝水提液；
5）將步驟4）水提剩余物在45-50℃條件下，用靈芝細粉重量0.2-2%的復合蛋白酶酶解0.5-3h，然后過濾，以獲得靈芝的酶解產物；
6）將步驟2）~5）所得產物經減壓濃縮、冷凍干燥后，即分別制得靈芝85wt%-95wt%醇提物、靈芝55wt%-65wt%醇提物、靈芝水提物以及酶解物。
步驟2）~4）的提取過程中溶劑與物料的比例為1:10-1:30 g/mL。
本發明所得靈芝全活性物質具有極顯著降低血清中總膽固醇(TC)以及甘油三酯（TG）的作用，可根據中醫“君臣佐使”理論以及現代營養學理論，將其中的一種或幾種與其他具有相同功效的藥食同源活性成分復配，以制備具有增強免疫力、調節血糖、血脂、血壓及保肝等功效的功能性食品。
本發明的有益之處在于：
（1）本發明利用極性從小到大的溶劑分步提取靈芝活性物質，再經過濾、濃縮、冷凍干燥，分別制備靈芝85wt%-95wt%醇提物、靈芝55wt%-65wt%醇提物、靈芝水提物以及酶解物，可實現靈芝活性物質的全面提取，簡化提取步驟，方便工業化生產。
（2）根據中醫的“君臣佐使”以及現代營養學理論，將本發明所得靈芝全活性物質中的一種或幾種與其他具有相同功效的藥食同源活性成分復配，制備的功能性食品長期食用可起到增強免疫力、調節血糖、血脂、血壓等功效。
附圖說明
圖1為所得不同靈芝活性物質對高脂模型大鼠血脂水平的影響情況圖，其中A為甘油三酯、B為總膽固醇、C為高密度脂蛋白、D為低密度脂蛋白（注：NFD：空白組；-：模型組；GL95：靈芝95%醇提物；GL55%：靈芝55%醇提物；GLWE：靈芝水提物；GLEM：靈芝酶解物；GLMX；陽性對照組（水飛激素）；*：與模型組比較P<0.05；**：與模型組比較P<0.01；#：與空白組比較P<0.05；##：與空白組比較P<0.01）。
具體實施方式
一種靈芝全活性物質，其制備方法包括如下步驟：
1）將靈芝用粉碎機磨成細粉備用；
2）按料液比1:10 g/mL將所得靈芝細粉用95wt%的乙醇溶液為溶劑，于45℃條件下超聲-微波協同萃取或超聲輔助提取3次，每次0.5h，然后過濾，獲得靈芝95wt%醇提液；
3）按料液比1:10 g/mL將步驟2）中剩余的濾渣用55wt%的乙醇溶液為溶劑，于45℃條件下超聲-微波協同萃取或超聲輔助提取3次，每次0.5h，然后過濾，獲得靈芝55wt%醇提液；
4）按料液比1:10 g/mL將步驟3）剩余的濾渣用去離子水為溶劑，于60℃條件下超聲-微波協同萃取或超聲輔助提取3次，每次0.5h，然后過濾，獲得靈芝水提液；
5）將步驟4）水提剩余物在45℃條件下，用靈芝細粉重量0.2-2%的復合蛋白酶酶解3h，然后過濾，獲得靈芝的酶解產物；
6）將步驟2）~5）所得產物經減壓濃縮、冷凍干燥后分別制得靈芝95wt%醇提取、靈芝55wt%醇提物、靈芝水提物以及酶解物，即獲得靈芝全活性物質。
圖1為所得不同靈芝活性物質對高脂肪飼料喂養的Wistar大鼠血脂水平的影響情況圖，其中A為甘油三酯、B為總膽固醇、C為高密度脂蛋白、D為低密度脂蛋白。由圖1可見，所得靈芝活性物質（GL95、GL55、GLWE、GLEM）均具有極顯著降低血清中總膽固醇（TC）以及甘油三酯（TG）、提高高密度脂蛋白（HDL）的作用。
為了使本發明所述的內容更加便于理解，下面結合具體實施方式對本發明所述的技術方案做進一步的說明，但是本發明不僅限于此。
實施案例1 一種調節血糖血脂的靈芝保健膠囊
1）將靈芝用粉碎機磨成細粉，按料液比1:20 g/mL加入95wt%的乙醇溶液，于60℃條件下超聲輔助提取4h，然后過濾，獲得靈芝95wt%醇提液；
2）按料液比1:20 g/mL，將步驟1）中剩余的濾渣用55wt%的乙醇溶液，于60℃條件下超聲輔助提取3h，然后過濾，獲得靈芝55wt%醇提液；
3）將茶樹菇、海帶分別加入其重量10倍的蒸餾水，浸泡2h后，武火煮沸1.5h，過濾；濾渣再加入其重量8倍的蒸餾水，武火煮1.5h，過濾；所得濾渣再次加入其重量4倍的蒸餾水，文火煮沸2 h，過濾；合并3次濾液，即分別得到茶樹菇水提物及海帶水提物；
4）將所得靈芝95wt%醇提液4重量份、靈芝55wt%醇提液8重量份與海帶水提物8重量份，茶樹菇水提物重量6份充分混合后，采用噴霧干燥器干燥，并將其裝入膠囊中，制成具有降血糖、降血脂功效的靈芝保健膠囊。
實施案例2 一種調節血糖血脂的靈芝保健沖劑
1）將靈芝用粉碎機磨成細粉，按料液比1:30 g/mL加入95wt%的乙醇溶液，于80℃條件下超聲-微波協同萃取2次，每次1h，然后過濾，獲得靈芝95wt%醇提液；
2）按料液比1:30 g/mL，將步驟1）中剩余的濾渣用60wt%的乙醇溶液，于80℃條件下超聲-微波協同萃取2次，每次1h，然后過濾，獲得靈芝60wt%醇提液；
3）按料液比1:30 g/mL，將步驟2）剩余的濾渣用去離子水為溶劑，于90℃條件下超聲-微波協同萃取2次，每次1h，然后過濾，獲得靈芝水提液；
4）將步驟3）水提剩余物在50℃條件下，用靈芝細粉重量0.2%的復合蛋白酶酶解0.5h，然后過濾，以獲得靈芝的酶解產物；
5）將所得靈芝95wt%醇提液5重量份、靈芝60wt%醇提液8重量份、靈芝水提取液10重量份以及酶解產物12重量份充分混合，用噴霧干燥器干燥，得到其混合物干粉，將其裝入無菌罐中保存，制成具有降血糖、降血脂功效的靈芝保健沖劑。
以上所述僅為本發明的較佳實施例，凡依本發明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應屬本發明的涵蓋范圍。