本發(fā)明涉及一種天然組合物，特別是涉及一種具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)、改善腸道健康的天然組合物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人體內(nèi)共生著大量的微生物，尤其是腸道微生物是人體最重要的“內(nèi)生環(huán)境因素”，擁有100余菌屬，400余菌種，其數(shù)目是人體自身細(xì)胞的10倍左右。這些微生物的基因組總和被稱作“微生物組”或者“人體元基因組”，也被譽(yù)為人體的第二個(gè)基因組。最新的研究認(rèn)為人體是由宿主細(xì)胞和共生微生物細(xì)胞，尤其是共生腸道菌群，共同構(gòu)成的“超級生物體”，人的健康狀況發(fā)生變化，體內(nèi)的共生微生物的組成就會發(fā)生變化；體內(nèi)共生微生物的組成的變化也會導(dǎo)致人體的健康狀況的改變。人的基因組與人體內(nèi)的微生物基因組共同決定人體的免疫、營養(yǎng)和代謝，乃至疾病和健康等過程。
雙歧桿菌與乳桿菌是人腸道中益生菌的代表，有益菌在腸道內(nèi)可以利用人體的代謝廢物進(jìn)行生長繁殖，產(chǎn)生抗生素、部分維生素、有機(jī)酸等有益成分，降低腸道ph，抑制韋永氏球菌、梭菌等腐敗菌的增殖，減少腐敗物質(zhì)產(chǎn)生。有益菌還可以構(gòu)建免疫防御系統(tǒng)，對保證人體健康，預(yù)防疾病具有重要作用。因此，保持腸道有益菌群的數(shù)量是宿主保持健康的關(guān)鍵。
腸桿菌屬于條件致病菌，腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌屬于腸道有害菌，這些菌增多加上人體抵抗力不足會導(dǎo)致惡心、嘔吐、腹瀉等一系列疾病產(chǎn)生。
生活中人們通常是從食品和藥品中獲得益生菌、益生元和合生元，進(jìn)而調(diào)節(jié)腸道菌群，為胃腸道建立一個(gè)良好的微生態(tài)環(huán)境。其中食品以乳制品和保健食品為主，藥品以otc藥品為主。含益生菌的食品包括酸奶、飲料、乳酪等，此外，還有一些食品如香蕉、蜂蜜、燕麥等，這些食品都不含益生菌，但它們含有益生元，如其含有的復(fù)雜的糖類，它能刺激有益菌群的生長，可以讓我們消化道中的優(yōu)質(zhì)益生菌得到養(yǎng)分補(bǔ)給，促進(jìn)腸道健康。合生元更多強(qiáng)調(diào)的是活的有益菌(益生素)與其特異的選擇性底物(益生元)之間的協(xié)作效應(yīng)。益生菌制劑是指含有一定數(shù)量活性益生菌的粉劑、片劑或膠囊等，主要是通過冷凍干燥技術(shù)制成濃縮菌粉和輔料混合制成。
腸道菌群紊亂，中醫(yī)認(rèn)為其病機(jī)主要與脾胃虛弱，脾氣不升，胃氣不降，氣機(jī)逆亂等有關(guān)，以脾為主臟，治療時(shí)應(yīng)注重健脾，且具有較好療效。因此，基于中醫(yī)理論，以中藥味原料開發(fā)具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)保健食品及藥品具有較好的市場前景。目前未見將地黃、茯苓和人參組合使用以改善腸道菌群結(jié)構(gòu)的報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供一種具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)、改善腸道健康，且安全性高、無不良反應(yīng)的組合物。本發(fā)明的另一目的是提供上述組合物的制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
一種具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成：地黃4～20重量份，茯苓1～5重量份，人參0.1～3重量份。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成：地黃5～10重量份，茯苓1.5～3重量份，人參0.5～2重量份。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成：地黃7重量份，茯苓2重量份，人參1重量份或者地黃45重量份；茯苓14重量份；人參6重量份。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，該組合物包括環(huán)烯醚萜苷化合物38-50份、苯乙醇苷化合物12-15份、糠醛衍生物化合物1.0-1.8份、人參皂苷化合物50-62份、寡糖2000-4300份、多糖1600-2000份。作為優(yōu)選方案，組合物中環(huán)烯醚萜苷組合物、苯乙醇苷組合物、糠醛衍生物組合物、人參皂苷組合物、寡糖、多糖的重量比為38-50：12-15：1.0-1.8：50-62：2000-4300：1600-2000。
作為優(yōu)選方案，以上所述的組具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，人參皂苷化合物包括重量比為：10-35：10-20：5-32：4-13：2-6的人參皂苷re、人參皂苷rg1、人參皂苷rb1、人參皂苷ro和人參皂苷20s-rg3。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，寡糖由重量比為：7-13：7-15：0.2-1.4：0.5-4：2-10：1-8：15-32的果糖、蔗糖、麥芽糖、蜜二糖、棉籽糖、甘露三糖和水蘇糖組成。
作為優(yōu)選方案，以上所述的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，多糖由摩爾比約為1-3：4-7：55-78：32-54：3-8：9-20的甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和巖藻糖組成。
本發(fā)明所述的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物的制備方法，包括以下步驟：
按權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的重量份數(shù)，取地黃，茯苓和人參，加入藥材重量5-12倍體積量的水，加熱回流提取1-3次，每次1-4h，過濾，合并濾液，在60℃-80℃下減壓濃縮至熱測相對密度為1.1-1.4kg/l，即得。
作為更加優(yōu)選方案，取地黃，茯苓和人參，加入藥材重量10倍體積量的水，加熱回流提取3次，每次1h，過濾，合并濾液，在80℃下減壓濃縮至熱測相對密度為1.25kg/l，即得。
工藝篩選實(shí)驗(yàn)：
本發(fā)明通過比較長時(shí)間正交試驗(yàn)最優(yōu)的提取工藝和短時(shí)間正交試驗(yàn)最優(yōu)的提取工藝組合物中主要活性成分的總含量，確定最佳工藝，在保證提取組合物有效成分含量的前提下節(jié)約時(shí)間和成本，使其發(fā)揮安全有效的改善腸道菌結(jié)構(gòu)的作用。
改善腸道菌群結(jié)構(gòu)的組合物，是由環(huán)烯醚萜苷組合物、苯乙醇苷組合物、糠醛衍生物組合物、人參皂苷組合物和糖類等成分組成。本發(fā)明以該類別成分和總出膏率作為評價(jià)指標(biāo)，選擇hplc-tq/ms、苯酚-硫酸法等方法，利用正交試驗(yàn)考察加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)三個(gè)因素，以優(yōu)化提取工藝。
長時(shí)間正交試驗(yàn)加水量設(shè)定為：5-12倍量；提取時(shí)間設(shè)定為：3-7h；提取次數(shù)設(shè)定為：1-4次。
短時(shí)間正交工藝加水量設(shè)定為：5-12倍量；提取時(shí)間設(shè)定為：1-4h；提取次數(shù)設(shè)定為：1-4次。
各正交工藝藥材的稱樣量為：地黃14.0g，茯苓4.0g，人參2.0g。
長時(shí)間正交試驗(yàn)具體參數(shù)設(shè)定如表1：
表1長時(shí)間正交試驗(yàn)因素水平表
短時(shí)間正交試驗(yàn)具體參數(shù)設(shè)定如表2：
表2短時(shí)間正交試驗(yàn)因素水平表
參數(shù)設(shè)定為：優(yōu)選hplc-tq-ms方法分別測量各正交工藝中主要活性成分，見表3，主要活性成分包括5-羥甲基糠醛、梓醇、密力特苷、毛蕊花糖苷、人參皂苷re、人參皂苷rb1、人參皂苷20(s)-rg3、人參皂苷rg1、人參皂苷ro和茯苓酸的含量，測量各正交工藝的出膏率和多糖含量，綜合評分分別得到兩組中的最優(yōu)工藝，再將兩者主要活性成分的絕對含量累加，最后得到最優(yōu)工藝。具體結(jié)果見表4至7：
表310種成分質(zhì)譜檢測條件
表4l9(34)長時(shí)間正交實(shí)驗(yàn)提取結(jié)果(n＝2)
注：評分＝測定值/9個(gè)實(shí)驗(yàn)中最大值×100×比值
綜合評分＝出膏率分值×0.2+多糖分值×0.1+5-hmf分值×0.1+梓醇分值×0.1+密力特苷分值×0.1+毛蕊花糖苷分值×0.1+re分值×0.04+rg1分值×0.04+ro分值×0.04+rb1分值×0.04+20s-rg3分值×0.04+茯苓酸分值×0.1
表5方差分析結(jié)果
由表5極差分析可以看出，影響藥材水提取的因素中，重要性依次是c>a>b，a因素中，a2>a1>a3，b因素中，b2>b1>b3，c因素中，c3>c2>c1，最佳組合為a2b2c3。表5分析結(jié)果表明，c因素有顯著性影響，a、b因素均沒有顯著性影響，因此最終確定a2b2c3作為最適宜的提取工藝，即：藥材加8倍量的水、提取3次，每次5小時(shí)。
表6l9(34)短時(shí)間正交實(shí)驗(yàn)提取結(jié)果(n＝2)
注：評分＝測定值/9個(gè)實(shí)驗(yàn)中最大值×100×比值
綜合評分＝出膏率分值×0.2+多糖分值×0.1+5-hmf分值×0.1+梓醇分值×0.1+密力特苷分值×0.1+毛蕊花糖苷分值×0.1+re分值×0.04+rg1分值×0.04+ro分值×0.04+rb1分值×0.04+20s-rg3分值×0.04+茯苓酸分值×0.1
表7方差分析結(jié)果
由表7極差分析可以看出，影響藥材水提取的因素中，重要性依次是c>a>b，a因素中，a3>a2>a1，b因素中，b1>b3>b2，c因素中，c3>c2>c1，最佳組合為a3b1c3。由表7方差分析結(jié)果表明，c因素有顯著性影響，a、b因素均沒有顯著性影響，因此最終確定a3b1c3作為最適宜的提取工藝，即：藥材加10倍量的水、提取3次，每次1小時(shí)。
提取工藝篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
據(jù)以上結(jié)果我們優(yōu)選出長時(shí)間正交實(shí)驗(yàn)提取結(jié)果為：全方藥材加8倍量的水，提取3次，每次5h。短時(shí)間正交實(shí)驗(yàn)提取結(jié)果為：藥材加10倍量的水、提取3次，每次1h。
對比兩個(gè)最優(yōu)工藝，最優(yōu)長時(shí)間正交實(shí)驗(yàn)與最優(yōu)短時(shí)間正交實(shí)驗(yàn)相比各總含量有所降低，考慮到可能是隨著煎煮時(shí)間的增加，各成分有所轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致含量降低，同時(shí)本著節(jié)能增效的原則，最終確定短時(shí)間正交實(shí)驗(yàn)的a3b1c3作為最適宜的提取工藝。
接著又考察了減壓濃縮工藝，以主要活性成分轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，濃縮溫度設(shè)定為60℃-80℃，濃縮至熱測相對密度為1.1-1.4kg/l，比較不同溫度下濃縮前后指標(biāo)性成分的轉(zhuǎn)移率，以確定最適宜的減壓濃縮溫度。
表8不同減壓濃縮溫度下各成分的轉(zhuǎn)移率(mean±sd,n＝3)
由以上結(jié)果可知，減壓濃縮溫度設(shè)定為70-80℃，其轉(zhuǎn)移率相對較高。
本發(fā)明提供的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物在制備調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)失調(diào)相關(guān)疾病中的應(yīng)用，將組合物和食品載體或藥學(xué)上可接受的載體，制成口服液、顆粒劑、糖漿劑、煎膏劑等劑型的保健食品或藥物。
本發(fā)明提供的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物制成口服液時(shí)，把組合物加水溶解后，加入食用防腐劑，充分溶解后，離心除去雜質(zhì)，灌封，即得。
本發(fā)明提供的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物制成顆粒劑時(shí)，把組合物和蔗糖、糊精混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。
本發(fā)明提供的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物制成硬膠囊劑時(shí)，把組合物和玉米淀粉或乳糖混合均勻，經(jīng)整粒，然后裝膠囊制成硬膠囊劑。
本發(fā)明提供的組合物制成其它劑型時(shí)，可按藥學(xué)常規(guī)方法制備得到。
有益效果：本發(fā)明提供的具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)作用的組合物，依據(jù)傳統(tǒng)中藥養(yǎng)生、保健理論和現(xiàn)代藥理研究成果，通過大量實(shí)驗(yàn)篩選得到，以地黃，茯苓和人參中藥為主要原料經(jīng)現(xiàn)代工藝制備而成，并通過大量實(shí)驗(yàn)篩選地黃，茯苓和人參的最佳提取方法，提取得到活性成分含量高的提取物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的組合物可顯著提高腸道的乳桿菌數(shù)量、提高腸道的雙歧桿菌數(shù)量和/或降低腸道的大腸桿菌數(shù)量、降低腸道的腸球菌數(shù)量、降低腸道的產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量等功效，可改善腸道健康，對于便秘、腹瀉等腸道混亂性疾病具有重要的防治功效，取得了非常好的技術(shù)進(jìn)步！
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。
實(shí)施例1
準(zhǔn)確稱取地黃465g，茯苓132g和人參65g，加10倍量的水，浸泡30min，加熱回流1h，過濾，回流3次，合并濾液，在80℃下減壓濃縮至熱測相對密度為1.25kg/l。其中，環(huán)烯醚萜苷組合物約有0.472％、苯乙醇苷組合物約有0.143％、糠醛衍生物組合物約有0.017％、人參皂苷組合物約有0.59％、寡糖約有42％、多糖約有19.21％、總出膏率約有64％。環(huán)烯醚萜苷組合物、苯乙醇苷組合物、糠醛衍生物組合物、人參皂苷組合物、寡糖、多糖、總出膏率重量比約為：47.2：14.3：1.7：59：4200：1921：6400。
實(shí)施例2
準(zhǔn)確稱取地黃350g，茯苓100g和人參50g，加10倍量的水，浸泡30min，加熱回流1h，過濾，回流3次，合并濾液，在80℃下減壓濃縮至熱測相對密度為1.25kg/l。其中，環(huán)烯醚萜苷組合物約有0.443％、苯乙醇苷組合物約有0.135％、糠醛衍生物組合物約有0.015％、人參皂苷組合物約有0.59％、寡糖約有40％、多糖約有18.05％、總出膏率約有63％。環(huán)烯醚萜苷組合物、苯乙醇苷組合物、糠醛衍生物組合物、人參皂苷組合物、寡糖、多糖、總出膏率重量比約為：44.3：13.5：1.5：59：4000：1805：6300。
實(shí)施例3
準(zhǔn)確稱取地黃285g，茯苓90g和人參42g，加10倍量的水，加熱回流1h，過濾，回流3次，合并濾液，在80℃下減壓濃縮至熱測相對密度為1.25kg/l。其中，環(huán)烯醚萜苷組合物約有0.430％、苯乙醇苷組合物約有0.129％、糠醛衍生物組合物約有0.014％、人參皂苷組合物約有0.58％、寡糖約有39％、多糖約有18％、總出膏率約有63％。環(huán)烯醚萜苷組合物、苯乙醇苷組合物、糠醛衍生物組合物、人參皂苷組合物、寡糖、多糖、總出膏率重量比約為：43.0：12.9：1.4：60：3900：1800：6300。
實(shí)施例4改善腸道菌群結(jié)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)研究
實(shí)驗(yàn)方法：
1、組合物的制備：根據(jù)上述實(shí)施例1、2、3分別制備得到組合物1、組合物2、組合物3。并按實(shí)施例1同樣方法制備得到由茯苓和人參制成的組合物4、地黃和茯苓制成的組合物5、人參和地黃制成的組合物6。
2、實(shí)驗(yàn)動物：每個(gè)實(shí)施例60只昆明種小鼠，均為雄性，6-8周齡，體重18-22g，購自中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。
3、實(shí)驗(yàn)試劑：伊紅美藍(lán)瓊脂、疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂、雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基(bbl)、乳桿菌選擇性培養(yǎng)基(lbs)、胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎(chǔ)(tsc)、d-環(huán)絲氨酸溶液、甘油、生理鹽水，低聚果糖，乙酸，吐溫80。
4、分組給藥方法：60只小鼠隨機(jī)分為5組。①空白對照組，以0.10ml/10g鼠重生理鹽水每日2次灌胃，連續(xù)14d。②陽性對照組，用低聚果糖(of)2.40g，用無菌蒸餾水稀釋成20mg/ml，以0.10ml/10g鼠重生理鹽水每日2次灌胃，連續(xù)14d。③高劑量組：用150g組合物，加無菌蒸餾水稀釋至200ml，即為高劑量組濃度，以0.10ml/10g鼠重生理鹽水每日2次灌胃，連續(xù)14d。④中劑量組：將高劑量組組合物用無菌蒸餾水稀釋3倍，為中劑量組濃度，以0.10ml/10g鼠重生理鹽水每日2次灌胃，連續(xù)14d。⑤低劑量組：將高劑量組組合物用無菌蒸餾水稀釋6倍，為低劑量組濃度，以0.10ml/10g鼠重生理鹽水每日2次灌胃，連續(xù)14d。
測量給藥前、給藥結(jié)束后各組小鼠體質(zhì)量。在給藥前，無菌采集小鼠糞便，加20％滅菌甘油生理鹽水，以1：10稀釋，制成均勻混懸液，1000轉(zhuǎn)速離心，取上清，存于-80℃冰箱，待分析，最后一次給予組合物24h后，與實(shí)驗(yàn)前同樣方式取直腸糞便，處理方法同上。
5、小鼠一般狀態(tài)觀測：自接種即開始觀察小鼠各組的飲食情況、活動度、毛色、大便狀況等。
6、體重：0-14d每天逐一稱取小鼠體重，按分組做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
7、腸道菌實(shí)驗(yàn)樣品處理方法：將采集到的腸道菌實(shí)驗(yàn)糞便樣品，依次10倍遞增稀釋成一系列不同稀釋度的含菌液至10-8，選擇合適的稀釋濃度分別接種在各培養(yǎng)基上。培養(yǎng)后，以菌落形態(tài)、格蘭染色鏡檢、生化反應(yīng)等鑒定計(jì)數(shù)菌落，計(jì)算出每克濕便中的菌落，取對數(shù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。腸道菌的培養(yǎng)條件及鑒定方法如表9。
表9腸道菌的培養(yǎng)條件及鑒定方法
二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1小鼠的一般狀況：給藥前后，小鼠均活潑好動，對周圍環(huán)境的變化反應(yīng)較靈敏，且食欲良好。
2.2組合物1-6小鼠體重變化如表10-15。
表10組合物1小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化(mean±sd，單位g)
表11組合物2小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化(mean±sd，單位g)
表12組合物3小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化(mean±sd，單位g)
表13組合物4小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化(mean±sd，單位g)
表14組合物5小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化(mean±sd，單位g)
表15組合物6小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化(mean±sd，單位g)
小鼠的初始體重各組差異無顯著性(t檢驗(yàn)，*p＞0.05)。給藥14d后，各組小鼠的體重均顯著增長(t檢驗(yàn)，*p＜0.01)。給藥14d后，各組間比較差異無顯著性(t檢驗(yàn)，*p＞0.05)。
從上表可以看出，生理鹽水、低聚果糖和各劑量組合物對小鼠的體重增長無影響。
2.3組合物1-6對小鼠腸道中雙歧桿菌、乳桿菌的影響如表16-21。
表16組合物1對小鼠腸道雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表17組合物2對小鼠腸道雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表18組合物3對小鼠腸道雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表19組合物4對小鼠腸道雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表20組合物5對小鼠腸道雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表21組合物6對小鼠腸道雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
給藥前各組之間比較，雙歧桿菌、乳桿菌的數(shù)量差異均無顯著性(t檢驗(yàn)，*p＞0.05)。給藥14d后各組與空白對照組比較，低聚果糖組、組合物1-3的高劑量組雙歧桿菌數(shù)量顯著高于空白對照組小鼠(t檢驗(yàn)，*p＜0.05)。
給藥14d后各組與空白對照組比較，隨著濃度增加，乳桿菌含量增加。結(jié)果表明：低聚果糖及本發(fā)明提供的組合物均可在一定程度上扶植有益菌的生長,且組合物1-3效果較其它組合物好。
2.4、實(shí)施例1、2、3組合物對小鼠腸道腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的影響如表22-27。表22組合物1對小鼠腸道腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表23組合物2對小鼠腸道腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表24組合物3對小鼠腸道腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表25組合物4對小鼠腸道腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表26組合物5對小鼠腸道腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
表27組合物6對小鼠腸道腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量的影響log(x±s)cfu/g
給藥前各組間比較，腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量差異均無顯著性(t檢驗(yàn)，*p＞0.05)。給藥14d后各組與空白對照組比較，組合物1-3的低劑量、中劑量、高劑量組腸桿菌數(shù)量均顯著低于空白對照組小鼠(t檢驗(yàn)，*p＜0.05)。給藥14d后各組與空白對照組比較，組合物1-3的低劑量、中劑量組腸球菌數(shù)量均顯著低于空白對照組小鼠(t檢驗(yàn)，*p＜0.05)。給藥14d后各組與空白對照組比較，組合物1-3的低、中劑量組產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量均顯著低于空白對照組小鼠(t檢驗(yàn)，*p＜0.05)。
以上結(jié)果表明，本發(fā)明提供的組合物可抑制腸桿菌、腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌的繁殖，本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)優(yōu)選得到的由地黃，茯苓和人參構(gòu)成的組合物1-3相對由茯苓和人參制成的組合物4、地黃和茯苓制成的組合物5、人參和地黃制成的組合物6及其低聚果糖而言，具有更好的改善腸道菌群結(jié)構(gòu)的效，表明地黃，茯苓和人參科學(xué)配伍后，取得了很好的協(xié)同效果！。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明植物源組合物可以提高益生菌的數(shù)量，減少有害菌的數(shù)量，能夠改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，具有廣闊的應(yīng)用前景。
實(shí)施例5、防治便秘功能評價(jià)
將本發(fā)明實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3制備得到的組合物，加水溶解配制成所需濃度，按照《保健食品功能學(xué)評價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》有關(guān)通便功能實(shí)驗(yàn)的規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的組合物可顯著縮短模型小鼠首次排便時(shí)間，增加造模后模型小鼠5h內(nèi)黑便粒數(shù)及黑便總重量，可顯著縮短便秘動物模型首便時(shí)間及增加排便數(shù)量和重量，且增加小鼠腸道雙歧桿菌及乳桿菌數(shù)量，表明本發(fā)明提供的組合物具有通便及調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)的保健功能，可用于防治腸道菌群結(jié)構(gòu)失調(diào)及便秘等疾病。且與現(xiàn)有的藥物及保健食品相比，該組合物以具有多重保健功效的天然傳統(tǒng)植物提取物為原料，更加安全，無不良反應(yīng)。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。