專利名稱：：反式氯米芬給藥方案的制作方法反式氯米芬給藥方案發明領域本發明涉及治療男性不育癥的組合物和方法。尤其是，本發明涉及包含富集反式氯米芬的氯米芬的組合物，及其使用方法。相關申請的交叉參考本申請要求2005年3月22日提交的美國臨時專利申請第60/664,290號的權益，其內容引入本文以作參考。
背景技術：
：睪酮是主要的雄激素，在全部的雄性健康中起著重要作用。睪酮對于特定生殖組織(睪丸、前列腺、附睪、精嚢和陰莖)和雄性第二性征的發育和維持來說是必需的。其在性欲和勃起功能中起著關鍵作用，且對于精子發生的啟動和維持是必不可少的。睪酮還具有與生殖組織不相關的重要功能。例如，通過增加氮貯留而積極地影響身體組成，氮貯留支持了瘦體重、肌肉大小和肌肉強度。它還作用于骨頭上刺激骨形成。睪酮分泌是一連串的荷爾蒙過程的最終產物。促性腺激素釋放激素(GnRH),分泌于丘腦下部，控制了促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的脈沖式分泌，促黃體激素和促卵泡激素都由垂體前葉分泌。依次地，LH調節睪丸間質細胞中睪酮的產生和分泌，同時FSH幫助誘導精子發生。睪酮常以"總睪酮"測量。該測量包括結合于性激素結合球蛋白(SHBG)(~44%)，因此是不可生物利用的睪酮，和游離(~2%)或松散地結合于其它蛋白的(非性激素結合球蛋白結合)(-54%)睪酮。來自世界衛生組織研究的結果顯示睪酮晝夜節律地正常分泌，早晨水平較高，大約下午8-10點出現最低水平。見圖1。老年男性(平均年齡71歲)在1天中睪酮分泌的這種變換更加不顯著。直到此時這種節律的重要性還不為人所知。在24小時內每10分鐘經由留置插管自年輕和老年患者取樣。根據Tenover(1987)，年輕男性(年齡范圍22歲-35歲，平均27.3歲)的平均24小時總血清睪酮水平為4.9±0.3(±SEM)mg/ml(17.0nmol/L),而老年男性(年齡范圍65歲-84歲，平均70.7歲)具有4.1±0.4mg/ml.(P<0.5;14.2nmol/L)的顯著較低的平均24小時總血清睪酮水平。與健康年輕男性的4.8±0.2mg/ml[16.6nmol/L]相比,從老年男性中獲得的單個隨機樣品的總血清睪酮水平(4.0±0.2mg/ml[13.9nnmol/L])也顯著較低。睪酮缺乏可由潛在的疾病或遺傳病引起，且也經常是衰老的并發癥。例如，原發性性腺機能減退由原發性睪丸衰竭引起。在這種情形中，睪酮水平低，并且垂體促性腺激素(LH和FSH)水平升高。繼發性性腺機能減退歸因于垂體促性腺激素分泌的不足。除了低睪酮水平之外，LH和FSH水平低或低于正常水平。一些成人睪酮缺乏的后遺癥包括許多種類的癥狀，包括性欲缺乏、勃起機能障礙、少精液癥或精子缺乏、第二性征缺失或退化、肌肉量逐漸減少、疲勞、情感低落和骨質疏松癥風險增加。許多這些病癥一般稱作男性更年期。美國目前存在著一些睪酮治療的形式。近來，經皮制劑在市場上受到寵愛。然而，由于陰嚢皮膚中高濃度的5a-還原酶，陰囊睪酮貼劑導致了超生理學水平的5a-二氫睪酮(DHT)。還不知道這些增加的DHT水平是否具有任何長期的健康后果。非陰嚢系統被認為更加便利，且大多數患者達到了正常范圍內的平均血清濃度和正常水平的DHT。不推薦口服睪酮治療，因為需要替代療法，這與肝毒性的顯著風險相關。發明概迷本發明涉及施用包含0%-29%重量/重量的(順式、-Z-、反式-氯米芬)(下文"順式-氯米芬")和100°/。-71%w/w(反式-、E-、順式-氯米芬)(下文"反式-氯米芬")或其藥學可接受鹽的組合物的方法。該組合物可基本上由反式-氯米芬或其類似物組成。組合物可以在3-30天的時間段內引起睪酮的藥理學有效血漿濃度的單次劑量給予患者。單次劑量可為約5到約100mg。單次劑量也可為約12.5到約50mg。單次劑量還可為12.5、25或50mg。時間段可為約7到約15天。時間段也可為約IO到約12天。組合物可給予需要增加睪酮水平的患者。組合物還可給予需要降低膽固醇水平的患者。組合物還可給予需要增加肌肉量的患者。組合物還可給予患有脂肪營養障礙的患者。組合物還可給予需要增加淋巴細胞水平的患者。組合物還可給予需要降低甘油三酯水平的患者。組合物還可給予患有良性前列腺肥大的患者。組合物還可給予患有前列腺癌的患者。組合物還可給予患有男性性腺功能減退癥相關病癥的患者。性腺機能減退相關的病癥可是肌肉量的減少、身體性能受限、骨密度降低、性欲減少、能力降低、良性前列腺增生減少或不育癥。附圖的簡要說明圖1是表示健康男性(年輕或者年老)正常分泌總血清睪酮的曲線圖。圖2顯示了氯米芬檸檬酸鹽的化學結構。圖3是使用氯米芬、恩氯米芬和珠氯米芬后血清睪酮水平的時間過程圖。圖4是用氯米芬、恩氯米芬和珠氯米芬治療的雄性狒狒的膽固醇水平的時間過程圖。圖5顯示了AndroxaFM或Androgel⑧對睪酮水平的影響。圖6顯示了AndroxalTM或Androgel⑧對LH水平的影響。圖7顯示了AndroxaFM或Androgel⑧對FSH水平的影響。發明詳述本發明提供了增加雄性動物睪酮水平和改善或預防低睪酮水平后遺癥的給藥方法。本發明是基于停止使用包含反式-氯米芬治療后，血清睪酮、LH和FSH水平持續增加的驚人發現而作出的。根據長時間的作用，包含反式-氯米芬的組合物可偶爾地或者一些其它非日常方式使用，并且仍然獲得了治療效果。氯米芬(圖2)是與他莫昔芬有關的抗雌激素藥，其阻斷下丘腦正常的雌激素反饋，然后對腦垂體進行負反饋。這導致了促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的增加。在男性當中，這些促性腺激素水平的增加刺激了睪丸的間質細胞，引起了加高睪酮水平的產生。氯米芬檸檬酸鹽具有如下結構Ernst等人，J.Pharmaceut.Sci.(55:148(1976),已經指出氯米芬是兩種幾何異構體的混合物，它們稱作順式、-Z-、氯米芬(順式-氯米芬或珠氯米芬)和反式-、E-、氯米芬(反式-氯米芬或恩氯米芬)。根據Ernst等人，反式-氯米芬鹽酸鹽的熔點為149°C-150.5°C,而順式-氯米芬鹽酸鹽的熔點為156.5°C-158°C。Ernst等人還發現(反式異構體)是抗雌激素的(AE)，而順式異構體是更加有效和雌激素作用更強的形式，且也曾報導過具有抗雌激素活性。作者將藥物對產卵活性的作用歸因于兩種形式，指出混合物比單獨的反式-氯米芬更加有效。反式異構體在下丘腦水平上幫助產卵。雌激素異構體順式-氯米芬在導致產卵的生理學途徑的其它地方促使產卵增加。這些異構體還也被報導具有不同的體內半衰期。而且，還曾報導順式形式單次劑量超過1個月后還留下殘留血液水平。Vandekerckhove等人(CochraneDatabaseSystRev2000;(2):CD000151(2000))發現包括738個男性在內的10個研究顯示抗雌激素似乎對內分泌生成具有有益效果，即睪酮，但是沒有足夠的證據來評價生育力效應。無論氯米芬給藥是否增加睪酮水平，可以容易推定的是只要睪丸仍然保留對促性腺激素刺激響應的能力，那么該藥物應當積極影響睪酮缺失的副作用。目前批準的氯米芬是順式和反式異構體的混合物，順式異構體以約30%到50%(默克手冊)存在用于促進產卵停止的患者的生育力。氯米芬通過啟動一連串的內分泌事件而增加產卵作用，內分泌事件在排卵前促性腺激素沖擊中達到極點，隨后卵泡破裂。推薦該藥物以每天總計100mg的劑量使用5天。氯米芬也伴隨許多副作用，包括視力模糊、腹部不適、男子女性型乳房、睪丸腫瘤、血管收縮潮紅(vasomotorflushes)、惡心和頭痛。而且，其它研究顯示氯米芬具有遺傳毒性和肺瘤促進作用。這些觀察的直接結果是氯米芬以其當前的形式，具有30%到50%的順式異構體，在慢性睪酮缺乏治療的長期療法中不合適。氯米芬還被用于低睪酮水平男性的介入治療中。Tenover等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1103,(1987)和Tenover等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1118(1987)發現用氯米芬治療后年輕人和老年人的FSH和LH都增加了。他們還發現男性游離和總睪酮增加，年輕人顯示出增加顯著。還進行了研究用于確定是否氯米芬可通過改善精子質量來提高生育力。Homonnai等人Fertil.AndSteril50:801(1988)發現精子濃度增加并計數，而其它沒有(參見例如Sokel，等人，Fertil.andSteril.49:865(1988);Check,等人，Int.J.Fertil.34:120(1989);Purvis,等人，Int.J.Androl27:109(1989);andBreznik，Arch.Androl.27:109(1993).)。一組發現長期治療正常精子的百分數降低。Shamis，等人，Arch.Androl27:109(1991)。世界衛生組織的研究顯示治療6個月后精子質量或生育力并未改變。(AnonymousAndrol.":2"(1992).)在后分析確認了低質量精子男性的睪酮水平上升，而生育力沒有增加(Vanderkerckhove，等人，2000)。研究還顯示長期氯米芬治療似乎對健康沒有劇烈的有害作用，盡管4個月后確實顯示治療導致了較低的精子質量。研究已經使男性以25mg每天或100mg每個1天的量使用了18個月。在1991,Guay等人(Urology35:377(1991))中，顯示氯米芬可治療男性性功能障礙。他們的前提似乎是性功能依賴于睪酮水平。這一點被顯示積極影響雄激素和性功能的早期研究所支持，Davidson,等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.48:955(1979),研究規定睡眠相關的勃起作為對T的有力響應，Cunningham,等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.70:792(1990)。然而，在1995年，Guay等人(Gray,等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.50:3546(1995))出版了研究，在該研究中他們發現使用氯米芬2個月后LH、FSH和睪酮增加，而對勃起功能障礙無效。可能對年輕男性和特定類型的老年男性有一些益處，但似乎只增加睪酮水平并不足夠。睪酮對與睡眠相關的勃起的作用可能被看得太嚴重了(Herskowitz，等人，J.PsychosomatRes.42:541(1997))。根據本發明，包含一種異構體優選反式-氯米芬或如下所述與正常產生混合物不同的預定義的氯米芬的異構體混合物的組合物來增加睪酮水平，同時降低該藥物的副作用。因此，本發明提供了用于增加睪酮水平的口服療法，該療法沒有或減少了與現存氯米芬制劑相關的副作用。在本發明的一個實施方案中，給予需要或希望增加血清睪酮水平的患者一個或多個劑量的有效量的組合物，該組合物包含1到約200mg劑量的反式-氯米芬(雖然理想劑量的確定與本領域普通技術人員的水平相關)。只要反式-氯米芬與順式-氯米芬的比例大于1，那么順式-氯米芬也可存在于組合物中。反式和順式氯米芬異構體的類似物如上面Ernst，等人.中描述的那些也對本發明的實施有用。在本發明的另一實施方案中，給予患有與性腺機能減退相關病癥的患者一個或多個劑量的有效量的組合物，該組合物包含1到約200mg劑量的反式-氯米芬(雖然理想劑量的確定與本領域普通技術人員的水平相關)。只要反式-氯米芬與順式-氯米芬的比例大于1,那么順式-氯米芬也可存在于組合物中。反式和順式氯米芬異構體的類似物如Ernst，等人.supra中描述的那些也對本發明的實施有用。與性腺機能減退相關的病癥包括，但不限于肌肉量減少、身體性能受限、骨密度降低、性欲減少、能力降低、良性前列腺增生、少精液癥或精子缺乏、第二性征缺失或退化、肌肉量減少、疲勞、抑郁和不育癥。本發明的組合物可用于治療患有其它病癥的患者，包括但不限于，這些病癥描述于U.S.App.Nos.10/427,768(2003年4月提交)、10〃12,546(2003年11月12日提交)、60/588,223(2004年7月14日提交)、60/588,130(2004年7月14日提交)和60/588,223(2004年7月14日提交)中。劑量優選(但不必須)作為劑量方案的部分給予，該劑量方案被設計用于產生模擬或相應于圖1描述的正常分泌總血清睪酮曲線的血清睪酮水平。例如，根據圖1，優選組合物的劑量可以藥物制劑給予，該制劑在上午8點鐘左右產生血清睪酮水平峰值。這樣的藥物制劑可是如美國專利第6,221,399號、日本專利4-312522、Meshali等人,Int.J.Phar.89:177-181(1993)、Kharenko等人，Intern.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.22:232-233(1995)、WO95/35093、Dangprasit等人，Drug.Devel.andIncl.Pharm.21(20):2323-2337(1995)、美國專利第6,143,353號、6,190,591號、6,096,338號、6,129,933號、6,126,969號、6,248,363中描述制備的緩釋制劑和本領域公知的其它緩釋制劑的形式。反式氯米芬的劑量可以為5到100mg。反式氯米芬劑量也可以為12.5到50mg。反式氯米芬的劑量還可以為12.5mg、25mg或50mg。基于包含反式-氯米芬組合物的長效作用，如本文所示，可在3-30天的時期內給予一次劑量，獲得于組合物每日給藥相當的有益效果。也可在7-15天或10-12天的時期內給予一次劑量。適當的藥物組合物或單位劑型可以是固體的形式，例如片劑或填充膠嚢，或者液體，如溶液混懸劑、乳劑、酏劑或填充了上述物質的膠嚢，所有這些都口服使用。組合物還可以是無菌注射溶液或胃腸外(包括皮下)使用的乳劑形式。這些藥物組合物及其單位劑型可包含常規比例的成分。根據本發明的組合物還可通過靜脈內、皮下、口腔、經粘膜、鞘內、真皮內、腦池內或其它給藥途徑施用。施用組合物后，可如上所述測量血清睪酮水平，可以改變劑量以獲得血清睪酮水平足夠的增加從而達到如上所述所需與正常睪酮相關的生理學結果。組合物可每日、非每日或偶爾使用。例如，組合物可以間隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天的給藥方案使用。下述實施例意欲對本發明舉例說明，不打算限制附加權利要求所列出的本發明的范圍。實施例1氯米芬對雄性狒狒血清睪酮和膽固醇的影響連續12天給予成年、雄性狒狒1.5mg/kg的氯米芬、恩氯米芬(反式-氯米芬)或珠氯米芬(順式-氯米芬)。分析的樣品是在第一次治療當天給予試驗檢品之前(第0天)、治療12天后(第12天)和最后一次治療7天后(結束或清除)所取的血清。1.對體重和血清LH、FSH、PRL和睪酮的影響接受恩氯米芬的組別總血清睪酮顯著增加。參見表1。各組在基線時期或在第0天沒有差別。治療7天后(清除期)三組之間也沒有差別。然而，與氯米芬和珠氯米芬在第6天(p值分別為0.03和0.00002)和與珠氯米芬在第12天(p=0.047)相比，恩氯米芬產生了較高水平的睪酮。珠氯米芬明顯沒有任何程度地增加總血清睪酮。通過變化系數來判斷，與接受恩氯米芬的動物相比，接受氯米芬的動物在第6天和之后顯示了變化更大的總睪酮水平。當我們觀察影響的時間過程時，與基線或第0天的數值相比，可以確定的是僅恩氯米芬在第6天和第12天顯著地和統計學上增加了總血清睪酮。而且，恩氯米芬治療停止后，在第12天和第18天(清除)之間引起了總血清睪酮水平顯著地降低。這表明恩氯米芬容易從循環中清除，這與恩氯米芬在人體中的代謝清除率是一致的。恩氯米芬明顯比單獨的氯米芬更好和更加相容，并且珠氯米芬無效。表1-血清睪酮水平(ng/dl)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>ANOVAP=0.61P=0.43P=0.007P=0.57P=0.256K-WP=0.56P=0.84P=0.051P=0.079P=0.252血清LH或FSH沒有變化。總血清睪酮與LH的比率和總血清睪酮的曲線相同，顯示不存在依賴性(數據未列出)。在12天的研究過程中體重也未發生改變。研究過程中接受恩氯米芬的組別血清催乳素(PRL)升高，暗示抗雌激素作用已經被部分描述(Ben-JonathanandHnasko，2001),且依據男性年齡、睪酮衰退和催乳素升高(Feldman等人，2002)的事實，這種作用已經被預期。2.對膽固醇的影響使用恩氯米芬治療易于降低血清膽固醇，珠氯米芬增加了相同的參數。初步分析顯示膽固醇水平的變化不是統計學顯著的，且這些變化在正常范圍之內。由于所觀察到的兩種異構體在一小段時期內傾向于顯示對膽固醇水平相反的作用，于是進行了進一步的分析。詳細的分析顯示恩氯米芬引起血清膽固醇水平降低8%。相反，用珠氯米芬治療導致血清膽固醇水平增加22%。使用氯米芬治療引起血清膽固醇水平輕微升高。假使這兩種異構體可選擇地具有雌激素激動或拮抗活性，那么恩氯米芬和珠氯米芬對血清膽固醇水平的相反作用就不是意外的。這些結果表明恩氯米芬可用于治療高膽固醇水平的患者。這些結果還表明，如果長期使用以增加血清睪酮水平的話，珠氯米芬對于血清膽固醇更加溫和。3.對臨床化學參數的影響通過ANOV或Kruskal-Wallis試驗測定，對于任何試驗參數在研究的開始時三個組別的每個參數的平均值沒有差別。所有組別都顯示各個參數的正常值，除了(l)血清鈉；相關的計算參數，陰離子間隙，在整個試驗中9只狒狒全部低；(2)血清葡萄糖；和(3)BUN,恩氯米芬組在第0天都高。治療第12天和治療之后7天(清除)，除了氯米芬和珠氯米芬組比恩氯米芬組的陰離子間隙低以外所有組別的任何參數都沒有差別。與該組狒狒相關的血清鈉和陰離子間隙的值似乎是異常的。恩氯米芬和珠氯米芬對紅細胞數和珠氯米芬對血細胞比容都有實質影響。所有的化合物在第0天或在結束時都降低了平均細胞血紅蛋白濃度(MCHC)。平均細胞血紅蛋白(MCH)沒有改變，平均細胞容積(MCV)增加，降低是可預見的。盡管認為睪酮可能增加血細胞比容，但是僅僅珠氯米芬治療沒有顯示統計學差異，這不增加總血清睪酮。顯然，應當監測使用珠氯米芬的臨床試驗中的男性的紅細胞數的特征。恩氯米芬將被預期有很少的作用。雖然發現的值保留在正常范圍內，但是12天恩氯米芬治療對血小板有明顯的影響。在此需要考慮的是雄性和雌性狒狒血小板計數的性二形性(雄性279只，雌性348只)。這可能是由荷爾蒙引起的。由于證明恩氯米芬組睪酮增加，在該組中血小板計數的減少對睪酮的影響可能是次要的。而且，使用恩氯米芬的治療將血小板計數從第0天的水平推向其正常雄性水平，第0天水平是該組正常范圍的高點。不必然能預期到恩氯米芬對血小板的有害作用。所有試驗的氯米芬對白細胞(WBC)數都有影響，最顯著的是恩氯米芬增加淋巴細胞和嗜曙紅細胞的數目。這些作用也不是像它們看起來的那么直接。似乎恩氯米芬對降低血液中粒細胞的百分比有很強的作用。7天清除期之后當該值降低到正常范圍以下時作用是強烈的(該時間過程可以反映出需要改變WBC數目相對長的時間)。對于白細胞數目來說，狒狒間的性二形性很小，因此這些作用更像是化合物本身而不是睪酮的變化引起的。然而，當使用WBC計數觀察所計算的粒細胞數時，我們沒有發現由任何化合物引起的粒細胞計數的差別。同時，淋巴細胞層最令人感興趣哦。使用恩氯米芬治療增加了淋巴細胞計數和百分比。鑒于淋巴細胞百分比平均值保留在正常范圍內，WBC計數傾向于增加，恩氯米芬對淋巴細胞計數的實際結果是增加了的。嗜曙紅細胞的結果是類似的。明確暗示了用于治療淋巴細胞低的人，例如HIV陽性的人。因為基于恩氯米芬不太可能使淋巴細胞減少的結果，因此可以確定的是其能用于AIDS人群。由于疾病的消耗性作用，這些個體通常使用易于升高睪酮的藥物治療。低肝和腎毒性和對膽固醇和磷脂的有利作用也是要用于HIV陽性患者的任何藥物非常有利的屬性，由于他們的疾病這些人已經缺乏免疫力。氯米芬或珠氯米芬組血清葡萄糖的增加在正常范圍之內。在第0天血清葡萄糖平均值高的情況下，恩氯米芬治療沒有使之增加。沒有證據表明恩氯米芬將對血液葡萄糖有害。通過AST和ALT酶判斷顯然對肝功能沒有明顯副作用。治療后這些值傾向于降低。血清酶水平的增加將表明肝損傷。盡管治療期間的差別并不是統計學上顯著的，但對于氯米芬組來說在研究結束時ALT/SGPT降低。恩氯米芬和珠氯米芬組的變化都在正常范圍之內。懷孕期AST降低；因此諸如珠氯米芬的雌激素激動劑對降低邊緣AST水平的作用可能是合理的。堿性磷酸酶(ALP)也在肝臟中被發現，并且在不同疾病狀態下升高。ALP降低進一步證明肝臟損傷。血清白蛋白沒有發上變化，血清白蛋白也是肝臟產物。長時間期間內強力抑制血清白蛋白可以促成人體內游離血清類固醇激素水平，盡管性激素結合蛋白起著更加重要的作用。由于是底線，給予測定的參數，沒有任何化合物與肝臟損傷相聯系。成骨細胞活性和骨疾病都伴隨著高血清ALP值。珠氯米芬治療之后ALP值沒有升高，恩氯米芬治療之后ALP值降低。這種傾向預示著與珠氯米芬相比，使用恩氯米芬結果更加良好。盡管在氯米芬和恩氯米芬組的研究過程中BUN和BUN/肌酐都改變了，肌酐最終變化的缺乏反對了腎功能不全。腎小球過濾能力的喪失將導致BUN的增加。由于營養缺乏(不像控制環境中那樣)或高液體攝取(可能伴隨水腫)導致人體BUN減少。并且，盡管恩氯米芬組第0天和第12天之間血清睪酮增加，但是血清肌酐值沒有差別，因此阻止了肌肉量在此短暫時間間隔內增加。在整個研究過程中動物的血清鈉水平都比參考值低。氯米芬和珠氯米芬組第12天的血清二氧化碳比參考值高。整個研究過程中所有動物的血清陰離子間隙較低，與鈉的結果類似。恩氯米芬將該參數向正常值提升。整個所有治療期間試驗動物中檢測的電解質平衡保持令人難以捉摸，但是可能是BUN結果暗示的相同液體紊亂現象的一部分。前述結果表明在提高總血清睪酮方面恩氯米芬比氯米芬或珠氯米芬更加有效。珠氯米芬明顯無效且該缺陷限制了氯米芬用于性腺機能減退的任何使用，特別是由于其半衰期較長，因此隨著時間的流逝氯米芬的珠氯米芬成分將在循環中占主導地位。與珠氯米芬相比，恩氯米芬似乎在所有方面都相對良好，并且經常甚至比氯米芬都好。當考慮恩氯米芬降低膽固醇的傾向時這是特別正確的，肝臟酶反對珠氯米芬的傾向提升了相同的參數。如果其可以顯示出淋巴細胞的CD4+亞群沒有被降低或升高，那么恩氯米芬增加淋巴細胞計數的令人驚奇的傾向可能對男性AIDS患者有用。實施例2使用反式-氯米芬和比值大于1的反式-氯米芬和順式-氯米芬的混合物增加男性睪酮水平的方法給予反式-氯米芬之前，從雄性個體取血樣，使用如Matsumoto,等人.Clin.Endocrinol.Metab.56;720(1983)(引入本文以作參考)描述的方法測量睪酮水平。還可如Tenover等人.J.Clin.Endocrinol.Metab.65:1118(1987)描述的方法測量游離或結合于睪酮的性激素結合蛋白(SHBG)，其中該方法描述了通過pH]二氬睪酮飽和分析和放射性免疫測定來測定SHBG。還測量了非-SHBG-結合的睪酮水平(生物可獲得的睪酮)，如根據Tenover等人.J.Clin.EndocrinolandMetab.65:U18(1987).SeealsoSoderguard等人，J.SteroidBiochem16:801(1982)。也參見Soderguard等人，J.SteroidBiochem16:801(1982),引入本文以作參考。給予患者氯米芬1.5mg/kg的日劑量，其中反式-氯米芬與順式-氯米芬的比率大于1。監測患者的睪酮水平以調節劑量和給藥頻率從而使患者達到治療水平的睪酮。實施例3比較AndroxaFM和Androgel在AdvancedBiologicalResearch,Inc.(ABR)ClinicalResearchCenterinHackensack，NewJersey進行了安慰劑對照的研究，以在性腺機能減退衰退的男性中比較口服施用的Androxal(反式-氯米芬)和Androgel。Androgel(SolvayPharmaceuticals,Inc.)包括在經皮基質中施用外源性睪酮的乳劑。該研究征集了62名睪酮水平低于300ng/dl(298-1034ng/dl正常)的性腺機能減退的男性，他們被隨機分如6個不同的組，3個劑量的Androxal(12.5mg、25mg和50mg),安慰劑，高和低劑量的Androgel。在第1和12天將臨床期間的每一AndroxalT,placebo組的半數男性都隨機分群以測定AndroxalTM的藥代動力學參數和睪酮的周期性變化。安慰劑和AndroxalTM的劑量都以雙盲的方式施用。Androgel乳劑以標簽公開的方式施用。經歷臨床的半數Androge膽組患者與研究中的其他患者相似。兩周施藥之后，跟隨患者額外的7到10天以測定他們睪酮水平的狀態。與安慰劑不同的AndroxalTM或Androgd⑧組研究中沒有注意到副作用。1.睪酮水平的影響所有劑量的AndroxalTM或Androgel⑧與基線奪酮水平產生了統計學顯著的睪酮變化(圖5)。低、中和高刑量的AndroxalTM分別平均增加了169、247和294ng/dl，同時Androgel5G,認可的最低刑量，和Androgel10G,認可的最高劑量，與基線產生的變化為212和363ng/dl。這些值與使用AndroxalTM獲得的變化是統計學無差別的。不能顯示AndroxalTM和Androgel⑧的差別似乎是由使用Androgel⑧時產生的高度變化的結杲引起的。例如，50mg劑量的AndroxalTM15天后將平均總睪酮升至589±172ng/dl，變異系數(CV)為29%,相似于安慰劑組(36%)。另一方面，Androgel5G和10G分別產生了平均總卑酮值473±289ng/dl和608±323ng/dl，變異系數61%和53%。AndroxalTM治療14天后，所有的劑量都與相似于安慰劑組的總奪酮白天模式相關，即早晨高峰，正午谷和晚間升高。不限于理論，該模式可能歸因于AndroxaFM的作用方式，這似乎通過如下所示在下丘腦-垂體軸作用而被調節。男性對Androgel⑧的白天模式幾乎是無效的。然而，Androgel⑧引起的總睪酮的峰值與給藥劑量相關，通常超過1,034ng/dl的正常高水平。某些個體對Androgel10G能獲得超過2500ng/dl的總睪酮高峰水平。有趣的是，使用AndroxalTM治療后在隨訪期(即口服治療結束后7-10天)血清總華酮水平仍然高。除此之外，與高劑量的AndroGd1%相比，最高劑量AndroxalTM時的血清總睪酮水平明顯較高(p=0.017，t-test)。2.對LH和FSH水平的影響用AndroxalTM治療產生了性腺機能減退男性患者血清LH水平統計學顯著的升高(圖6)。與總血清奪酮一樣，血清LH水平在隨訪期(即每日口服治療停止后7-10天)存在意外的延續，對于3種劑量的AndroxalTM其水平仍然高。通過比較，用AndroGel⑧治療最初降低LH,停止后出現了向預治療水平的明顯反彈。用AndroxalTM治療也產生了性腺才幾能減退男性患者血清FSH水平統計學上的增力口(圖7)。增力口FSH的沖莫式相々乂于LH中看到的那樣，即，所有劑量的AndroxaH"M都升高了血清FSH，血清FSH在隨訪期仍然很高，而AndroGel⑧抑制了血清FSH水平，治療停止使得血清FSH向更加相似于預治療的水平反彈。3.對其它臨床化學參數的影響還測量了對血清二羥基睪酮(DHT)水平的影響。服用Androxal的男性產生了從DHT到總睪酮的有利轉變。例如與安慰劑組1.07的比率相比，使用50mg劑量AndroxaFM的男性產生了比率為0.83的DHT/TT。通過對比DHT/TT比率，每個Androgel⑧組都〉1.5。該結果表明使用Androgel⑧的男性DHT比總睪酮增加的快。因此，在Androgel⑧組男性中，相對于睪酮正常水平的DHT被破壞。臨床化學參數的結果也顯示，意想不到的是，使用Androxal的男性產生了甘油三酯非劑量依賴性地減少。2周治療后甘油三酯平均減少了19.1%。相比安慰劑組降低了5.9%，Androgel5G和10G分別增加了0.3%和22%。4.討論基于該研究，對于AndroxalTM作為有效療法我們推斷出許多潛在的益處。Androxal"高度一致的方式將總睪酮升高至正常范圍，而血清睪酮沒有異常的高峰。除此之外，使用反式氯米芬來治療繼發性性腺機能減退的男性提供了新的途徑，這有可能可以抵消外源性治療如Androgel的一個主要副作用。外源性治療提供了負反饋從而減少FSH和LH的產生。FSH是必要的生殖激素，在雄性動物中刺激精子產生。長期暴露于外源性睪酮，因為其對FSH生成的影響，引起精子合成的減少。導致了由于精子數量引起的暫時不育癥的可能，因此結果是睪丸皺縮，因為睪丸的體積與輸精管內精子發生的水平相關。FSH水平的升高也表明AndroxalTM可用于治療男性不育癥，包括性腺機能減退的男性。而且，AndroxaFM對血清睪酮、FSH和LH水平的長時間影響顯示可以變化的劑量或按照時序安排施用Androxal,或許允許非每日或偶爾式的治療。權利要求1.將包含0％到大約29％w/w的順式-氯米芬和大約100％到71％反式-氯米芬或其類似物的組合物對需要治療的患者施用的方法，包括給予所述患者單次劑量的所述組合物，該劑量在3到30天的時期內引起了藥理學有效的血液睪酮水平。2.權利要求1的方法，其中，組合物基本由包含反式-氯米芬或其類似物組成。3.權利要求1的方法，其中，單次劑量為約5到約100mg。4.權利要求3的方法，其中，單次劑量為約12.5到約50mg。5.權利要求4的方法，其中，單次劑量為12.5、25或50mg。6.權利要求1的方法，其中，該時期為約7到約15天。7.權利要求6的方法，其中，該時期為約10到約12天。8.權利要求1的方法，其中，患者需要提高睪酮水平。9.權利要求1的方法，其中，患者需要降低膽固醇水平。10.權利要求1的方法，其中，患者需要增加肌肉量。11.權利要求1的方法，其中，患者患有脂肪營養障礙。12.權利要求1的方法，其中，患者需要提高淋巴細胞水平。13.權利要求1的方法，其中，患者需要降低甘油三酯水平。14.權利要求1的方法，其中，患者患有良性前列腺肥大。15.權利要求4的方法，其中，患者患有前列腺癌。16.權利要求1的方法,其中,患者患有與雄性性腺機能減退相關的病癥。17.權利要求16的方法，其中,病癥是肌肉量減少。18.權利要求16的方法,其中,病癥是身體性能缺陷。19.權利要求16的方法，其中,病癥是骨密度降低。20.權利要求16的方法,其中，病癥是性欲減少。21.權利要求16的方法,其中,病癥是能力降低。22.權利要求16的方法，其中，病癥是良性前列腺增生減少。23.權利要求16的方法，其中，病癥是不育癥。全文摘要本發明涉及包含ww-氯米芬的組合物在治療男性性腺機能減退中的應用。本發明還涉及治療男性性腺機能減退和其相關病癥的方法，包括肌肉量減少、身體性能缺陷、骨密度降低、性欲減少、能力降低、良性前列腺增生減少和不育癥。文檔編號A61K31/137GK101163467SQ200680008984公開日2008年4月16日申請日期2006年3月17日優先權日2005年3月22日發明者J·波多爾斯基申請人:雷普羅斯治療公司