專利名稱：三氮唑并嘧啶類衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及三氮唑并嘧啶類衍生物，以及以該衍生物為活性成分的藥物組合物，以及其在用于治療和/或預防各種腫瘤疾病的藥物中的用途。
背景技術：
惡性腫瘤是一種嚴重危害人類健康的常見病和多發病，它所引起的死亡率在所有疾病死亡率中排第二位，僅次于心腦血管疾病。經過幾十年的研究，腫瘤治療已經取得了相當的進步，腫瘤患者生存時間明顯延長，特別是對白血病、惡性淋巴瘤等的治療有了突破，然而，對危害人類生命健康最嚴重的、占惡性腫瘤90％以上的實體瘤的治療仍未能達到滿意的效果。到目前為止，臨床上使用的大多數抗癌藥物為細胞毒制劑，這類藥物有著不可避免的缺點，如低選擇性、毒副作用強和易產生抗藥性等。
為尋找新的抗腫瘤藥物，本發明人合成了一系列的三氮唑并嘧啶類衍生物，經體外抗腫瘤活性篩選，發現該類衍生物具有較強的抗腫瘤活性，從而完成了本發明。

發明內容
本發明涉及定義如下的一種通式I的化合物， 其中R1為氫、C1-C6烷基；Z為一個直接鍵或C1-C6亞烷基；m為1-6之間的整數；Ar1為苯基、萘基或5-10元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar1可任選的由1-3個相同或不同的R2取代；R2選自氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亞磺?；?、C1-C4烷基磺?；?、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基?；?、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲?；?、氨基磺?；-C1-C4烷基氨基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺?；?、C1-C3亞烷基二氧基，以及嗎啉基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、咪畔烷基和吡唑烷基的飽和雜環基，其中所述飽和雜環基可以帶有1-2個選自氧代、羥基、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、三氟甲基和硝基的取代基；Q為-Y-(CH2)n-Ar2，或者為 其中n為0-6之間的整數；Y選自-S-， Ar2選自苯基、萘基或5-10元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代；R5選自氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N-C1-C4烷基氨基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亞磺?；1-C4烷基磺?；?、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基?；被柞；?、N-C1-C4烷基氨基甲酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氮基磺?；，N-二C1-C4烷基氨基磺?；?，或者R5為 ；其中R6和R7相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C6烷基和C3-C6環烷基，它們可以被1-3個相同或不同的R2任選取代，或R6和R7與和它們所連接的氮原子一起形成5-10元飽和雜環基，所述飽和雜環基除了與R6和R7連接的氮原子外，可以含有1-3個選自O、N和S的雜原子，可以被1～3個相同或不同的R2任選取代；R3和R4相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C10烷基、C3-C7環烷基、C2-C10烯基和C2-C10炔基，它們可以被1-3個相同或不同的R2任選取代；或R3和R4與和它們所連接的氮原子一起形成5-10元雜環基，所述雜環基除了與R3和R4連接的氮原子外，可以含有1-4個選自N、O和S的雜原子，除了R3和R4所連接的氮原子外，所述雜環基任選包括1或2個碳碳雙鍵或叁鍵，可以被1～3個相同或不同的R2任選取代。
所述通式I的化合物，包括其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物。
本發明優選涉及定義如下的通式I的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其特征在于
Ar1為苯基，且Ar1可任選1-3個相同或不同的R2取代；Ar2為5-10元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代。
本發明優選涉及定義如下的通式I的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其特征在于R1為C1-C4烷基；Z為一個直接鍵；Ar1為苯基，且Ar1可任選1-3個相同或不同的R2取代；m為1-4之間的整數；Q為-Y-(CH2)n-Ar2；n為0-4之間的整數；Y為-S-， Ar2為5元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代；本發明更優選涉及定義如下的通式I的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其特征在于R1為C1-C4烷基；Z為一個直接鍵；m為1-4之間的整數；Ar1為苯基，且Ar1可任選1-3個相同或不同的R2取代；Q為-Y-(CH2)n-Ar2；n為0-4之間的整數；Y為-S-， Ar2為5元雜芳基，所述雜芳基可以含有1個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代；R3和R4相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C10烷基、C3-C7環烷基、C2-C10烯基和C2-C10炔基；或R3和R4與和它們所連接的氮原子一起形成5-6元雜環基，所述雜環基除了與R3和R4連接的氮原子外，可以含有1-4個選自N、O和S的雜原子，除了R3和R4所連接的氮原子外，所述雜環基任選包括1或2個碳碳雙鍵或叁鍵，可以被1～3個相同或不同的R2任選取代；R2為氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N，N-二C1-C4烷基氨基、(C1-C4)烷基硫基、C1-C4烷基亞磺酰基、C1-C4烷基磺?；?、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基?；?、氨基甲酰基、N-C1-C4烷基氨基甲?；，N-二C1-C4烷基氨基甲?；?、氨基磺?；?、N-C1-C4烷基氨基磺?；?、N，N-二C1-C4烷基氨基磺?；?、C1-C3亞烷基二氧基，以及選自嗎啉基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、咪唑烷基和吡唑烷基的飽和雜環基，并且該飽和雜環基可以帶有1-2個選自氧代、羥基、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、三氟甲基和硝基的取代基；R5為氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N-C1-C4烷基氨基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亞磺?；?、C1-C4烷基磺酰基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基?；被柞；?、N-C1-C4烷基氨基甲?；，N-二C1-C4烷基氨基甲?；被酋；?、N-C1-C4烷基氨基磺?；?、N，N-二C1-C4烷基氨基磺?；蛘逺5為 R6和R7相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C6烷基和C3-C6環烷基，它們可以被1-3個相同或不同的R2任選取代，或R6和R7與和它們所連接的氮原子一起形成5-10元飽和雜環基，所述飽和雜環基除了與R6和R7連接的氮原子外，可以含有1-3個選自O、N和S的雜原子，可以被1～3個相同或不同的R2任選取代。
本發明更優選涉及定義如下的通式I的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其特征在于Ar2為呋喃基，且在5位上被 取代；R6、R7相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環烷基，或R6和R7與和它們所連接的氮原子一起形成吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、噻唑啉基和N-(C1-C4)烷基哌嗪基。
本發明非常優選涉及定義如下的通式I的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其特征在于n為1，Ar2為呋喃-2-基，且在5位上被 取代；-NR6R7選自二甲氨基、甲基異丙基氨基、二乙氨基、吡咯烷基、N-甲基哌嗪基、哌啶基和嗎啉基。
本發明更優選涉及定義如下的通式I的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其特征在于Ar1為苯基，且Ar1可任選1-3個相同或不同的R2取代；R2為氫、鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基。
本發明特別優選如下的權利要求1的通式I的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其結構是N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-異丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，4-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋哺-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；
N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
而且，按照本發明所屬領域的一些通常方法，本發明的上式I的化合物三氮唑并嘧啶類衍生物可以與酸生成它的藥學上可接受的鹽。酸可以包括無機酸或有機酸，與下列酸形成的鹽是特別優選的鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、灑石酸、苯磺酸、苯甲酸或對甲苯磺酸等。
本發明的化合物可以以立體異構體形式存在，這些立體異構形式可以是對映體或非對映體。本發明既涉及對映體或非對映體，也涉及它們各自的混合物，象非對映體一樣，可按照自身已知的方法將外消旋形式分離成為立體異構的單一組分。
此外，本發明還包括本發明的化合物的前藥。依據本發明，前藥是通式I的化合物的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性或甚至沒有活性，但是在給藥后，在生理條件下(例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉化成相應的生物活性形式。
除非另外指出，本發明所用的術語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘；“烷基”是指直鏈或支鏈的烷基；“亞烷基”是指直鏈或支鏈的亞烷基；“環烷基”是指取代或未取代的環烷基；“雜芳基”包括含有一個或多個選自O、N和S的雜原子，其中每個雜芳基的環狀體系可以是單環或多環的，環狀體系是芳香性的，可以舉出例如咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、(1，2，3)-和(1，2，4)-三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、吲哚基、喹啉基等；飽和雜環基包括含有一個或多個選自O、N和S的雜原子，環狀體系可以是單環或多環的，可以舉出例如吡咯烷基、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、咪唑烷基和噻唑啉基等。
本發明的特定的化合物可具有不對稱中心，因此以不同的對映體和非對映體的形式存在。本發明涉及本發明的化合物的所有旋光異構體、消旋體及其混合物?！跋w”是指含有等量的一對對映異構體的混合物。
本發明包括藥物組合物，該組合物含有上式I的化合物，及其分離或混合物形式的順式或反式異構體，其對映體或非對映異構體或消旋體，或其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物作為活性成分，以及藥學上可接受的賦型劑。所述藥學上可接受的賦型劑是指任何可用于藥學領域的稀釋劑、輔助劑和/或載體。本發明的衍生物可以與其他活性成分組合使用，只要它們不產生其他不利的作用，例如過敏反應。
本發明的藥物組合物可配制成若干種劑型，其中含有藥學領域中常用的一些賦形劑；例如，口服制劑(如片劑，膠囊劑，溶液或混懸液)；可注射的制劑(如可注射的溶液或混懸液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制劑(例如軟膏或溶液)。
用于本發明藥物組合物的載體是藥學領域中可得到的常見類型，包括口服制劑用的粘合劑、潤滑劑、崩解劑、助溶劑、稀釋劑、穩定劑、懸浮劑、無色素、矯味劑等；可注射制劑用的防腐劑、加溶劑、穩定劑等；局部制劑用的基質、稀釋劑、潤滑劑、防腐劑等。藥物制劑可以經口服或胃腸外方式(例如靜脈內、皮下、腹膜內或局部)給藥，如果某些藥物在胃部條件下是不穩定的，可將其配制成腸衣片劑。
我們已發現本發明的通式I的化合物具有抑制腫瘤細胞生長的活性，因此本發明化合物可以用于提供抗增生作用的腫瘤疾病的的治療，可以用作制備治療和/或預防各種腫瘤疾病的藥物，如肺癌、肝癌、胃癌、結腸癌、中樞神經系統癌、卵巢癌、宮頸癌、前列腺癌、乳腺癌、頭頸部鱗癌、食管癌、腎細胞癌、胰腺癌、膀胱癌和口腔癌等等。
根據本發明的衍生物可作為活性成分用于制備治療和/或預防各種腫瘤疾病，本發明也提供治療或預防上述疾病的方法，包括給予患有或易患有此病的病人治療有效量的根據本發明的的化合物。上式I的三氮唑并嘧啶類衍生物用于患者的臨床劑量必需依賴被治療的主體、給藥的具體途徑、被治療疾病的嚴重性而變化，而最佳劑量由治療具體患者的醫生確定。
本發明活性化合物可作為唯一的抗癌藥物使用，或者可以與一種或多種其它抗腫瘤藥物聯合使用。聯合治療通過將各個治療組分同時、順序或隔開給藥來實現。
下面合成路線1-2描述了本發明的通式I的化合物的制備，所有的原料都是通過這些示意圖中描述的方法、通過有機化學領域普通技術人員熟知的方法制備的或者可商購。本發明的全部最終的化合物都是通過這些示意圖中描述的方法或通過與其類似的方法制備的，這些方法是有機化學領域普通技術人員熟知的。這些示意圖中應用的全部可變因數如下文的定義或如權利要求中的定義。
按照本發明的通式I化合物，在路線1中，取代基如發明內容部分所定義，以化合物a為起始原料，在吡啶中與氨基胍碳酸鹽反應，得到化合物b再與烷酰乙酸乙酯環合，得到化合物c。繼而與然后與三氯氧磷發生氯代反應，制得化合物d。化合物d與取代的胺發生取代反應得到化合物e?；衔飁與胺進行取代反應，可制得化合物I-i?；衔飁與取代的硫醇或硫酚發生到代反應，可制得化合物f，繼而選擇不同的氧化劑制備得到化合物I-ii，I-iii和，I-iv。

按照本發明的通式I化合物，在路線2中，Q為-Y-(CH2)n-Ar2，Y為-S-， M為O，S，N，其它取代基如發明內容部分所定義，以按照路線1制得的化合物e為原料，與取代的硫醇f發生取代反應，制得化合物I-v，繼而與甲醛、HNR6R7進行Mannich反應，制得化合物I-vi，再選擇合適的氧化劑可以得到化合物I-vii和化合物I-viii。
本發明的另一個主題涉及通式II的化合物的制備方法，該方法包括在極性溶劑中，使通式III的化合物與甲醛、HNR6R7進行反應，式中，R1、Z、Ar1、m、n、R6、R7如前所述，Y為-S-。
此處，極性溶劑包括甲醇、乙醇、醋酸或者它們的水溶液等。
本發明的另一個主題涉及通式IV化合物的制備方法，該方法包括使通式V的化合物與化合物VI 在堿存在下反應，其中，R1、Z、Ar1、m、n，Ar2如前所述，X為鹵素，Y為-S-。
此處，堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉和碳酸鉀等。
以上通式II和通式VI化合物都是通式I化合物中的部分化合物。
本發明化合物的藥效學實驗數據列在本發明實施例中。
具體實施例方式
實施例旨在闡述而不是限制本發明的范圍。衍生物的核磁共振氫譜用BrukerARX-300測定，質譜用Agilent 1100 LC/MSD測定；所用試劑均為分析純或化學純。
實施例1N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-(二甲氨基)丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺鹽酸鹽的制備
(1)3-(3-氯丙基)-5-氨基-4H-[1，2，4]三氮唑的制備將4-氯丁酸61.3g(0.5mol)、氨基胍碳酸鹽65.0g(0.55mol)加入吡啶900mL中，加熱回流反應10h。反應畢，濃縮反應液，加入乙醇150mL，攪拌，抽濾，干燥，得到固體33.2g，收率41.5％。
(2)2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-羥基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶的制備將乙酰乙酸乙酯41.8g(0.25mol)、3-(3-氯丙基)-5-氨基-4H-[1，2，4]三氮唑33.2g(0.21mol)加至二氧六環500mL中，加熱回流反應10h。反應畢，冷卻，析出固體，抽濾，干燥，得固體42.1g，收率88.8％。
(3)2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-氯-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶的制備將2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-羥基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶42.1g(0.19mol)加至三氯氧磷133g(0.87mol)中，加熱回流反應3h。反應畢，將反應液濃縮，所得殘余液倒入冰水中，二氯甲烷(250mL×3)提取，合并有機相，水洗，干燥，蒸干，得固體42.5g，收率93.4％。
(4)7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶的制備將2-(3-氯丙基)-5-甲基-7-氯-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶5.0g(0.02mol)、3，5-二氟苯胺3.2g(0.024mol)加至甲醇100mL中，室溫反應3h。反應畢，將反應液靜置，冷卻，抽濾，干燥，得固體6.1g，收率90.4％。
(5)N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-(二甲氨基)丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺鹽酸鹽的制備將7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶2.5g(0.007mol)溶于DMF中，再分別加入30％二甲胺氨2.0g(0.014mol)、碳酸鉀2.0g(0.014mol)，于50℃反應8h，然后倒入水中，抽濾干燥得到產品1.8g，收率69％。
按照實施例1的方法，選擇合適的原料，可制得實施例2-10化合物(表1)。
表1實施例1-10化合物


實施例11 N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[(呋喃-2-基)甲硫基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺按照實施例1的中(1)、(2)、(3)、(4)的操作方法，可制得7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶。
將NaH 0.15g(0.006mol)于常溫下加入N，N-二甲基甲酰胺20mL中，然后將糠硫醇0.7g(0.006mol)加入上述混懸液中，5min后加入7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(3-氯丙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶2.0g(0.006mol)，然后于30℃反應5h，將反應液到倒入水中，攪拌，靜置，析出固體，得到實施例11化合物2.1g，收率85.4％。
選擇合適的原料，按照實施例11的制備方法，可制得實施例12-16化合物(表2)。
表2實施例11-16化合物

實施例17N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[2-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]乙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺鹽酸鹽的制備按照實施例1的中(1)、(2)、(3)、(4)的操作方法，可制得7-(3，5-二氟苯基氨基)-2-(2-氯乙基)-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶，然后按照實施例11的制備方法，可制得7-(3，5-二氟苯基氨基-2-[3-[(呋喃-2-基)甲硫基]乙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶。
將四氫吡咯0.5g(0.007mol)、甲醛0.3g(0.0036mol)依次加入冰乙酸中，于30℃攪拌10min，再加入N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[2-(呋喃-2-基甲硫基)乙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶1.0g(0.0024mol)，然后升溫至80℃，反應4h完畢，濃縮后加水，然后用飽和氫氧化鈉水溶液調pH至9，然后用氯仿50mL×3萃取，水洗，硫酸鎂干燥，濃縮，所得油狀物用丙酮溶解，然后滴加鹽酸乙醚，得到固體0.55g，收率60.7％。
按照實施例17的制備方法，可制得實施例18-65的化合物?；衔锩Q、結構式及MS、1H-NMR數據見表3。
表3實施例17-65化合物










實施例66N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[5-(吡咯烷-1-基)甲基-呋喃-2-基甲基亞磺酰基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺鹽酸鹽按照實施例17的制備方法，制得N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[5-(吡咯烷-1-基)甲基-呋喃-2-基甲硫基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
將上述化合物1.0g(0.002mol)溶于10mL冰乙酸中，加入30％過氧化氫0.23(0.002mol)，于室溫反應6h，再用飽和氫氧化鈉水溶液調pH至9，抽濾，干燥得到實施例66化合物0.8g，收率80％。
按照實施例66的制備方法，選擇合適的原料，可制得實施例67-68化合物。
表4實施例66-68化合物


實施例69N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲基磺酰基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺按照實施例17的制備方法，制得N-(3，5-二氟苯基)-2-[3-[5-(吡咯烷-1-基)甲基-呋喃-2-基甲硫基]丙基]-5-甲基-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
將上述化合物0.5g(0.001mol)溶于冰醋酸10mL中，再加入催化量的鎢酸鈉，然后將30％雙氧水1.1g(0.01mol)滴加到上述溶液中，室溫攪拌8h，再用飽和氫氧化鈉水溶液調pH至9，所得油狀物用氯仿提取、干燥、濃縮，再用柱層析分離得到產品0.2g，收率37.6％。
按照實施例69的方法，制得實施例70-71化合物(表5)。
表5實施例70-71化合物

體外抗腫瘤細胞活性測試(1)將人肝癌細胞Bel-7402、人纖維肉瘤細胞HT-1080、人肺癌細胞A549細胞復蘇并傳代2-3次穩定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其從培養瓶底部消化下來。將細胞消化液倒入離心管中而后加入培養液以終止消化。將離心管在1300r/min下離心3mins，輕輕棄去上清液后加入5mL培養液，吹打混勻細胞，吸取10uL細胞混懸液加入細胞計數板中計數，調整細胞濃度為104個/孔。96孔板中除A1孔為空白孔不加細胞外，其余皆加入100uL細胞混懸液。將96孔板放入培養箱中培養24h。
(2)用50μl二甲基亞砜溶解受試樣品，然后加入適量培養液，使樣品溶解成2mg/mL藥液。然后在24孔板中將樣品稀釋為16，8，4，2，1μg/mL。每個濃度加入3孔，其中周圍兩行兩列細胞長勢受環境影響較大，只作為空白細胞孔使用。將96孔板放入培養箱中培養24h。
(3)將96孔板中帶藥培養液棄去，用磷酸緩沖溶液(PBS)將細胞沖洗兩遍，在每孔中加入MTT(四氮唑)(0.5mg/mL)100uL放入培養箱中4h后，棄去MTT溶液，加入二甲基亞砜100uL。在磁力振蕩器上振蕩使存活細胞與MTT反應產物甲臜充分溶解，放入酶標儀中測定結果。通過Bliss法可求出藥物IC50值。
化合物的抑制人肝癌細胞Bel-7402、人纖維肉瘤細胞HT-1080、人肺癌細胞A549活性結果見下表(IC50活性數據單位為μmol/L)


從上述試驗結果可以清楚地看出，本發明所要保護的通式I的化合物，具有良好的抗腫瘤活性，相當或者優于已上市藥物Iressa和順鉑。
權利要求
1.一種通式I的化合物， 其中R1為氫、C1-C6烷基；Z為一個直接鍵或C1-C6亞烷基；m為1-6之間的整數；Ar1為苯基、萘基或5-10元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar1可任選的由1-3個相同或不同的R2取代；R2選自氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亞磺?；1-C4烷基磺?；1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基?；?、氨基甲?；?、N-C1-C4烷基氨基甲?；?、N，N-二C1-C4烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-C1-C4烷基氨基磺?；，N-二C1-C4烷基氨基磺?；?、C1-C3亞烷基二氧基，以及嗎啉基、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、咪唑烷基和吡唑烷基的飽和雜環基，其中所述飽和雜環基可以帶有1-2個選自氧代、羥基、鹵素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、三氟甲基和硝基的取代基；Q為-Y-(CH2)n-Ar2，或者為 其中n為0-6之間的整數；Y選自-S-， Ar2選自苯基、萘基或5-10元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代；R5選自氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、氨基、硝基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、N-C1-C4烷基氨基、N，N-二C1-C4烷基氨基、C1-C4烷基硫基、C1-C4烷基亞磺?；1-C4烷基磺?；1-C4烷氧基甲基、C1-C4烷基?；被柞；?、N-C1-C4烷基氨基甲?；，N-二C1-C4烷基氨基甲?；被酋；?、N-C1-C4烷基氨基磺酰基、N，N-二C1-C4烷基氨基磺?；蛘逺5為 其中R6和R7相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C6烷基和C3-C6環烷基，它們可以被1-3個相同或不同的R2任選取代，或R6和R7與和它們所連接的氮原子一起形成5-10元飽和雜環基，所述飽和雜環基除了與R6和R7連接的氮原子外，可以含有1-3個選自O、N和S的雜原子，可以被1～3個相同或不同的R2任選取代；R3和R4相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C10烷基、C3-C7環烷基、C2-C10烯基和C2-C10炔基，它們可以被1-3個相同或不同的R2任選取代；或R3和R4與和它們所連接的氮原子一起形成5-10元雜環基，所述雜環基除了與R3和R4連接的氮原子外，可以含有1-4個選自N、O和S的雜原子，除了R3和R4所連接的氮原子外，所述雜環基任選包括1或2個碳碳雙鍵或叁鍵，可以被1～3個相同或不同的R2任選取代。所述通式I的化合物，包括其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物。
2.權利要求1的化合物，其特征在于其中，Ar1為苯基，且Ar1可任選1-3個相同或不同的R2取代；Ar2為5-10元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代。
3.權利要求2的化合物，其特征在于其中，R1為C1-C4烷基；Z為一個直接鍵；Ar1為苯基，且Ar1可任選1-3個相同或不同的R2取代；m為1-4之間的整數；Q為-Y-(CH2)n-Ar2；其中n為0-4之間的整數；Y為-S-， Ar2為5元雜芳基，所述雜芳基可以含有1-4個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代。
4.權利要求3的化合物，其特征在于其中，Y為-S-， Ar2為5元雜芳基，所述雜芳基可以含有1個選自O、N和S的雜原子，且Ar2可任選1-3個相同或不同的R5取代。
5.權利要求1至4中任一項所述的化合物，其特征在于Ar2為呋喃基，且在5位上被 取代；R6和R7相同或不同，分別獨立地選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環烷基，或R6和R7與和它們所連接的氮原子一起形成吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、噻唑啉基和N-(C1-C4)烷基哌嗪基。
6.權利要求1至5中任一項所述的化合物，其特征在于n為1，Ar2為呋喃-2-基，且在5位上被 取代；-NR6R7選自二甲氨基、甲基異丙基氨基、二乙氨基、吡咯烷基、N-甲基哌嗪基、哌啶基和嗎啉基。
7.權利要求1至6中任一項所述的化合物，其特征在于Ar1為苯基，且Ar1可任選1-3個相同或不同的R2取代；R2為氫、鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基。
8.權利要求1的化合物，是以下化合物N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-異丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N-甲基-N-丙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，5-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3，4-二氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2，4-二氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二乙基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(4-三氟甲氧基苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(2-氟苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(哌啶-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-氯苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(吡咯烷-1-基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺；N-(3-溴苯基)-5-甲基-2-[3-[[5-(N，N-二甲基氨基甲基)-呋喃-2-基]甲硫基]丙基]-[1，2，4]三氮唑并[1，5-a]嘧啶-7-胺。
9.權利要求1的化合物的制備方法，其特征在于，其中的結構如下的通式II的化合物的制備包括以下步驟在極性溶劑中，使通式III的化合物與甲醛、HNR6R7進行反應， 其中，R1、Z、Ar1、m、n、R6、R7如權利要求1所定義，Y為-S-，
10.權利要求1的化合物的制備方法，其特征在于，其中的結構如下的通式通式IV的化合物的制備，包括以下步驟使通式V的化合物與 化合物VI在堿存在下反應， 其中，R1、Z、Ar1、m、n如權利要求1所定義，Y為-S-，其中，Ar2，n如權利要求1所定義，其中，R1、Z、Ar1、m如權利要求1所定義，X為鹵素，
11.一種藥用組合物，包含權利要求1-8中任何一項的化合物。
12.權利要求1-8中任何一項的化合物在制備治療和/或預防各種腫瘤疾病的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及通式I所示的三氮唑并嘧啶類衍生物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物，其中取代基R
文檔編號A61K31/519GK101016301SQ20071008025
公開日2007年8月15日 申請日期2007年2月15日 優先權日2007年2月15日
發明者史秀蘭 申請人:沈陽中海生物技術開發有限公司