專利名稱：獸用增效恩諾沙星注射液及其制備方法
技術領域：
本發明涉及獸用藥領域，特別涉及一種獸用增效恩諾沙星注射液，還涉及該注射液的制備方法。

背景技術：
恩諾沙星為動物專用的第三代氟喹諾酮類藥物，對多種細菌引起的感染有顯著療效，適用于牛、豬、禽、犬、貓和水生動物的敏感細菌及支原體所致的消化系統、呼吸系統、泌尿系統及皮膚軟組織的各種感染性疾病，主要用于巴氏桿菌、嗜血桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌、支原體等所引起的感染。
隨著近年來人們生活水平的提高，對肉食品的需求加大，規模化養殖場逐年增多，但很多養殖場的養殖環境并不理想，養殖技術和疾病防治技術也欠佳，濫用、亂用抗菌藥的現象非常普遍，導致恩諾沙星出現耐藥性，臨床使用劑量越來越大，恩諾沙星注射液的濃度也由最初的0.5％(g/mL)逐步發展到目前的10％(g/mL)。由于恩諾沙星在水中極微溶解，在氫氧化鈉試液中易溶，因此，現有技術中在制備恩諾沙星注射液時主要采用加入助溶劑氫氧化鈉的方法增加恩諾沙星在水中的溶解度，同時考慮到產品的穩定性和恩諾沙星產生殺菌作用的最佳條件，控制注射液的pH值為9.5～10.5(農業部部頒標準1996年第一冊)。但生產實踐中發現，該方法在制備高濃度即5％～10％(g/mL)的恩諾沙星注射液時存在制備難度大、產品穩定性和抗凍性差等問題隨著恩諾沙星濃度增大，使其完全溶解于水中所需的氫氧化鈉量也增大，此時要將注射液的pH值控制在9.5～10.5非常困難，幾乎不能做到；即使提高注射液pH值至11.5，產品也極不穩定，0℃冷藏1～2小時即析出結晶，且該結晶當溫度升高時不能復溶，在北方冬季寒冷條件下使用極其不便。此外，單方恩諾沙星注射液在治療畜禽細菌、病毒及支原體嚴重混合感染時，還存在抗病毒效果不理想等問題。


發明內容
有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種獸用增效恩諾沙星注射液，不僅可以解決高濃度恩諾沙星注射液制備難度大、產品穩定性和抗凍性差的難題，而且可以大大增強其抗菌和抗病毒效果，有效減少耐藥性的產生；目的之二在于提供一種所述獸用增效恩諾沙星注射液的制備方法，操作簡便，成本低，適于工業化大規模生產。
為達到上述目的，本發明采用如下技術方案 1、獸用增效恩諾沙星注射液，每100mL注射液由以下組分組成恩諾沙星5～10g、水楊酸鈉10～12g、板藍根20～40g的水提物、甲氧芐啶1～2g、聚乙二醇400 20～40g、氫氧化鈉0.1～1g、余量為注射用水；其中，恩諾沙星與甲氧芐啶的質量比為5∶1，甲氧芐啶與聚乙二醇400的質量比為1∶20。
進一步，所述注射液的pH值為9.5～11.5； 進一步，所述注射液的pH值為10.5～11.5。
2、所述獸用增效恩諾沙星注射液的制備方法，包括以下步驟 a、將水楊酸鈉溶于部分注射用水中，再加入恩諾沙星，攪拌使完全溶解，得溶液A； b、將板藍根粉碎過四號篩，加水煎煮3次，合并煎煮液，濾過，向濾液中加入質量體積分數為0.5％的殼聚糖，攪勻后靜置過夜，再用200目尼龍網濾過，濾液濃縮至20～40mL，得溶液B； c、在聚乙二醇400中加入甲氧芐啶，加熱攪拌使完全溶解，冷卻至室溫，得溶液C； d、將步驟a所得溶液A和步驟b所得溶液B混勻后加至步驟c所得溶液C中，用氫氧化鈉水溶液調節pH值為9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混勻，濾過，灌封，滅菌，即得獸用增效恩諾沙星注射液。
本發明注射液采用水楊酸鈉為恩諾沙星的助溶劑。與氫氧化鈉相比，水楊酸鈉具有助溶效果好，堿度穩定易控等優點，可以方便地將注射液的pH值控制在9.5～11.5之間，同時保證產品的穩定性。此外，水楊酸鈉還具有一定的解熱鎮痛作用。
本發明注射液將板藍根水提物與恩諾沙星配伍。板藍根為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥根，具有清熱解毒、涼血利咽的功效，為我國使用歷史悠久的傳統中藥，目前在臨床上常用于病毒性疾病及細菌感染性疾病，尤其在抗病毒方面療效確切。有關板藍根抗病毒化學成分的研究較少。綜合現有的研究成果表明，與板藍根抗病毒作用相關的成分主要集中在大極性部位，這與板藍根臨床應用以水提物為主相符。日本學者認為板藍根抗病毒成分為糖蛋白和多糖，且分離出單一分子量的抗病毒多糖，其研究結果還表明，板藍根多糖除有直接抗病毒作用外，還可促進抗流感病毒IgG抗體的生成，可作為抗病毒疫苗的佐劑。我國學者也研究發現，板藍根的抗病毒成分為其水提液中的凝集素成分，也有實驗結果證實有效部位為結合氨基酸。板藍根生物堿成分中的4(3H)-喹唑酮經藥理實驗證明具有抑制流感病毒、柯薩奇病毒的活性，還可顯著促進脾細胞增殖及刀豆蛋白誘導的淋巴細胞增殖。此外，研究報道，板藍根水浸液對枯草桿菌、金黃色葡萄球菌，八聯球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、副傷寒甲桿菌、痢疾桿菌、腸炎桿菌等都有抑制作用。
本發明注射液中還加入了甲氧芐啶和聚乙二醇400。甲氧芐啶是二氫葉酸還原酶抑制劑，因干擾葉酸代謝而抗菌，但其單獨應用對細菌作用弱，易產生耐藥性，臨床上多與其它藥物聯合應用，以增強抗菌強度，延緩耐藥性產生，有抗菌增效劑之稱。恩諾沙星是通過抑制細菌DNA螺旋酶和拓撲異構酶IV的活性阻斷細菌DNA復制來發揮抗菌效力。甲氧芐啶和恩諾沙星合用，可同時阻斷細菌生長繁殖所必需的核酸和蛋白質合成過程，使各自單一的抑菌效果轉變為共同的殺菌作用，從而大幅度提高抗菌效果，并有效減少抗藥菌株的出現。因甲氧芐啶水溶性差，本發明注射液采用聚乙二醇400作為甲氧芐啶的溶劑。文獻報道，聚乙二醇400能與水任意混合，理化性質穩定，可作注射用溶劑；此外，當溶液中含有20％(g/mL)以上的聚乙二醇400時，可使溶液的凝固點下降，從而能夠使本發明的注射液具有良好的抗凍性。
研究結果表明，當本發明注射液的pH值為10.5～11.5時，在冷藏或冷凍條件下的穩定性良好，且抗菌和抗病毒效果佳，因此，結合現有技術，本發明注射液的pH值控制在9.5～11.5之間，優選10.5～11.5。
本發明的有益效果在于本發明注射液將恩諾沙星和具有抗病毒作用的板藍根水提物配伍，并加入抗菌增效劑甲氧芐啶，同時采用水楊酸鈉作為恩諾沙星的助溶劑，聚乙二醇400作為甲氧芐啶的溶劑，不僅可以解決高濃度恩諾沙星注射液制備難度大、產品穩定性和抗凍性差的難題，而且可以大大增強其抗菌和抗病毒效果，有效減少耐藥性的產生，特別適用于畜禽細菌、病毒及支原體嚴重混合感染，具有廣譜、高效、療程短、標本兼治等特點。同時，本發明注射液的制備方法簡單，成本低，適于工業化大規模生產。



附圖為獸用增效恩諾沙星注射液的藥敏試驗結果，其中，“K88-A”為對照組，“K88-B”為實驗組，“1”表示原濃度藥液，“10”表示10倍稀釋藥液，“100”表示為100倍稀釋藥液。

具體實施例方式 為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發明的優選實施例進行詳細的描述。
實施例中使用的恩諾沙星(批號080107-1，以干燥品計含量為99.6％)購自浙江國邦藥業有限公司，水楊酸鈉(以干燥品計含量為99.5％)購自武漢銀河化工有限公司，聚乙二醇400(化學純)購自武漢鑫恒隆工貿有限責任公司，板藍根購自重慶市北碚區中醫院。
實施例1、5％(g/mL)獸用增效恩諾沙星注射液 配方恩諾沙星5.0g、水楊酸鈉10.0g、板藍根20.0g，甲氧芐啶1.0g，聚乙二醇40020.0g，氫氧化鈉0.1～0.5g，注射用水加至100mL； 制法包括以下步驟 a、將水楊酸鈉溶于注射用水40mL中，再加入恩諾沙星，攪拌使完全溶解，得溶液A； b、將板藍根粉碎過四號篩，加水煎煮3次，每次加入1倍量的水煎煮1小時，合并三次煎煮液，濾過，向濾液中加入質量體積分數為0.5％的殼聚糖(強陽離子型天然生物絮凝劑)，攪勻后靜置過夜，再用200目尼龍網濾過，除去淀粉、蛋白、鞣質和樹脂等雜質，濾液濃縮至30mL，得溶液B； c、在聚乙二醇400中加入甲氧芐啶，加熱攪拌使完全溶解，放冷至室溫，得溶液C； d、將步驟a所得溶液A和步驟b所得溶液B混勻后加至步驟c所得溶液C中，用氫氧化鈉水溶液調節pH值為9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混勻，用孔徑為0.45μm的微孔濾膜濾過，灌封，用溫度為120℃、壓力為0.15MPa的流通蒸氣25分鐘滅菌，即得。
實施例2、10％(g/mL)獸用增效恩諾沙星注射液 配方恩諾沙星10.0g、水楊酸鈉12.0g、板藍根40.0g，甲氧芐啶2.0g，聚乙二醇400 40.0g，氫氧化鈉0.5～1.0g，注射用水加至100mL； 制法與實施例1所述制法相同。
實施例3、10％(g/mL)對照單方恩諾沙星注射液 配方恩諾沙星10.0g，氫氧化鈉3.0g，注射用水加至100mL。
制法將氫氧化鈉2.0g溶于注射用水40mL中，再加入恩諾沙星，攪拌使完全溶解，用溶有氫氧化鈉1.0g的水溶液調節pH值為9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混勻，用孔徑為0.45μm的微孔濾膜濾過，灌封，用溫度為120℃、壓力為0.15MPa的流通蒸氣25分鐘滅菌，即得。
試驗例1、獸用增效恩諾沙星注射液的穩定性試驗 方法取實施例1～2的獸用增效恩諾沙星注射液和實施例3的對照單方恩諾沙星注射液，照中國獸藥典2005年版一部附錄獸藥穩定性試驗指導原則進行加速試驗，按市售包裝，在溫度為40±2℃、相對濕度為75±5％、照度為4500±500LX的條件下放置6個月，在試驗期間第1、2、3、6個月末分別取樣一次，對注射液的外觀性狀、pH值和含量(按標示百分含量計)進行檢測。
結果見表1。經過6個月加速試驗后，本發明注射液的外觀性狀、pH值和恩諾沙星含量均無明顯變化，而對照單方恩諾沙星注射液出現變色、pH值升高和恩諾沙星含量降低，說明本發明注射液的穩定性好于對照單方恩諾沙星注射液。
表1獸用增效恩諾沙星注射液的穩定性試驗結果
試驗例2、獸用增效恩諾沙星注射液的抗凍性試驗 方法取實施例1～2的獸用增效恩諾沙星注射液和實施例3的對照單方恩諾沙星注射液，按市售包裝，分別在0～5℃冷藏和-20±2℃冷凍條件下放置6個月，在試驗期間第1、2、3、6個月末分別取樣一次，對注射液的外觀性狀和冷凍后解凍情況(于10±2℃解凍)進行檢測。
結果見表2。經過6個月冷藏試驗后，本發明注射液的外觀性狀無明顯變化，而對照單方恩諾沙星注射液析出恩諾沙星結晶，且結晶隨放置時間延長逐漸增多。經過6個月冷凍試驗后，本發明注射液析出少量恩諾沙星結晶，該結晶在10±2℃解凍試驗時能夠很好的復溶，不影響注射液的使用；而對照單方恩諾沙星注射液出現溶液結冰和恩諾沙星結晶現象，且該結晶在10±2℃解凍試驗時不能復溶。上述結果表明本發明注射液的抗凍性好于對照單方恩諾沙星注射液。
表2獸用增效恩諾沙星注射液的抗凍性試驗結果

試驗例3、獸用增效恩諾沙星注射液的臨床試驗 方法選取患病動物，隨機分為實驗組、對照組和空白組，實驗組視動物種類及體重給予實施例1或2的獸用增效恩諾沙星注射液，對照組給予實施例3的對照單方恩諾沙星注射液，空白組給予生理鹽水；其中，①豬惡性痢疾(由致病性豬痢疾密螺旋體引起)實驗組給予實施例1的獸用增效恩諾沙星注射液，給藥劑量為每公斤體重10～20mg(以恩諾沙星計)，每日給藥2次，連續給藥2～3日，給藥方式為肌肉注射；②豬混感高熱(由豬圓環病毒、藍耳病毒、流感病毒、鏈球菌和副嗜血桿菌交叉混合感染引起)實驗組給予實施例2的獸用增效恩諾沙星注射液，給藥劑量為每公斤體重10～20mg(以恩諾沙星計)，每日給藥2次，連續給藥2～3日，給藥方式為肌肉注射；③奶牛乳房炎(由多種細菌、病毒和支原體混合感染引起)實驗組給予實施例2的獸用增效恩諾沙星注射液，給藥劑量為每個乳室250mg(以恩諾沙星計)，每日給藥1次，連續給藥2～3日，給藥方式為乳房灌注；④雞白痢(由雞白痢沙門氏菌感染引起)實驗組將實施例2的獸用增效恩諾沙星注射液按體積比為1∶1000加水稀釋后供停水3小時后的病雞自由飲用，每日給藥1～2次，連續給藥2～3日；對照組和空白組的給藥劑量和給藥方式與相應疾病的實驗組相同；治療開始后，每日記錄患病動物身體變化情況，治療2日后統計治療結果。
結果見表3。本發明注射液對豬惡性痢疾、豬混感高熱、奶牛乳房炎和雞白痢均有良好療效。
表3獸用增效恩諾沙星注射液的臨床試驗結果

試驗例4、獸用增效恩諾沙星注射液的藥敏試驗 方法挑取腸毒性大腸桿菌(從養豬場和養雞場的病豬、病雞上采集典型病料，經病原分離鑒定而得)培養物，劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，將滅菌的圓形不銹鋼小管(內徑6nm、外徑8nm、高10nm)放置于平板上，輕輕加壓，使其與平板接觸無空隙，每個平板放置6支小管，分別向小管中滴加原濃度藥液(以恩諾沙星計濃度為50mg/mL)、10倍稀釋藥液和100倍稀釋藥液，每個濃度藥液各加兩支小管，注意勿使藥液溢出小管，其中實驗組所用藥液為實施例1的獸用增效恩諾沙星注射液，對照組所用藥液為實施例3的對照單方恩諾沙星注射液，最后置37℃培養8～18小時，觀察抑菌圈直徑大小。
結果見附圖，由附圖可知，本發明的獸用增效恩諾沙星注射液對腸毒性大腸桿菌有更強的敏感性。
最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制，盡管通過參照本發明的優選實施例已經對本發明進行了描述，但本領域的普通技術人員應當理解，可以在形式上和細節上對其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權利要求書所限定的本發明的精神和范圍。
權利要求
1.獸用增效恩諾沙星注射液，其特征在于每100mL注射液由以下組分組成恩諾沙星5～10g、水楊酸鈉10～12g、板藍根20～40g的水提物、甲氧芐啶1～2g、聚乙二醇400 20～40g、氫氧化鈉0.1～1g、余量為注射用水；其中，恩諾沙星與甲氧芐啶的質量比為5∶1，甲氧芐啶與聚乙二醇400的質量比為1∶20。
2.根據權利要求1所述獸用增效恩諾沙星注射液，其特征在于所述注射液的pH值為9.5～11.5。
3.根據權利要求2所述獸用增效恩諾沙星注射液，其特征在于所述注射液的pH值為10.5～11.5。
4.權利要求1所述獸用增效恩諾沙星注射液的制備方法，其特征在于包括以下步驟
a、將水楊酸鈉溶于部分注射用水中，再加入恩諾沙星，攪拌使完全溶解，得溶液A；
b、將板藍根粉碎過四號篩，加水煎煮3次，合并煎煮液，濾過，向濾液中加入質量體積分數為0.5％的殼聚糖，攪勻后靜置過夜，再用200目尼龍網濾過，濾液濃縮至20～40mL，得溶液B；
c、在聚乙二醇400中加入甲氧芐啶，加熱攪拌使完全溶解，冷卻至室溫，得溶液C；
d、將步驟a所得溶液A和步驟b所得溶液B混勻后加至步驟c所得溶液C中，用氫氧化鈉水溶液調節pH值為9.5～11.5，再添加注射用水至100mL，混勻，濾過，灌封，滅菌，即得獸用增效恩諾沙星注射液。
全文摘要
本發明涉及獸用藥領域，特別涉及一種獸用增效恩諾沙星注射液，每100mL注射液由以下組分組成恩諾沙星5～10g、水楊酸鈉10～12g、板藍根20～40g的水提物、甲氧芐啶1～2g、聚乙二醇400 20～40g、氫氧化鈉0.1～1g、余量為注射用水；其中恩諾沙星與甲氧芐啶的質量比為5∶1，甲氧芐啶與聚乙二醇400的質量比為1∶20；該注射液的穩定性和抗凍性好，抗菌和抗病毒效果佳，并能有效減少耐藥性的產生，特別適用于畜禽細菌、病毒及支原體嚴重混合感染；本發明還涉及該注射液的制備方法，具有操作簡便、成本低等優點。
文檔編號A61K31/496GK101810666SQ20101015463
公開日2010年8月25日 申請日期2010年4月23日 優先權日2010年4月23日
發明者陳力, 肖國君, 楊大成, 徐興然 申請人:重慶金邦動物藥業有限公司