專利名稱：通過監(jiān)測peg化尿酸酶治療期間的血清尿酸預(yù)測輸液反應(yīng)風(fēng)險和抗體介導(dǎo)的響應(yīng)喪失的 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及監(jiān)測PEG化尿酸酶治療期間的免疫原性和輸液反應(yīng)的方法。
背景技術(shù)：
在本申請的全篇中，文中引用了各種出版物。為了更充分地說明截至本文所描述和請求保護(hù)的發(fā)明之日為止本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的現(xiàn)有技術(shù)，在此通過引用將這些出版物公開的全文內(nèi)容并入本申請。痛風(fēng)是尿酸鹽代謝的慢性失調(diào)，其導(dǎo)致在關(guān)節(jié)和軟組織中沉積尿酸單鈉結(jié)晶，伴隨炎癥并最終在有的患者中導(dǎo)致破壞性的慢性關(guān)節(jié)炎。痛風(fēng)在男性中是關(guān)節(jié)炎的最普遍形式，并且在男女兩種性別的老年人中的發(fā)病率和流行程度正在增加。常規(guī)療法難以治療的慢性痛風(fēng)(GRT)是進(jìn)行性痛風(fēng)的不常見但是嚴(yán)重的后果，其是由于對通過降低和維持血清尿酸鹽水平在亞飽和范圍內(nèi)而防止尿酸鹽結(jié)晶沉積的現(xiàn)有治療表現(xiàn)出不耐受或難醫(yī)治。升高的血清尿酸鹽是痛風(fēng)的標(biāo)志性生物化學(xué)標(biāo)記。持續(xù)升高的血漿尿酸(PUA)和血清尿酸(SUA)水平導(dǎo)致尿酸沉積在關(guān)節(jié)和軟組織中。隨著尿酸的身體總負(fù)荷增加，導(dǎo)致痛風(fēng)的體征和癥狀，包括關(guān)節(jié)炎，特征在于反復(fù)發(fā)作的疼痛性痛風(fēng)紅腫、痛風(fēng)石和關(guān)節(jié)畸形的發(fā)生并伴隨由此產(chǎn)生的慢性疼痛/炎癥、和隨之發(fā)生的生理功能的喪失。成功的PEG化尿酸酶治療的療效終點是CGR患者的血清尿酸水平正常化，同時保持低免疫原性特征和與靜脈注射PEG化尿酸酶有關(guān)的輸液反應(yīng)風(fēng)險低。然而，鑒于PEG化尿酸酶作用的喪失和輸液反應(yīng)會伴隨著PEG化尿酸酶的施用，應(yīng)當(dāng)建議臨床醫(yī)生關(guān)于停止治療的適當(dāng)時間點。因此，現(xiàn)有技術(shù)中需要指導(dǎo)臨床醫(yī)生何時停止PEG化尿酸酶治療以便使輸液反應(yīng)及其相關(guān)安全風(fēng)險最小化的新方法。
發(fā)明概要本發(fā)明提供防止患者在PEG化尿酸酶治療期間的輸液反應(yīng)的方法，其包括步驟a)給所述患者施用PEG化尿酸酶；b)從所述患者獲取生物樣品；c)測定所述生物樣品中的尿酸水平；和(1)當(dāng)所述尿酸水平高于約4mg/dl時，表明可以停止治療以防止輸液反應(yīng)。在本發(fā)明的一個方面中，可以在所述尿酸水平高于約5mg/dl時停止PEG化尿酸酶治療。在本發(fā)明的另一個方面中，可以在所述尿酸水平高于約6mg/dl時停止PEG化尿酸酶治療，并且在本發(fā)明的又一個方面，可以在所述尿酸水平高于約7mg/dl時停止PEG化尿酸酶治療。在本發(fā)明的另一方面中，施用PEG化尿酸酶的劑量為每2周約8mg。在一個實施方式中，施用PEG化尿酸酶的劑量為每3周約8mg。在另一個實施方式中，施用PEG化尿酸酶的劑量為每4周約8mg。在又一個實施方式中，施用PEG化尿酸酶的劑量為每2周約4mg。在又一個實施方式中，施用PEG化尿酸酶的劑量為每4周約12mg。本發(fā)明的方法供用于選自血液、血清和血漿的生物樣品。在一個實施方式中，在如步驟(a)所述施用后至少2小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。在另一個實施方式中，在如步驟(a)所述施用后至少6小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。在又一個實施方式中，在如步驟(a)所述施用后至少24小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。在又一個實施方式中，在如步驟(a)所述施用后2周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。在又一個實施方式中，在如步驟(a)所述施用后4周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。本發(fā)明的方法涉及患有痛風(fēng)的患者。在一個實施方式中，所述痛風(fēng)是難治性的。在另一實施方式中，所述痛風(fēng)是慢性的或痛風(fēng)石性的。 在又一個實施方式中，經(jīng)靜脈施用PEG化尿酸酶。本發(fā)明的方法預(yù)測用PEG化尿酸酶治療的患者是否會發(fā)生輸液反應(yīng)，其中該方法包括步驟a)向所述患者施用PEG化尿酸酶；b)從所述患者獲取生物樣品；c)測定所述生物樣品中的尿酸水平；和(1)當(dāng)所述水平維持在低于約4mg/dl時,表明該尿酸水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)測得所述水平是至少約4mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。在本發(fā)明的一個方面中，當(dāng)所述水平維持在低于約5mg/dl時，所述尿酸水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)測得所述水平是至少約5mg/dl時，所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。在本發(fā)明的另一個方面中，當(dāng)所述水平維持在低于約6mg/dl時，所述尿酸水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)測得所述水平是至少約6mg/dl時,所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。在本發(fā)明的又一個方面中，當(dāng)所述水平維持在低于約7mg/dl時，所述尿酸水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)測得所述水平是至少約7mg/dl的時間點時，所述的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。在本發(fā)明的另一個方面中，在如步驟(a)所述的施用后至少3天測定所述生物樣品中的尿酸水平。在本發(fā)明的另一個方面中，在如步驟(a)所述的施用后至少I周測定所述生物樣品中的尿酸水平。在本發(fā)明的另一個方面中，在如步驟(a)所述的施用后至少2周測定所述生物樣品中的尿酸水平。在本發(fā)明的另一個方面中，在如步驟(a)所述的施用后至少4周測定所述生物樣品中的尿酸水平。本發(fā)明的方法預(yù)測用PEG化尿酸酶治療的患者是否會發(fā)生抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除，其不需要測定抗PEG化尿酸酶和抗PEG抗體的效價，其中該方法包括步驟a)向所述患者施用PEG化尿酸酶；b)從所述患者獲取生物樣品；c)測定所述生物樣品中的尿酸水平；和d)當(dāng)所述水平維持在低于約4mg/dl時,表明該尿酸水平對應(yīng)于較低的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性，或者，當(dāng)測得所述尿酸水平是至少約4mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性。在本發(fā)明的一個方面中，當(dāng)所述水平維持在低于約5mg/dl時，所述尿酸水平與對應(yīng)于較低的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性，或者，在某一時間點測得所述尿酸水平是至少約5mg/dl的時間點時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性。在本發(fā)明的另一個方面中，當(dāng)所述水平維持在低于約6mg/dl時，所述尿酸水平對應(yīng)于較低的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性，或者，在在某個時間點測得所述尿酸水平是至少約6mg/dl的時間點時,表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性。在本發(fā)明的又一個方面，當(dāng)所述水平維持在低于約7mg/dl時，所述尿酸水平對應(yīng)于較低的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性，或者，在某一時間點測得所述尿酸水平是至少約7mg/dl的時間點時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性。在本發(fā)明的另一個方面，在如步驟(a)所述的施用后至少3天測定所述生物樣品中的尿酸水平。在本發(fā)明的另一個方面中，在如步驟(a)所述的施用后至少I周測定所述生物樣品中的尿酸水平。在本發(fā)明的另一個方面中，在如步驟(a)所述的施用后至少2周測定所述生物樣品中的尿酸水平。在本發(fā)明的另一個 方面中，在如步驟(a)所述的施用后至少4周測定所述生物樣品中的尿酸水平。


圖I顯示每2周接受聚乙二醇重組尿酸酶(pegloticase)的患者中抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的平均效價。圖2顯示每2周施用聚乙二醇重組尿酸酶組的時間-濃度曲線。圖3顯示每2周施用聚乙二醇重組尿酸酶組的抗體效價和AUC之間的關(guān)系。圖4顯示每2周施用聚乙二醇重組尿酸酶組在第一次檢測到響應(yīng)喪失時的SUA值。圖5顯示每2周施用聚乙二醇重組尿酸酶組在響應(yīng)喪失時的抗PEG化尿酸酶抗體的效價。圖6顯示每4周施用聚乙二醇重組尿酸酶組的時間-濃度曲線。發(fā)明詳述定義根據(jù)本詳述，應(yīng)用下列縮寫和定義。必須指出，在本文中使用時，除本文另外明確規(guī)定外，不帶數(shù)量指示的指示對象包括多個指示對象。已經(jīng)出乎意料地發(fā)現(xiàn)，監(jiān)測SUA水平預(yù)測PEG化尿酸酶治療期間抗體介導(dǎo)的響應(yīng)喪失和大多數(shù)的輸液反應(yīng)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多數(shù)輸液反應(yīng)發(fā)生于SUA響應(yīng)喪失后。因此，常規(guī)監(jiān)測SUA可以用于預(yù)測性鑒別接受PEG化尿酸酶的患者不再受益于治療并存在較大的輸液反應(yīng)風(fēng)險。本文所用的術(shù)語“療效”指具體治療方案的效力。具體地，將療效定義為實現(xiàn)血清尿酸鹽水平少于或約為6mg/dl，這包括效力、毒性(例如，副作用和患者對制劑或劑量單位的耐受性)、患者依從性等的平衡。本文所用的術(shù)語“治療”等指獲取所期望的藥理和生理作用。該作用可以是預(yù)防性的，即防止或部分防止疾病、其癥狀、或其病情，和/或可以是治療性的，即部分或全部治愈疾病、病情、癥狀、或疾病導(dǎo)致的不良作用。在本文中使用時，術(shù)語“治療”涵蓋哺乳動物、如人類的疾病的任何治療，并包括(a)防止可能易感疾病但還沒有被診斷為患有該疾病的患者發(fā)生該疾病，即，致使疾病的臨床癥狀不在可能易感該疾病但還沒有出現(xiàn)或表現(xiàn)該疾病的癥狀的患者的體內(nèi)發(fā)生；(b)抑制疾病，即，遏制或減緩疾病或其臨床癥狀的發(fā)生；和(C)減輕疾病，即，致使疾病和/或其癥狀或病情的消退。設(shè)想了治療患有與病理性炎癥有關(guān)的疾病的患者，也設(shè)想了防止、抑制或減輕由長期病理性炎癥產(chǎn)生的和/或由對生物系統(tǒng)中存在的不適當(dāng)炎癥的長期生理響應(yīng)導(dǎo)致的不良作用。本文所用的術(shù)語“免疫原性”指通過注入PEG修飾的或未修飾的尿酸酶制劑(抗原)誘導(dǎo)免疫響應(yīng)，而“抗原性”指抗原與預(yù)先存在的抗體的反應(yīng)。總的來說，抗原性和免疫原性統(tǒng)稱為“免疫反應(yīng)性”。在以前對PEG化尿酸酶的研究中，用各種方法評估免疫反應(yīng)性，包括I) PEG化尿酸酶與預(yù)先形成的抗體的體外反應(yīng)；2)誘導(dǎo)抗體合成的測定；和3)反復(fù)注入后PEG化尿酸酶的清除速率加快。本文所用的術(shù)語“輸液反應(yīng)”指發(fā)生于PEG 化尿酸酶或安慰劑輸注后2小時內(nèi)、不能夠合理地歸因于其它原因的不希望有的和非計劃中的PEG化尿酸酶作用。尤其是，不良藥物反應(yīng)發(fā)生于預(yù)防、診斷或治療所用的劑量下。本發(fā)明的PEG化尿酸酶接合物可用于降低哺乳動物、優(yōu)選人類的體液和組織中的尿酸水平，且因此可以用于治療與包括痛風(fēng)、痛風(fēng)石、腎功能不全、器官移植和惡性疾病的病情有關(guān)的尿酸水平升高。可以經(jīng)由包括靜脈、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)和腹膜內(nèi)途徑的許多途徑中的任一種，將PEG化尿酸酶接合物注入尿酸水平過多的哺乳動物。在一個實施方式中，用可藥用的賦形劑或稀釋劑每兩周施用8mgPEG化尿酸酶。在另一個實施方式中，可以每四周施用8mg PEG化尿酸酶。在又一個實施方式中，可以每三周施用8mg PEG化尿酸酶。在本發(fā)明的另一個方面中，可以每兩周施用4mg PEG化尿酸酶。在本發(fā)明的又一個實施方式中，可以每四周施用12mg PEG化尿酸酶.可以用常規(guī)技術(shù)，例如，如Gennaro, A R(著)(1990)Remington ' sPharmaceutical Sciences, 18th Edition Easton, Pa. Mack Publishing Co.中所述，制備含有PEG化尿酸酶的藥物制劑。用于制備注射液的適合的賦形劑包括，例如，磷酸鹽緩沖鹽水、乳酸林格液、水、多元醇和甘油。用于腸外注射的藥物組分包括可藥用的無菌水性或非水性液體、分散液、懸浮液或乳液以及在使用前復(fù)溶成無菌注射液或分散液的無菌粉末。這些制劑可以含有其它的組分，如，舉例來說，防腐劑、助溶齊 、穩(wěn)定齊 、潤濕齊 、乳化齊 、緩沖劑、抗氧化劑和稀釋劑。也可以將PEG化尿酸酶提供為控釋劑，以植入到個體中持續(xù)控制體液中升高的尿酸水平。例如，聚乳酸、聚羥基乙酸、再生膠原、聚L-賴氨酸、海藻酸鈉、結(jié)冷膠、殼聚糖、瓊脂糖、多層脂質(zhì)體和許多其它常規(guī)儲庫型制劑構(gòu)成可以與生物活性組分調(diào)配的可生物腐蝕或可生物降解材料。這些材料在被植入或注入時，逐漸分解并釋放活性物質(zhì)到周圍組織。例如,一種包封聚乙二醇化尿酸酶的方法包括美國專利No. 5，653，974中所述的方法，在此通過參考將其引入。本發(fā)明特別設(shè)想了使用可生物腐蝕的、可生物降解的和其它儲庫型制劑。使用輸液泵和基質(zhì)包容系統(tǒng)遞送PEG化尿酸酶也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。PEG化尿酸酶也可以有利地用膠束或脂質(zhì)體包埋。在現(xiàn)有技術(shù)中脂質(zhì)體包封技術(shù)是公知的，見，例如Lasic，D，et al.,(著)(1995) Stealth Liposomes. Boca Raton, Fla. CRC Press。PEG化尿酸酶中所用的尿酸酶可以含有在氨基端或羧基端或氨基和羧基兩端截去約1-13個氨基酸的哺乳動物尿酸酶氨基酸序列，且可以進(jìn)一步含有在約第46位的氨基酸取代。如在此通過參考而將其全文并入本文的共同處于審查階段的PCT/US2006/013660和美國臨時申請Ser. No. 60/670, 573中所述，截短的尿酸酶還可以含有氨基端氨基酸，其中所述氨基端氨基酸是丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、絲氨酸、或蘇氨酸。如實施例所述完成了 3期研究。在本發(fā)明的一個方面中，選擇尿酸正常化為至少約3. 5mg/dL作為反映PEG化尿酸酶的藥效作用的主要結(jié)果度量。在本發(fā)明的另一個方面中，選擇尿酸正常化為至少約4. Omg/dL作為反映PEG化尿酸酶的藥效作用的主要結(jié)果度量。在本發(fā)明的又一個方面中，選擇尿酸正常化為至少約5. Omg/dL作為反映PEG化尿酸酶的藥效作用的主要結(jié)果度量。在本發(fā)明的又一個方面中，選擇尿酸正常化為至少約6. Omg/dL作為反映PEG化尿酸酶的藥效作用的主要結(jié)果度量。在本發(fā)明的另一個方面中，選擇尿酸正常化為至少約7. Omg/dL作為作為反映PEG化尿酸酶的藥效作用的主要結(jié)果度量。
已知持續(xù)升高的血漿尿酸(PUA)或血清尿酸(SUA)水平導(dǎo)致在關(guān)節(jié)和軟組織中沉積尿酸。隨著尿酸的總身體負(fù)荷增加，產(chǎn)生痛風(fēng)的體征和癥狀，包括關(guān)節(jié)炎，特征在于反復(fù)發(fā)作的疼痛性痛風(fēng)發(fā)作、痛風(fēng)石和關(guān)節(jié)畸形的發(fā)展伴隨由此所致的慢性疼痛/炎癥、和隨之發(fā)生的生理功能的喪失。每2周8mg PEG化尿酸酶導(dǎo)致尿酸(PUA和SUA)顯著降低和疼痛關(guān)節(jié)數(shù)減少，其中尿酸的顯著降低在有的患者中伴有痛風(fēng)石的完全分解。與安慰劑相比，3個月的治療后，治療還伴有痛風(fēng)紅腫的發(fā)生率和頻率的降低，隨著長期施用直到至少18個月，紅腫的發(fā)生率和頻率的繼續(xù)降低。這些益處發(fā)生在沒有其它現(xiàn)有有效治療的慢性并經(jīng)常是嚴(yán)重疾病的患者中。在對反復(fù)PEG化尿酸酶輸注的響應(yīng)中保持SUA值降低的那些患者是持續(xù)響應(yīng)者。保持SUA值降低與抗PEG化尿酸酶抗體響應(yīng)低或無相對應(yīng)(效價< 2430)。用3期研究中所有患者的系列樣品評估所測定的血漿尿酸(PUA)和血清尿酸(SUA)值之間的關(guān)系。這種評估的原理涉及用PUA作為所有PEG化尿酸酶試驗的主要終點的度量，而將SUA用于臨床實踐中。用于PUA測定的樣品的處理和加工復(fù)雜得多，并且該加工在低溫下進(jìn)行，并利用三氯乙酸鈍化和沉淀PEG化尿酸酶，使藥物不繼續(xù)氧化尿酸。然而，實驗結(jié)果明確顯示出兩種尿酸值之間在所有時間點的密切關(guān)系并且與尿酸值無關(guān)。將輸液反應(yīng)定義為PEG化尿酸酶或安慰劑輸注期間或之后2小時內(nèi)發(fā)生的不能合理地歸因于其它原因的不良事件。盡管有方案特定的輸液反應(yīng)預(yù)防處理，仍有26%的每2周用PEG化尿酸酶治療的患者和40%的每4周用PEG化尿酸酶治療的患者發(fā)生了輸液反應(yīng)。在約90%用PEG化尿酸酶治療的患者中觀測到抗PEG化尿酸酶抗體。較高效價的抗體(> I : 2430)與PEG化尿酸酶清除率增加和PEG化尿酸酶活性喪失有關(guān)，但是經(jīng)常直到尿酸水平增加一段時間后才檢測到高效價，有時滯后于PEG化尿酸酶響應(yīng)喪失后若干周。將開始對PEG化尿酸酶響應(yīng)并在以后的時間點喪失響應(yīng)的患者稱為短期響應(yīng)者，與之相反，在整個研究期間保持PEG化尿酸酶的降低尿酸鹽的活性的患者被稱為持續(xù)響應(yīng)者。PUA的升高發(fā)生于較高效價的抗體顯現(xiàn)之前。產(chǎn)生高抗體效價(而非較低效價)的患者喪失PUA響應(yīng)的可能性高。開始治療4個月后所有患者明確表現(xiàn)出短期響應(yīng)。通過在治療的最初幾個月期間定期監(jiān)測SUA水平容易檢測免疫原性的臨床作用。雖然產(chǎn)生較高效價抗體的那些患者具有更高的輸液反應(yīng)發(fā)生率，但抗體效價和輸液反應(yīng)的嚴(yán)重性之間沒有明顯關(guān)系。
本結(jié)果表明產(chǎn)生高效價的抗PEG化尿酸酶抗體和任意效價的抗PEG解釋了 SUA/PUA響應(yīng)的喪失。最終產(chǎn)生較高效價的PEG化尿酸酶抗體的患者，輸液反應(yīng)風(fēng)險較高。重要的是，所述輸液反應(yīng)大多數(shù)發(fā)生于SUA/PUA響應(yīng)喪失之后，因此，認(rèn)真監(jiān)測SUA可以避免不必要的給藥并且也可以防止大多數(shù)輸液反應(yīng)。在多數(shù)短期響應(yīng)者中作用的喪失發(fā)生在最初4個月內(nèi)，所以在這個時間段期間監(jiān)測血清尿酸是至關(guān)重要的。最后，抗PEG化尿酸酶抗體效價升高前常常會發(fā)生PEG化尿酸酶作用的喪失，因此SUA/PUA響應(yīng)喪失之時或之前，與抗PEG化尿酸酶抗體效價或任意效價的抗PEG抗體的存在之間沒有關(guān)系。抗體效價和SUA/PUA響應(yīng)之間缺乏關(guān)聯(lián)，證實了監(jiān)測治療失敗的痛風(fēng)患者在PEG化尿酸酶治療期間的抗體效價是無效的。實施例I-每2周靜脈施用8mg聚乙二醇重組尿酸酶的免疫原性和輸液反應(yīng)情況材料，方法和臨床研究設(shè)計 研究藥物本實施例所用的聚乙二醇化尿酸酶為聚乙二醇重組尿酸酶(pegloticase)，其由重組哺乳動物尿酸酶(主要為豬，C-端序列來自狒狒尿酸酶)組成，四聚體酶的每個亞基與多條平均分子量為IOkDa的單甲氧基PEG(10K mPEG)接合(Kelly S J，等.J Am SocN 印 hrol2001，12 :1001-1009 ;和 Ganson N J，等· Arthritis Res Ther 2005,8(1) :R12)。3期研究設(shè)計患者:對有癥狀的痛風(fēng)患者進(jìn)行多中心(45個場所)、重復(fù)、雙盲、安慰劑對照研究。所有患者每2周接受靜脈(i.v.)輸注(聚乙二醇重組尿酸酶或安慰劑)。治療組由每2周(q2wks) i. v. 8mg安慰劑(N = 43)、聚乙二醇重組尿酸酶(N = 84)組成。報告具有別嘌呤醇治療禁忌(如過敏史、不耐受或毒性)或一直無效的病史的所有患者，限定為接受> 3個月的最大標(biāo)示劑量(800mg/天)或因毒性或共病劑量限制而在醫(yī)學(xué)上適當(dāng)降低劑量的別嘌呤醇治療而SUA沒有正常化。納入時的主要排除標(biāo)準(zhǔn)包括不穩(wěn)定型心絞痛、不能控制的心律失常、失代償性充血性心力衰竭、不能控制的高血壓(超過150/95mmHg)、透析、器官移植接受者、妊娠和其他。對于這些實驗，所有患者在隨機(jī)化之前 > 一周停止所有降尿酸治療，并且在整個研究期間禁止使用這類藥劑。所有患者接受對輸液反應(yīng)(IR)的預(yù)防口服非索非那定(60mg，輸液前夜和輸液前即刻)、和每次輸液前對乙酰氨基酚(IOOOmg)和氫化可的松IV(200mg)。在2至4個小時的總輸液時間中用250mL生理鹽水施用研究藥物。免疫原件研究樣品分析所用的定性和定量ELISA檢測法經(jīng)驗證符合依照已認(rèn)可的免疫檢測方針的良好實驗室規(guī)范(Good Laboratory Practices) (Mire-Sluis等)。在基線時和用聚乙二醇重組尿酸酶或安慰劑治療后3、5、9、13、17、21和25周時從所有患者收集用ELISA測定法進(jìn)行抗體測定的樣品。抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的檢測對于測定總聚乙二醇重組尿酸酶抗體，用檢測緩沖液將研究樣品稀釋1/30，并使用包被聚乙二醇重組尿酸酶或PEG的ELISA微量滴定板檢測。用含有聚乙二醇重組尿酸酶抗體的人血清作為檢測總聚乙二醇重組尿酸酶抗體及IgM和IgG抗體的陽性對照。用兔抗人IgM和IgG的組合作為二抗，其中每個分別獨立地用于檢測IgM和IgG抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體(Sigma, St. Louis, Mo.)。對于這些實驗，用辣根過氧化物酶接合的抗兔IgG的小鼠單克隆抗體進(jìn)行檢測。用純化的人IgG和IgM包被的微量滴定板作為結(jié)合抗人IgG和抗人IgM 二抗的免疫球蛋白陽性對照。將藥物干擾確定為300 μ g/mL,比在研究樣品中測定的循環(huán)聚乙二醇重組尿酸酶濃度高得多。因此，預(yù)期循環(huán)中的聚乙二醇重組尿酸酶不會干擾抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的測定。
_3] 抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的特性 對于大多數(shù)來自3期患者的樣品，抗體響應(yīng)涉及IgM和IgG抗體。
_5] 抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的檢測對于這些實驗，除對初始研究樣品分析使用了替代陽性對照外，抗聚乙二醇重組尿酸酶分析方法與抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體檢測的通用方法類似。該陽性對照由添加到混合人血清并以在PBS中的酪蛋白阻滯劑稀釋1/10的抗PEG IgGl和抗PEG IgM小鼠單克隆抗體的混合物組成。在研究樣品分析結(jié)束時，將人陽性對照引入檢測中。對于這些實驗，檢測的靈敏度為500ng/mL，并且低的假檢出率8. 6%也反映了其靈敏度。安全性評估-輸液反應(yīng)對于這些實驗，將輸液反應(yīng)定義為在輸注盲法研究藥物期間和之后2小時內(nèi)發(fā)生的不能夠合理地歸因于其它原因的任何不良事件。輸液反應(yīng)發(fā)生于輸注聚乙二醇重組尿酸酶和安慰劑期間。嚴(yán)重輸液反應(yīng)的體征和癥狀包括呼吸困難、低血壓、高血壓、腫脹、支氣管痙攣、胸痛、惡心、嘔吐和腹痛及抽搐。如圖I所示,在用藥后的所有時間點，q2wk組的持續(xù)響應(yīng)者與短期響應(yīng)者相比具有較低的抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體平均效價。例如，觀測到在研究期間任何時間的抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體效價< I : 810的患者與持續(xù)響應(yīng)者相關(guān)聯(lián)。所以,68%的q2周持續(xù)響應(yīng)者具有從不超過I : 810的效價，另一方面，只有23%的q2周短期響應(yīng)者具有< I 810的效價。因此，低效價與持續(xù)響應(yīng)者相關(guān)聯(lián)。抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體對聚乙二醇重組尿酸酶的藥代動力學(xué)和藥效動力學(xué)的影響如圖2所示，聚乙二醇重組尿酸酶抗體的存在顯著影響了每2周施用聚乙二醇重組尿酸酶的藥代動力學(xué)。與短期響應(yīng)者相比，兩組的持續(xù)響應(yīng)者都具有更高的聚乙二醇重組尿酸酶峰濃度(Cmax)。如圖2所示,q2wk劑量組的短期響應(yīng)者在3周后表現(xiàn)出聚乙二醇重組尿酸酶峰濃度降低。進(jìn)一步，到15周，短期響應(yīng)者的聚乙二醇重組尿酸酶峰濃度低于檢測水平(O. 6 μ g/mL)。q2wk組的持續(xù)響應(yīng)者的聚乙二醇重組尿酸酶濃度在O. 5-0. 7 μ g/mL的范圍內(nèi)。如圖3所示，對于短期響應(yīng)者，抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體效價升高與聚乙二醇重組尿酸酶水平顯著降低相關(guān)聯(lián)，這是通過與持續(xù)響應(yīng)者的聚乙二醇重組尿酸酶水平相比較，用時間-濃度曲線下的面積(AUC)進(jìn)行的評估。雖然響應(yīng)喪失與較高的聚乙二醇重組尿酸酶效價的產(chǎn)生相關(guān)聯(lián)，但響應(yīng)的喪失可以發(fā)生于抗體效價升高的同時或甚至之前。因此，效價測定不能預(yù)測聚乙二醇重組尿酸酶響應(yīng)的喪失。抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體對SUA/PUA響應(yīng)的影響SUA/PUA作為與抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體生理上相關(guān)的替代指標(biāo)進(jìn)一步研究了 q2wks施用8mg聚乙二醇重組尿酸酶之后，短期響應(yīng)者組中何時出現(xiàn)SUA升高到超過6mg/dL。圖4中上圖中的各點代表超過6mg/dL閾值的第一個SUA測定值和q2wks組的每個短期響應(yīng)者發(fā)生該事件的時間。圖5顯示了在尿酸酶響應(yīng)喪失的時間點或之前測定的相應(yīng)的抗體效價。但是，鑒于q2wks用聚乙二醇重組尿酸酶治療導(dǎo)致SUA值通常低于3mg/dL，可以將代表聚乙二醇重組尿酸酶響應(yīng)喪失的SUA閾值設(shè)定為更低的值，例如在約3. 5mg/dL至約7mg/dL之間。但是由于聚乙二醇重組尿酸酶響應(yīng)喪失所導(dǎo)致的SUA升高通常是快速的，6mg/dL是用降尿酸藥物控制尿酸的可接受的閾值之一。但是，在這些實驗中可以成功地用4mg/dL和5mg/dL作為用降尿酸藥物 控制尿酸的閾值。如圖5所示，q2wk組中，在SUA正常化喪失時，即SUA超過6mg/dL時，抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的效價范圍寬泛，因此似乎不存在對應(yīng)于該響應(yīng)喪失的抗體效價閾值。具體地，在尿酸鹽響應(yīng)喪失時，q2wk組的平均抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體效價是I : 3032，相比之下，q2wk組持續(xù)響應(yīng)者的平均最高效價為I : 686。輸液反應(yīng)和SUA ιΗ常化的喪失在聚乙二醇重組尿酸酶活性喪失后，即當(dāng)SUA值高于或等于5mg/dL時，多數(shù)(90. 9% )患者有輸液反應(yīng)(表I)。表I每兩周接受聚乙二醇重組尿酸酶的患者在輸液反應(yīng)時的SUA分類
每2周8 mg聚乙二醇
安慰劑
重組尿酸酶
SUA 分類n/N(%)n/N (%)-
當(dāng)SUA》5 mg/dL時有IR的患者數(shù)量20/22 (90.9)2/43 (4.7)
當(dāng)SUA<5mg/dL時有IR的患者數(shù)量 1/22(4.5) O_首次用藥時有IR的患者數(shù)量_1/22 (4.5)_O如表I所示，在q2wk組中，如果在SUA ^ 5mg/dL時停止聚乙二醇重組尿酸酶治療，可以防止90. 9 %的輸液反應(yīng)。總而言之，抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體對聚乙二醇重組尿酸酶的藥代動力學(xué)和藥效動力學(xué)特性具有直接影響，且解釋了產(chǎn)生生理上相關(guān)的抗體的患者中聚乙二醇重組尿酸酶的短期作用。盡管聚乙二醇重組尿酸酶清除率的增加和所導(dǎo)致的SUA/PUA響應(yīng)的喪失是由抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體介導(dǎo)的，但清除率增加的起動與抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體效價沒有關(guān)聯(lián)性。因此，測定抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的效價不能預(yù)測SUA/PUA響應(yīng)的喪失，而監(jiān)測SUA/PUA是測定導(dǎo)致所施用的聚乙二醇重組尿酸酶清除率增加的抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體產(chǎn)生的非常好的替代指標(biāo)。最重要的是，監(jiān)測SUA值，尤其是在開始用聚乙二醇重組尿酸酶治療后的最初4個月期間，并且在SUA值升高至高于約3. 5至4mg/dL的水平時停止用聚乙二醇重組尿酸酶治療，是鑒別喪失了對聚乙二醇重組尿酸酶的響應(yīng)且出現(xiàn)輸液反應(yīng)的風(fēng)險升高的個體的簡便方法。
實施例2-III期臨床研究的免疫原性和輸液反應(yīng)情況每4周靜脈施用8mg聚乙
二醇重組尿酸酶利用輸注聚乙二醇重組尿酸酶的臨床研究如以上實施例I所述進(jìn)行多中心、隨機(jī)、雙盲安慰劑對照臨床研究。有高尿酸血癥和痛風(fēng)的患者每4周經(jīng)靜脈接受8mg聚乙二醇重組尿酸酶(N = 84)或安慰劑(N = 43)。施用治療24周。患者必須在接受研究藥物前至少一周停用任何降尿酸劑，并且在整個研究期間禁止使用這類藥劑。
在88%的q4wk 8mg聚乙二醇重組尿酸酶的患者中和僅15%的安慰劑組中檢測到
抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體。如圖6所示，抗聚乙二醇重組尿酸酶抗體的存在顯著影響每4周施用的聚乙二醇重組尿酸酶的藥代動力學(xué)。與短期響應(yīng)者相比，兩組的持續(xù)響應(yīng)者均具有較高的聚乙二醇重組尿酸酶峰濃度(Cmax)。表2顯不大多數(shù)(75% )有輸液反應(yīng)的患者在發(fā)生輸液反應(yīng)時的的SUA值不低于6mg/dL。如果在SUA值彡6mg/dL時停用聚乙二醇重組尿酸酶,可以防止這些輸液反應(yīng)。四個患者在SUA低于6mg/dL時有輸液反應(yīng)，且四個患者在首次用藥時有輸液反應(yīng)；通過監(jiān)測SUA值均不能防止這些輸液反應(yīng)。表2每4周接受聚乙二醇重組尿酸酶的患者在輸液反應(yīng)時的SUA分類
權(quán)利要求
1.防止患者在PEG化尿酸酶治療期間的輸液反應(yīng)的方法，其包括以下步驟 a)向所述患者施用PEG化尿酸酶； b)從所述患者獲取生物樣品； c)測定所述生物樣品中的尿酸水平；和 d)當(dāng)所述尿酸水平高于約4mg/dl時，表明可以停止治療以防止輸液反應(yīng)。
2.權(quán)利要求I的方法，其中可以在所述尿酸水平高于約5mg/dl時停止所述治療以防止輸液反應(yīng)。
3.權(quán)利要求I的方法，其中可以在所述尿酸水平高于約6mg/dl時停止所述治療以防止輸液反應(yīng)。
4.權(quán)利要求I的方法，其中可以在所述尿酸水平高于約7mg/dl時停止所述治療以防止輸液反應(yīng)。
5.權(quán)利要求I的方法，其中PEG化尿酸酶的施用劑量為每2周約8mg。
6.權(quán)利要求I的方法，其中PEG化尿酸酶的施用劑量為每3周約8mg。
7.權(quán)利要求I的方法，其中PEG化尿酸酶的施用劑量為每4周約8mg。
8.權(quán)利要求I的方法，其中PEG化尿酸酶的施用劑量為每2周約4mg。
9.權(quán)利要求I的方法，其中PEG化尿酸的施用劑量為每4周約12mg。
10.權(quán)利要求I的方法，其中所述生物樣品選自血液、血清和血漿。
11.權(quán)利要求I的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少2小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
12.權(quán)利要求I的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少6小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
13.權(quán)利要求I的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少24小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
14.權(quán)利要求I的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后2周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
15.權(quán)利要求I的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后4周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
16.權(quán)利要求I的方法，其中所述患者患有痛風(fēng)。
17.權(quán)利要求15的方法，其中所述痛風(fēng)是難治性的。
18.權(quán)利要求15的方法，其中所述痛風(fēng)是慢性的或痛風(fēng)石性的。
19.權(quán)利要求I的方法，其中PEG化尿酸酶是經(jīng)靜脈施用的。
20.預(yù)測用PEG化尿酸酶治療的患者是否會發(fā)生輸液反應(yīng)的方法，其包括以下步驟 a)向所述患者施用PEG化尿酸酶； b)從所述患者獲取生物樣品； c)測定所述生物樣品中的尿酸水平；和 d)當(dāng)所述水平維持在低于約4mg/dl時，表明尿酸水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得的所述水平是至少約4mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。
21.權(quán)利要求20的方法，其中當(dāng)所述尿酸水平維持在低于約5mg/dl時，所述水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得的所述水平是至少約5mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。
22.權(quán)利要求20的方法，其中當(dāng)所述尿酸水平維持在低于約6mg/dl時，所述水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得所述水平是至少約6mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。
23.權(quán)利要求20的方法，其中當(dāng)所述尿酸水平維持在低于約7mg/dl時，所述水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得所述水平是至少約7mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。
24.權(quán)利要求20的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少2小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
25.權(quán)利要求20的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少6小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
26.權(quán)利要求20的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少24小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
27.權(quán)利要求20的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后2周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
28.權(quán)利要求20的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后4周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
29.預(yù)測用PEG化尿酸酶治療的患者是否會發(fā)生抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的方法，其無需測定抗PEG化尿酸酶和抗PEG抗體的效價，所述方法包括以下步驟 a)向所述患者施用PEG化尿酸酶； b)從所述患者獲取生物樣品； c)測定所述生物樣品中的尿酸水平；和 d)當(dāng)所述水平維持在低于約4mg/dl時,表明尿酸水平對應(yīng)于較低的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得所述尿酸水平是至少約4mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的抗體介導(dǎo)的PEG化尿酸酶清除的可能性。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中當(dāng)所述尿酸水平維持在低于約5mg/dl時，所述水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得所述水平是至少約5mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)的可能性。
31.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中，當(dāng)所述尿酸水平維持在低于約6mg/dl時，所述水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得所述水平是至少約6mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)可能性。
32.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中當(dāng)所述尿酸水平維持在低于約7mg/dl時，所述水平對應(yīng)于較低的輸液反應(yīng)的可能性，或者，當(dāng)在某一時間點測得所述水平是至少約7mg/dl時，表明所述測定的尿酸水平對應(yīng)于較高的輸液反應(yīng)的可能性。
33.權(quán)利要求29的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少2小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
34.權(quán)利要求29的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少6小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
35.權(quán)利要求29的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后至少24小時測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
36.權(quán)利要求29的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后2周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
37.權(quán)利要求29的方法，其中在如步驟(a)所述的施用后4周測定所述生物樣品中的所述尿酸水平。
全文摘要
本發(fā)明提供了預(yù)測痛風(fēng)患者在經(jīng)靜脈的PEG化尿酸酶治療期間的輸液反應(yīng)風(fēng)險和抗體介導(dǎo)的響應(yīng)喪失的方法和試劑盒。可以利用常規(guī)的SUA監(jiān)測鑒別不再從治療獲益且有較高輸液反應(yīng)風(fēng)險的接受PEG化尿酸酶的患者。
文檔編號A61K38/00GK102803954SQ201080028635
公開日2012年11月28日 申請日期2010年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月25日
發(fā)明者特瑞薩·羅薩里奧-楊森, 戴維·埃里克·懷特 申請人:薩文特制藥公司