一種從茶果皮中提取血管緊張素Ⅰ轉化酶抑制劑的方法
【專利摘要】本發明涉及血管緊張素Ⅰ轉化酶抑制劑的提取方法，旨在提供一種從茶果皮中提取血管緊張素Ⅰ轉化酶抑制劑的方法。該方法包括以下步驟：向干燥后粉碎的茶果皮中加入丙酮，浸泡后離心得到茶果皮，向得到的茶果皮中加入緩沖液超聲提取，再離心得到提取液，向提取液中加入氯仿，萃取得到萃余液，萃余液濃縮后冷凍干燥得到初提取物，然后將初提取物加入到乙醇水溶液中，離心得到上清液，最后上清液濃縮后冷凍干燥，即得到血管緊張素Ⅰ轉化酶抑制劑。本發明通過超聲提取和極性篩選從茶果皮中提取了一種天然的血管緊張素Ⅰ轉化酶抑制劑，對血管緊張素Ⅰ轉化酶的抑制效果顯著，并且，本發明的技術可以有效提高茶果皮資源的經濟效益。
【專利說明】一種從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法
【技術領域】[0001]本發明是關于血管緊張素I轉化酶抑制劑的提取方法，特別涉及一種從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法。
【背景技術】[0002]高血壓是最常見的ー種以動脈收縮壓或舒張壓升高為特征的心血管疾病，常常引發心、腦、腎、眼等的并發癥，是當今世界五大常見疾病之一。根據2009年統計，全球最少有10億人有高血壓，預計到2025年高血壓患者會增至15.6億人，嚴重威脅著人類的健康。血管緊張素I轉換酶(Agiotensin 1-converting enzyme, ACE)是與細胞膜結合的含鋅蛋白酶，它在腎素-血管緊張素-醛固酮系統中，通過以下兩種途徑使血壓升高:一方面，ACE可以將無升壓活性的血管緊張素I水解，生成具有升壓活性的血管緊張素II ;另一方面，在激肽釋放酶-激肽系統中，ACE能夠降解具有降壓活性的緩激肽，使之失去降血壓活性。因此，對于血管緊張素I轉化酶的抑制對治療高血壓意義重大。[0003]當前，植物源天然產物因其高效、低毒和來源豐富備受世界關注。茶果是茶樹除茶葉之外的另ー重要部位，包括茶果皮、茶籽殼和茶籽仁。隨著2010年茶葉籽油被衛生部批準為新資源食品，茶葉籽油加工如火如荼開展，然而，這也導致茶果皮這ー加工副產物的大量產生。目前，對于如何有效利用茶果皮資源還鮮見報道。更未見從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的報道或專利。
【發明內容】
[0004]本發明的主要目的在于克服現有技術中的不足，提供ー種能有效利用茶果皮資源，且能提取出天然血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法。為解決上述技術問題，本發明的解決方案是:
[0005]提供一種從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法，包括干燥和粉碎茶果皮，包括以下具體步驟:
[0006]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和丙酮為Ig:10ml~Ig:20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3~4小時后離心得到茶果皮；
[0007]步驟B:以茶果皮和緩沖液為Ig:15ml~Ig:25ml的比例，向步驟A得到的經丙酮浸泡過的茶果皮中加入PH為2~3的緩沖液，在200~300W頻率下超聲提取I~2小時后離心，得到提取液；
[0008]步驟C:以步驟B中得到的提取液和氯仿的體積比為1:1~3:1的比例，向步驟B得到的提取液中加入氯仿，進行萃取，得到萃余液；
[0009]步驟D:將步驟C得到的萃余液濃縮后冷凍干燥，即得到具有抑制血管緊張素I轉化酶的初提取物；
[0010]步驟E:以步驟D中得到的初提取物和體積濃度75%的こ醇水溶液為Ig =IOml~Ig:20ml的比例，將步驟D得到的初提取物加入到體積濃度75%的こ醇水溶液中，充分攪拌后離心得到上清液；
[0011]步驟F:將步驟E中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，即得到從茶果皮中提取的血管緊張素I轉化酶抑制劑。
[0012]作為進一歩的改進，所述步驟A和步驟B中的離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘。
[0013]作為進ー步的改進，所述步驟B中的緩沖液是磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液。
[0014]作為進ー步的改進，所述步驟E中的離心條件為:10000轉/分鐘，離心25分鐘。
[0015]與現有技術相比，本發明的有益效果是:
[0016]本發明通過超聲提取和極性篩選從茶果皮中提取了ー種天然的血管緊張素I轉化酶抑制劑，這種天然的血管緊張素I轉化酶抑制劑對血管緊張素I轉化酶的抑制效果顯著，并且，本發明的技術可以有效提高茶果皮資源的經濟效益。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖1為本發明實施例中提取的血管緊張素I轉化酶抑制劑對血管緊張素I轉化酶的抑制作用對比圖。
【具體實施方式】
`[0018]下面結合附圖與【具體實施方式】對本發明作進ー步詳細描述:
[0019]本發明從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法具體步驟包括:
[0020]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和丙酮為Ig:10ml~Ig:20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3~4小時后離心得到茶果皮，所述離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0021]步驟B:以茶果皮和緩沖液為Ig:15ml~Ig:25ml的比例，向步驟A得到的經丙酮浸泡過的茶果皮中加入PH為2~3的緩沖液，在200~300W頻率下超聲提取I~2小時后離心，得到提取液；所述緩沖液優選磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0022]步驟C:以步驟B中得到的提取液和氯仿的體積比為1:1~3:1的比例，向步驟B得到的提取液中加入氯仿，進行萃取，得到萃余液；
[0023]步驟D:將步驟C得到的萃余液濃縮后冷凍干燥，即得到具有抑制血管緊張素I轉化酶的初提取物；
[0024]步驟E:以步驟D中得到的初提取物和體積濃度75%的こ醇水溶液為Ig: IOml~Ig:20ml的比例，將步驟D得到的初提取物加入到體積濃度75%的こ醇水溶液中，充分攪拌后離心得到上清液，所述離心條件為:10000轉/分鐘，離心25分鐘；
[0025]步驟F:將步驟E中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，即得到從茶果皮中提取的血管緊張素I轉化酶抑制劑。
[0026]下面的實施例可以使本專業的專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。
[0027]實施例1
[0028]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和丙酮為Ig =IOml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡4小時后離心得到茶果皮，所述離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0029] 步驟B:以茶果皮和緩沖液為Ig:15ml的比例，向步驟A得到的經丙酮浸泡過的茶果皮中加入PH為2的緩沖液，在200W頻率下超聲提取2小時后離心，得到提取液；所述緩沖液優選磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0030]步驟C:以步驟B中得到的提取液和氯仿的體積比為1:1的比例，向步驟B得到的提取液中加入氯仿，進行萃取，得到萃余液；
[0031]步驟D:將步驟C得到的萃余液濃縮后冷凍干燥，即得到具有抑制血管緊張素I轉化酶的初提取物；
[0032]步驟E:以步驟D中得到的初提取物和體積濃度75%こ醇水溶液為Ig: IOml的比例，將步驟D得到的初提取物加入到體積濃度75%こ醇水溶液中，充分攪拌后離心得到上清液，所述離心條件為:10000轉/分鐘，離心25分鐘；
[0033]步驟F:將步驟E中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，即得到從茶果皮中提取的血管緊張素I轉化酶抑制劑0.74g，得率為3.7% (占茶果皮干重)。
[0034]實施例2
[0035]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和丙酮為Ig:15ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3.5小時后離心得到茶果皮，所述離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0036]步驟B:以茶果皮和緩沖液為Ig:20ml的比例，向步驟A得到的經丙酮浸泡過的茶果皮中加入PH為2.5的緩沖液，在250W頻率下超聲提取1.5小時后離心，得到提取液；所述磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0037]步驟C:以步驟B中得到的提取液和氯仿的體積比為2:1的比例，向步驟B得到的提取液中加入氯仿，進行萃取，得到萃余液；
[0038]步驟D:將步驟C得到的萃余液濃縮后冷凍干燥，即得到具有抑制血管緊張素I轉化酶的初提取物；
[0039]步驟E:以步驟D中得到的初提取物和體積濃度75%こ醇水溶液為Ig: 15ml的比例，將步驟D得到的初提取物加入到體積濃度75%こ醇水溶液中，充分攪拌后離心得到上清液，所述離心條件為:10000轉/分鐘，離心25分鐘；
[0040]步驟F:將步驟E中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，即得到從茶果皮中提取的血管緊張素I轉化酶抑制劑1.2g，得率為6% (占茶果皮干重)。
[0041]實施例3
[0042]步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮20g，以茶果皮和丙酮為Ig:20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3小時后離心得到茶果皮，所述離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0043]步驟B:以茶果皮和緩沖液為Ig:25ml的比例，向步驟A得到的經丙酮浸泡過的茶果皮中加入PH為3的緩沖液，在300W頻率下超聲提取I小時后離心，得到提取液；所述緩沖液優選磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘；
[0044]步驟C:以步驟B中得到的提取液和氯仿的體積比為3:1的比例，向步驟B得到的提取液中加入氯仿，進行萃取，得到萃余液；[0045]步驟D:將步驟C得到的萃余液濃縮后冷凍干燥，即得到具有抑制血管緊張素I轉化酶的初提取物；
[0046]步驟E:以步驟D中得到的初提取物和體積濃度75%こ醇水溶液為Ig:20ml的比例，將步驟D得到的初提取物加入到體積濃度75%こ醇水溶液中，充分攪拌后離心得到上清液，所述離心條件為:10000轉/分鐘，離心25分鐘；
[0047]步驟F:將步驟E中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，即得到從茶果皮中提取的血管緊張素I轉化酶抑制劑1.5g，得率為7.5% (占茶果皮干重)。
[0048]將上述3個實施例的血管緊張素I轉化酶抑制劑進行血管緊張素I轉化酶抑制效果驗證，具體步驟如下所示:
[0049]步驟一、預先配制下列溶液:
[0050]硼酸鹽緩沖液:配制0.lmol/L含0.3mol/L氯化鈉的硼酸鈉緩沖液，溶液PH=8.3 ；
[0051]馬脲酰組氨酰亮氨酸(HHL)溶液:用硼酸鈉緩沖液配制5mmol/L馬尿酰組氨酰亮氨酸溶液；
[0052]血管緊張素I轉換酶(ACE)溶液:用去離子水配制0.lU/ml的血管緊張素I轉換酶溶液。
[0053]抑制劑:用PH為8.3硼酸鈉緩沖液溶解制備的抑制劑溶液。
[0054]二、按照下表所示添加 并操作:
[0055]
【權利要求】
1.一種從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法，包括干燥和粉碎茶果皮，其特征在于，包括以下具體步驟: 步驟A:稱取干燥后粉碎的茶果皮，以茶果皮和丙酮為Ig =IOml~Ig:20ml的比例，向茶果皮中加入丙酮，浸泡3~4小時后離心得到茶果皮； 步驟B:以茶果皮和緩沖液為Ig:15ml~Ig:25ml的比例，向步驟A得到的經丙酮浸泡過的茶果皮中加入PH為2~3的緩沖液，在200~300W頻率下超聲提取I~2小時后離心，得到提取液； 步驟C:以步驟B中得到的提取液和氯仿的體積比為1:1~3:1的比例，向步驟B得到的提取液中加入氯仿，進行萃取，得到萃余液； 步驟D:將步驟C得到的萃余液濃縮后冷凍干燥，即得到具有抑制血管緊張素I轉化酶的初提取物； 步驟E:以步驟D中得到的初提取物和體積濃度75%的こ醇水溶液為Ig =IOml~Ig:20ml的比例，將步驟D得到的初提取物加入到體積濃度75%的こ醇水溶液中，充分攪拌后離心得到上清液； 步驟F:將步驟E 中得到的上清液濃縮后冷凍干燥，即得到從茶果皮中提取的血管緊張素I轉化酶抑制劑。
2.根據權利要求1所述的ー種從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法，其特征在于，所述步驟A和步驟B中的離心條件為:5000轉/分鐘，離心10分鐘。
3.根據權利要求1所述的ー種從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法，其特征在于，所述步驟B中的緩沖液是磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液。
4.根據權利要求1所述的ー種從茶果皮中提取血管緊張素I轉化酶抑制劑的方法，其特征在于，所述步驟E中的離心條件為:10000轉/分鐘，離心25分鐘。
【文檔編號】A61K131/00GK103550403SQ201310433829
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年9月22日 優先權日:2013年9月22日
【發明者】徐平, 王岳飛 申請人:浙江大學