專利名稱：穩定的無定型5-甲基四氫葉酸鹽及其制備方法
技術領域：
本發明屬于藥物晶型領域，具體涉及穩定的5-甲基四氫葉酸晶型及其制備方法和用途。
背景技術：
5-甲基四氫葉酸最早是在1959年由Donaldson等從馬肝中以鋇鹽的形式分離出來，命名為Prefolic-A,并于1961年用化學方法進行了合成(K. 0. Donaldson et al.,Fed. Proc, (1961)，20，453)。5-甲基四氫葉酸是葉酸最具生物活性和功能的形式，比普通葉酸更容易吸收。5-甲基四氫葉酸含有兩個不對稱中心，通常在5，6位雙鍵加氫時，在6位形成光學活性碳 原子，以外消旋^R，S)形式存在，而^S)形式是5-甲基四氫葉酸以自然形式存在的惟一形式，是在人體中具有活性的成分。因此普通葉酸必須轉換為^S)形式的5-甲基葉酸才能參與兩個主要代謝途徑甲基化過程及DNA合成。5-甲基四氫葉酸的化學名稱為N-[4_[[(2-氨基-1，4，5，6，7，8_六氫_4_氧_5_甲基-6-喋唳基)甲基]氨基]苯甲酰]-L-谷氨酸,簡稱5MTHF。結構式如式I所不
O、 .OH
O
H
I I J H
H
式 I固體物質按其內部原子、離子或分子的排列方式可分為晶型(包括假晶型)和無定型。晶型與無定型相比，晶型具有更高的純度，更符合產業上的需求。晶型是藥物化合物的一個重要理化性質，晶胞內分子在空間構型、構象與排列上的不同，使其溶解性和溶出速率不同，直接影響制劑在體內的吸收、分布、排泄和代謝，最終因生物利用度不同而導致臨床藥效的差異。因此藥物的晶型對于藥物制劑的質量、安全性和有效性具有重要的意義。對于5-甲基四氫葉酸而言，本領域存在著這樣的需求適于工業化規模生產、理化性能優異的晶型。

發明內容
發明人經過廣泛而深入的研究，意外地發現能夠獲得一種穩定的5-甲基四氫葉酸晶型。本發明旨在提供一種穩定的(6S)-和(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型及其制備方法。本發明的另一個目的是提供上述穩定的(6S)-和(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型的藥物組合物及其用途。本發明的目的可以通過以下措施達到一種穩定的(6S)-5-甲基四氫葉酸晶型，該晶型的X-射線衍射圖譜的2 0角至少在 14. 7±0. 2,15. 2±0. 2,19. 6±0. 2,21. 9±0. 2,24. 0±0. 2,29. 2±0. 2 處有衍射峰，進一步地，該晶型粉末X-射線衍射測量(XRD)時呈現出銳普，晶型的選擇性2 0角在 11. 5±0. 2、14. 7±0. 2、15. 2±0. 2、17. 1±0. 2、19. 6±0. 2、21. 9±0. 2、24. 0±0. 2、 29. 2±0. 2,30. 1±0. 2處具特征峰。該晶型的X-射線衍射圖基本上如圖I。另一種一種穩定的(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型，該晶型的X-射線衍射圖譜的 2 0 角至少在 10. 1±0. 2,13. 9±0. 2,16. 9±0. 2,19. 7±0. 2,22. 5±0. 2,24. 1±0. 2 處有衍射峰。進一步地，該晶型粉末X-射線衍射測量(XRD)時呈現出銳普，晶型的選擇性
29 角在 9. 7±0. 2,10. 1±0. 2,13. 9±0. 2,16. 9±0. 2,19. 7±0. 2,22. 5±0. 2,24. 1±0. 2、26. 0±0. 2,27. 2±0. 2處優具特征峰。該晶型的X-射線衍射圖基本上如圖2。眾所周知5-甲基四氫葉酸非常的不穩定，特別是對氧非常敏感，因此很難制得和保持足夠的純度以用作藥物活性成分和食品添加劑。但本發明發現的上述足夠穩定的5-甲基四氫葉酸晶型，這些5-甲基四氫葉酸晶型具有> 98%的純度，同時具有很高的穩定性，在室溫25°C，相對濕度為60%的空氣中，將其存放6個月后，相對于原始數據到達了前所未有的彡97%的純度，而且不吸濕。本發明提供了一種上述5-甲基四氫葉酸晶型的制備方法，包括如下步驟a)將(6S)-5-甲基四氫葉酸鹽、(6R, S)_5_甲基四氫葉酸鹽、或無定型(6S)_5_甲基四氫葉酸或無定型(6R，S)-5-甲基四氫葉酸溶于適當的溶劑中；b)用酸調節溶液pH值至0.5-6. 0 ;c )析晶，分離出晶體。在上述方法的步驟a)中，(6S)-5-甲基四氫葉酸鹽或(6R，S)_5_甲基四氫葉酸鹽為藥學上可接受的鹽，可選自^S)-5-甲基四氫葉酸或^R，S)-5-甲基四氫葉酸的鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋇鹽、銨鹽、鋅鹽、D-葡萄糖胺鹽、D-半乳糖胺鹽或一甲胺鹽，特別優選鈣鹽。在上述方法的步驟a)中特別適合于作為溶劑的物質為水、鹽的水溶液、或者水和能與水混勻的有機溶劑組成的溶液。有機溶劑選自可溶于水的醇，例如甲醇、乙醇、正丙醇、 異丙醇或乙二醇，低分子量的可溶于水的有機酸，例如甲酸、醋酸、乳酸。對于所用溶劑和混合比例沒有特別限制，以一般的反應或結晶介質用量為宜。上述溶劑中，優選用于結晶的溶劑為水。在上述方法的步驟a)中一般在常規下進行，還可對溶液進行適當加熱，加熱溫度為30°C至100°C，優選加熱溫度為40°C至60°C。在上述方法的步驟c)對于(6S)-和(6R，S)-5-甲基四氫葉酸的析晶可在室溫、較高溫度或較低溫度下進行，一般結晶時間可為幾分鐘到數天。
在上述方法的步驟c)中分離出晶體可以通過如過濾、濃縮或提取的分離操作來分離制得(6S)-和(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型，而且分離后，分離出的晶體可以通過已知方法進行干燥處理，干燥溫度為20°C -40°C。此外還可以通過已知的純化操作純化該晶體。本發明還提供了含有作為活性成分的5-甲基四氫葉酸晶型的藥物組合物。在本發明的口服、舌下、皮下、肌內、靜脈、透皮或局部給藥的藥物組合物中，活性成分單獨或與另一種或多種活性成分結合，再與常規藥物賦形劑組成混合物，可以單劑給藥形式給予動物或人。合適的單劑給藥形式包括口服型，例如片劑、凝膠、膠囊、丸劑、粉末、粒劑以及口服溶液或懸浮液，舌下和口含給藥型、氣溶膠、植入片、局部、透皮、肌內、靜脈、鼻內或眼內給藥型。不特別限制活性成分化合物在上述藥物制劑中的含量，并且從寬的范圍內適當的選擇其含量。大體上，在制劑中可以含有約為0. Img至IOmg的活性成分化合物，優選0. 4mg至5mg的活性成分化合物。上述各種制劑可以采用相應公知的藥物制劑制備技術制得。
本發明進一步還提供了 5-甲基四氫葉酸晶型在制備藥物或食品添加劑中的用途。本發明的5-甲基四氫葉酸晶型可用于治療疾病和癥狀的例子包括但不限于用作葉酸拮抗劑(如甲氨蝶呤、乙胺嘧啶或甲氧芐啶等)的解毒劑；用于預防甲氨蝶呤過量或大劑量治療后所引起的嚴重毒性作用；由葉酸缺乏所引起的巨幼細胞貧血；與氟尿嘧啶聯合應用時，用于治療晚期結腸癌、直腸癌；與孕激素和或雌激素聯合用時，可用作避孕藥，還可用于降低神經管缺陷的風險，特別是心室瓣膜缺陷，降低泌尿道畸形、唇裂、腭裂、自然流產的風險；治療子宮內膜異位癥；治療精神類疾病，特別是抑郁癥；與阿司匹林聯用用于預防和治療心血管疾病；與馬來酸伊納普利等聯用用于治療原發性高血壓；用于治療牛皮鮮和類風濕性關節炎等自身免疫性疾病；用于增進某些抗寄生蟲藥-如三甲氧芐二氨嘧啶-磺胺甲惡唑-的相容性以及用于降低化療中雙去氮雜-四氫葉酸的毒性等。本發明的5-甲基四氫葉酸晶型具有理化性質優異、穩定性好、純度高、重現性好、更適于工業化規模制備等優點。


圖I是(6S)-5-甲基四氫葉酸晶型的X-射線衍射圖譜。圖2是(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型的X-射線衍射圖譜。
具體實施例方式不需要進一步描述，利用先前的說明，本領域的技術人員可以最大限度地實施本發明。下面優選的具體實施方案只是作為例證，無論如何不限制本發明所公開的內容。實施例I將600毫升水加入60g(6S)-5_甲基四氫葉酸鉀鹽，用鹽酸溶液調節至pH4. 2，維持體系的PH不變，攪拌2. 0小時析晶，過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到30克白色(6S)-5-MTHF結晶，化學純度98. 2% (HPLC檢測)。實施例2將500毫升水加入50g(6S)-5_甲基四氫葉酸鈣鹽，加熱至65°C，用鹽酸溶液調節至pH4. O，維持體系的pH不變，攪拌30分鐘析晶，冷卻至室溫，過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到30克淺黃色(6S) -5-MTHF結晶，化學純度98. 0% (HPLC檢測)。實施例3將在600毫升水中的IOOg(6S)-5-甲基四氫葉酸鈣鹽加熱至50°C，用鹽酸溶液調節至pH4. 2，不維持體系的pH不變，攪拌30分鐘析晶，冷卻至室溫，過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到32克淺黃色(6S) -5-MTHF結晶，化學純度98. 5% (HPLC檢測)。實施例4將在500毫升水中的85g (6R, S) _5_甲基四氫葉酸加熱至60°C，用鹽酸溶液調節至PH2. 7，不維持體系的pH不變，攪拌30分鐘析晶，冷卻至室溫，過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到28克白色(6R，S) -5-MTHF結晶，化學純度98. 3% (HPLC檢測)。 實施例5將在1000毫升水中的170g (6S) -5-甲基四氫葉酸鉀鹽加熱至40°C，用的鹽酸溶液調節至PH2. 3，不維持體系的pH不變，攪拌30分鐘，冷卻至室溫，過濾，洗滌。25°C真空烘干，得至IJ 55克白色(6S) -5-MTHF結晶，化學純度98. 1% (HPLC檢測)。實施例6將在100毫升水中的20g(6R，S)_5_甲基四氫葉酸加熱至40°C，用的鹽酸溶液調節至pH3. 3，不維持體系的pH不變，攪拌30分鐘，冷卻至室溫，過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到15克白色(6R，S) -5-MTHF結晶，化學純度98. 2% (HPLC檢測)。實施例I將在800毫升水和200毫升乙醇中的150g(6S)_5_甲基四氫葉酸鈣鹽加熱至45°C，用鹽酸溶液調節至pHl. 0，攪拌30分鐘，不維持體系的pH值，冷卻至室溫，過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到48克淺黃色(6S) -5-MTHF結晶，化學純度98. 3% (HPLC檢測)。實施例8將在600毫升水中的IOOg無定型(6S)-5-甲基四氫葉酸加熱到60°C，用硫酸溶液調節到PH3. 7，攪拌下析晶30分鐘，不維持體系的pH值，冷卻到室溫過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到36克白色(6S) -5-MTHF結晶，化學純度98. 5% (HPLC檢測)。實施例9無定型5-甲基四氫葉酸的制備將400毫升水加入40g(6S)-5_甲基四氫葉酸鈣鹽，冷卻到0°C。用鹽酸溶液調節至pH4. 0，立刻過濾，洗滌。25°C真空烘干，得到15克白色(6S) -5-MTHF，化學純度97. 2%(HPLC 檢測)。實施例9穩定性考察對于所有的藥用化合物來說，藥用化合物的物理和化學穩定性在藥物的商業發展的過程中尤為重要。這樣的穩定性包括在室溫，尤其是在潮濕和貯存條件下的穩定性。穩定的藥物可以避免使用特殊的貯存條件。藥用化合物在規模化的工業大生產過程中也必須是穩定的。因此我們進一步對5-甲基四氫葉酸晶型進行了穩定性的研究。在溫度為25°C，相對濕度為60%的空氣中，本發明的5-甲基四氫葉酸晶型與無定型5-甲基四氫葉酸一起貯存，測定結果如下表
權利要求
1.一種穩定的(6S)-5-甲基四氫葉酸晶型，其特征在于該晶型的X-射線衍射圖譜的2 Θ 角至少在 14. 7±0· 2,15. 2±0· 2,19. 6±0· 2,21. 9±0· 2,24. 0±0· 2,29. 2±0· 2 處有衍射峰。
2.根據權利要求I所述的(6S)-5-甲基四氫葉酸晶型，其特征在于該晶型的X-射線衍射圖基本上如圖I。
3.一種穩定的(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型，其特征在于該晶型的X-射線衍射圖譜的 2 Θ 角至少在 10. 1±0· 2,13. 9±0· 2,16. 9±0· 2,19. 7±0· 2,22. 5±0· 2,24. 1±0· 2 處有衍射峰。
4.根據權利要求3所述的(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型，其特征在于該晶型的X-射線衍射圖基本上如圖2。
5.一種權利要求I或3所述的晶型的制備方法，其特征在于包括如下步驟 a)將(6S)-5-甲基四氫葉酸鹽、(6R，S)-5-甲基四氫葉酸鹽、或無定型(6S)_5_甲基四氫葉酸或無定型(6R，S)-5-甲基四氫葉酸溶于適當的溶劑中； b)用酸調節溶液pH值至O.5-6. O ； c)析晶，分離出晶體。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述^S)-5-甲基四氫葉酸鹽或(6R，S)-5-甲基四氫葉酸鹽選自鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋇鹽、銨鹽、鋅鹽、D-葡萄糖胺鹽、D-半乳糖胺鹽或一甲胺鹽。
7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟a)中所述溶劑為水、鹽的水溶液、或者水和能與水混勻的有機溶劑組成的溶液。
8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于步驟b)中所述酸為鹽酸、硫酸、氫溴酸、甲酸或醋酸；用酸調節溶液PH值至I. 5-5. O。
9.一種藥物組合物，其特征在于包含如權利要求I或3任意一項所述的5-甲基四氫葉酸晶型作為其主要活性成分以及藥學上可接受的輔料。
10.權利要求I或3任意一項所述的5-甲基四氫葉酸晶型在制備作為藥物活性成分的藥物或食品添加劑方面的用途。
全文摘要
本發明公開了一種穩定的無定型5-甲基四氫葉酸鹽及其制備方法，該晶型為(6S)-5-甲基四氫葉酸晶型，其X-射線衍射圖譜在2θ角為14.7±0.2、15.2±0.2、19.6±0.2、21.9±0.2、24.0±0.2、29.2±0.2處有衍射峰；或者(6R，S)-5-甲基四氫葉酸晶型，其X-射線衍射圖譜在2θ角為10.1±0.2、13.9±0.2、16.9±0.2、19.7±0.2、22.5±0.2、24.1±0.2處有衍射峰。本發明的5-甲基四氫葉酸晶型具有理化性質優異、穩定性好、純度高、重現性好、更適于工業化規模制備等優點。
文檔編號A61P7/06GK102775408SQ20121001903
公開日2012年11月14日 申請日期2012年1月20日 優先權日2012年1月20日
發明者成永之, 王哲清, 黃恒 申請人:連云港金康醫藥科技有限公司