專利名稱：一種治療豬病毒病蛋白質組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種治療豬病毒病蛋白質組合物，屬于獸藥生產領域。背景技術：
干擾素(interferon)是目前最有效的抗病毒藥物。由病毒或其他干擾素誘生劑刺激細胞所產生的一類分泌性蛋白，是一組具有多種功能的活性蛋白質(主要是糖蛋白)，屬于一種細胞因子。它們在同種細胞上具有廣譜的抗病毒以及分化、調節免疫功能等多種生物活性。干擾素是一種廣譜抗病毒劑，有種屬特異性，對病毒沒有選擇性。干擾素并不直接殺傷或抑制病毒，而主要是通過細胞表面受體作用使細胞產生抗病毒蛋白，從而抑制病毒的復制；同時還可增強自然殺傷細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，從而起到免疫調節作用，并增強抗病毒能力。干擾素具有廣譜的抗病毒作用，它能通過抑制病毒的增殖，使病毒增殖量減少、受感染細胞損傷程度降低。病毒感染細胞后導致干擾素的產生并隨被感染細胞的死亡、崩解而釋出，之后向附近擴散，隨血液循環至全身。因干擾素是通過作用于靶細胞，激活靶細胞內的基因而發揮作用的，故其具有廣譜抗病毒作用。干擾素誘導蛋白是干擾素與宿主細胞上的受體結合后，誘導宿主細胞產生的一組蛋白質。其中一些成分如BST-2具有抗病毒功能。BST-2又叫tetherin (暫無漢語名)，是近幾年發現的一種抗病毒蛋白質，主要由I型干擾素誘導宿主細胞所分泌，由180個氨基酸組成，分子量30 36 kD，能夠把新感染的囊膜病毒束縛于細胞膜表面。BST-2是一種單層二型跨膜蛋白，結構比較特殊。N端有個跨膜錨，隨后是跨膜結構域，C端有個糖磷脂酰肌醇(GPI)脂質錨，兩者之間靠一個胞外的卷曲螺旋的結構連接。胞外有兩個N-糖基化位點， 三個半胱氨酸殘基，整個胞外部分組成170A長桿狀結構。研究表明，人工表達對BST-2在細胞內外均有抗病毒作用。
干擾素僅能保護沒有受病毒感染的細胞不受病毒感染，本專利利用干擾素和干擾素誘導蛋白制備的治療豬病毒病蛋白質組合物，可用于治療已被病毒感染的病豬，其效果比常用化學抗病毒藥物顯著。
發明內容
為了解決上述問題，本發明提供了一種治療豬病毒病蛋白質組合物，目的是組成一種抗病毒復合物，還可以作為免疫佐劑使用，增強疫苗免疫反應。一種治療豬病毒病蛋白質組合物，是利用市售豬白細胞干擾素，與豬干擾素誘導蛋白BST-2按特定比例混合，構成一種治療豬病毒病的獸藥；其制備方法如下
1)按照參考文獻(Tinghong Zhang, Zhengying Dong, Lei ffanR, ffeishan ChanR. Eukaryotic expression of Porcine BST-2 gene and identification of biological activity of BST-2. Remote Sensing, Environment and Transportation Engineering (RSETE), 2011 International Conference on，2011，7573 - 7576)生產純化重組得到重組豬干擾素誘導蛋白BST-2(該技術為國內首創)，用生理鹽水將純化的重組豬干擾素誘導蛋白BST-2配制成濃度為2 ％ig/ml的溶液，作為A液。
2)將市售豬白細胞干擾素用生理鹽水配制成濃度為1000 2000IU/ml的溶液，作為B液。3)將A液與B液按1 1 (V/V)混合，制備成為治療豬病毒病蛋白質藥物組合物， -20°C冷凍備用；治療時每只豬每天的使用量為0. 1 0. 2ml/kg，每天一次。利用本發明制備的治療豬病毒病蛋白質藥物組合物，可用于豬病毒性腹瀉、豬瘟、 豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜合征等豬的病毒性疾病的治療和預防。具體實施例方式
實施例1 一種治療豬病毒病蛋白質組合物的制備 1)重組豬干擾素誘導蛋白BST-2的生產
按照文獻(Tirighorig Zhang, Zhengying Dong, Lei ffanR, ffeishan ChanR. Eukaryotic expression of Porcine BST-2 gene and identification of biological activity of BST-2. Remote Sensing, Environment and Transportation Engineering (RSETE), 2011 International Conference on, 2011, 7573 - 7576)的方法提取豬 PK15 細胞總 RNA,通過 RT-PCR擴增BST-2基因，與表達質粒重組，轉染HEK293細胞，表達M 48小時后，收獲細胞，利用細胞裂解液裂解HEK293細胞，10000轉/min離心后，取上清液作為BST-2粗提液。 利用His親合層析柱純化重組BST-2蛋白，將純化的重組豬干擾素誘導蛋白BST-2用生理鹽水配制成濃度為2 ％ig/ml的溶液，作為A液。2)豬白細胞干擾素的配制
將市售豬白細胞干擾素用生理鹽水配制成濃度為1000 2000IU/ml的溶液，作為B液。3)將上述A液與B液按1 1(V/V)混合，制備成為抗病毒蛋白質藥物組合物；_20°C 冷凍備用；治療時每只豬每天的使用量為ο. ι ο. ani/kg。利用本發明制備的抗病毒蛋白質藥物組合物，可用于豬病毒性腹瀉、豬瘟、豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜合征等豬的病毒性疾病的治療和預防。實施例2 臨床應用
1治療豬病毒性腹瀉對臨床上已確診為豬病毒性腹瀉的豬群，每只豬每天按0. 1 0. anl/kg飲用抗病毒蛋白質藥物組合物，每天1次，連用1 3天。治療1次，顯效率可達 80%以上，治療二次顯效率可達85%以上，治療三次治愈可達90%以上。2治療豬瘟對于臨床上已確診為豬瘟的豬群，每只豬按每天0. 1 O.aiil/kg飲用抗病毒蛋白質藥物組合物，每天1次，連用3 5天。治療3次，顯效率可達60%以上，治療5次顯效率可達75%以上。3治療豬繁殖與呼吸綜合征對于臨床上已確診為豬繁殖與呼吸綜合征的豬群， 每只豬每天按0. 1 0. 2ml/kg飲用抗病毒蛋白質藥物組合物，每天1次，連用3 5天。治療3次，顯效率可達60%以上，治療5次顯效率可達70%以上。實施例3作為免疫調節劑使用
1、提高豬瘟疫苗免疫效果在接種豬瘟弱毒疫苗后兩天，給被免疫豬每只豬每天按 0. 1 0. aiil/kg飲用抗病毒蛋白質藥物組合物1次，連用1 2天，可延長豬瘟疫苗的免疫保護期2 4周。2、提高豬繁殖與呼吸綜合征疫苗在接種豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的同時，給被免疫豬每只豬每天按0. 1 0. aiil/kg飲用抗病毒蛋白質藥物組合物1次，連用1 2天可延長豬瘟疫苗的免疫保護期2 4周。
權利要求
1.一種治療豬病毒病蛋白質組合物，是將豬白細胞干擾素與豬干擾素誘導蛋白BST-2 混合而成，其特征在于制備方法如下1)將豬干擾素誘導蛋白BST-2用生理鹽水配制成濃度為2 ％ig/ml的溶液，作為A液；2)將市售豬白細胞干擾素用生理鹽水配制成濃度為1000 2000IU/ml的溶液，作為B液；3)將A液與B液按體積比1 1混合，制備成治療豬病毒病蛋白質藥物組合物，-20°C冷凍備用。
2.如權利要求1所述的一種治療豬病毒病蛋白質組合物在治療豬病毒性腹瀉、豬瘟、 豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜合征中的應用；使用時每只豬每日的使用量為0. 1 0. 2ml/ kg，每日1次。
全文摘要
本發明涉及一種治療豬病毒病蛋白質組合物，是將豬白細胞干擾素和重組豬干擾素誘導蛋白BST-2制備成一種治療豬病毒病蛋白質組合物，用于豬病毒性腹瀉、豬瘟、豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜合征等豬的病毒性疾病的治療和預防，還可作為豬瘟弱毒疫苗和豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗的免疫調節劑使用。
文檔編號A61P31/20GK102526710SQ20121002423
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月5日 優先權日2012年2月5日
發明者常維山, 張新華, 翟靜 申請人:山東農業大學