專利名稱：使用10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤治療t細胞淋巴瘤的制作方法
技術領域：
本申請涉及10-炔丙基-10-去氮雜氨基(deazaamino)-蝶呤的組合應用及在治療T細胞淋巴瘤中的應用。
背景技術：
10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤(“PDX”或“ 10-炔丙基-lOdAM”)是已經被試驗過的并在一些情況下發現其對腫瘤治療有益的一大類化合物之一。該化合物，具有圖I所示結構，已經由DeGraw等人在“ 10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤的合成及抗腫瘤活性” J.MedicalChem. 36 =2228-2231 (1993) 一文中公開，并顯示了其在鼠L1210細胞株中作為生長抑制劑以及較少程度地抑制化學酶ニ氫葉酸還原酶(“DHFR”)活性。另外，已經使用E0771鼠乳腺腫瘤模型給出所述化合物的抗腫瘤性質的ー些結果。由于在試驗中所使用的小白鼠的數量少(每劑量3個)、缺少量化該數據可靠性的標準偏差信息、以及所使用的最高劑量對所述小白鼠實際上是有毒的的事實，因而該數據是不可靠的。盡管如此，假定該數據對于藥物在治療人類腫瘤中的效果具有ー些預示價值，它最多預見藥物，以同等水平的耐受量，其具有可與氨甲喋呤相比的性質抑或稍微比氨甲喋呤好的性質。PCT公開號W098/02163公開了令人驚訝的觀察結果，即當在異種移植模型中試驗它們抗人類腫瘤的效果時，更高純化的PDX組合物目前已被證明是遠勝于氨甲喋呤(“MTX”)而且甚至優于更新的臨床候選藥依達曲沙(edatrexateZETX”)。此外，10-炔丙基-ΙΟ-dAM顯示出對于治療腫瘤的令人驚訝的能力，即在治療停止之后數周也沒有腫瘤生長的跡象。因此，可以根據本發明使用含有10-炔丙基-IOdAM的高純化組合物來治療腫瘤，所述腫瘤既包括實體腫瘤又包括白血病。針對在治療人類乳腺瘤及人類肺癌中的應用，對所述組合物進行說明。對于rox的后續研究表明其自身及與其他治療劑組合都是有用的。例如，Sirotnak 等人在臨床癌癥研究(Clinical Cancer Research)第 6 卷，第 3705-3712 頁(2000)報道了 PDX與丙磺舒的共同給藥，丙磺舒是ー種cMOAT/MRP-類胞膜ATP酶抑制劑，大大增強了 PDX在體內抗人類實體腫瘤的效果。PDX以及PDX與基于鉬的化療劑的組合已經被證明對于抗間皮瘤是有效的。(Khokar等人，Clin. Cancer Res. 7 =3199-3205(2001)。術語“淋巴瘤”是指多種疾病狀態，包括非何杰金氏(Non-Hodgkins)淋巴瘤(NHL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、何杰金氏(Hodgkin' s)病、伯基特氏(Burkitt ' s)淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤以及淋巴瘤性轉移。在大多數情況下，淋巴瘤以癌性B細胞的存在為特征。但是，在T細胞淋巴瘤中，所述疾病狀態以癌性T淋巴細胞為特征。

發明內容
根據本發明，使用PDX治療T細胞非何杰金氏淋巴瘤。因此，根據本發明的ー個方面，提供一種治療T細胞非何杰金氏淋巴瘤的方法，其包括給患有淋巴瘤的病人服用治療有效量的rox。對人的初歩臨床結果已經表明該治療是顯著有效的，甚至對于其他治療方式難以治療的淋巴瘤而言。


圖I給出PDX和氨甲喋呤的結構；圖2給出根據現有技術制備的不純的10-炔丙基-IOdAM制劑的HPLC ；圖3給出根據本發明的高純化PDX制劑的HPLC ；圖4給出在制備根據本發明的化合物中有用的合成路線圖；以及發明詳述本申請涉及10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤在治療T細胞淋巴瘤中的應用。T細胞淋巴瘤是其中病人的T細胞被確定是癌性的淋巴瘤。T細胞淋巴瘤包括多種情況，其包括但不限于(a)成淋巴細胞性淋巴瘤，其中惡性腫瘤出現于來自胸腺的原始淋巴前體；(b)成熟的或周邊T細胞腫瘤，包括T細胞原淋巴細胞性白血病(T cellprolymphocytic leukemia)、T細胞粒狀淋巴細胞性白血病、侵蝕性NK-細胞白血病、皮膚T細胞淋巴瘤(蕈樣肉芽腫病/西澤里綜合征)、整形大細胞淋巴瘤、T細胞型、腸道病型T細胞淋巴瘤，成人T-細胞白血病/淋巴瘤、其包括那些與HTLV-I相聯系的、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤以及皮下脂膜性T細胞淋巴瘤(subcutaneous panniculitic T celllymphoma)；以及(c)周邊T細胞淋巴瘤，其最初包括淋巴結淡色擬薄壁組織皮層并從不成長為真正的小囊類型。在本發明的一個實施方案中，所述組合物包含“高純化”rox。如同本說明書及權利要求書在此所使用的，“高純化”的組合物含有基本上不含其他葉酸衍生物，特別是10-去氮雜氨基蝶呤的rox，它們能夠干涉所述PDX的抗腫瘤活性。在本發明范圍內的組合物可以包括用于將所述PDX配制為用于治療應用的適宜劑量単位形式的載體或賦形劑，以及另外的，非葉酸治療劑。可以用上文的DeGraw論文中或者美國專利號5，354，751的實施例7中公開的方法合成rox，其在此被引入作為參考。由該方法制備的所述產物的HPLC評價顯示出雜質A以相當的量(-4.6%)存在(圖2)，其具有與10-去氮雜胺基-蝶呤一致的保留時間。因此，如果使用該合成方法，那么超出DeGraw等人的論文所公開的進一歩純化是必需的。這樣的純化可以通過另外的HPLC或結晶來進行從而去除所述10-去氮雜氨基蝶呤及其他可能存在的葉酸衍生物。圖3給出使用實施例I中所述方法制備的根據本發明的基本上由10-炔丙基-IOdAM組成的高純化制劑的HPLC。在這種情形中，PDX的量(當由HPLC峰面積確定時)接近98 %，而且與10-去氮雜氨基蝶呤相對應的峰未被處理軟件檢出，盡管在該區域存在次要的基線波紋。PDX已經被用于I/II期研究，其中有患有侵蝕性淋巴瘤的病人參加，包括三個患有耐藥的T細胞淋巴瘤的病人。已經獲得了以下病例摘要。每個病人還被用葉酸(毎日lmg/m2，開始于用PDX治療之前I周)及B12 (每月lmg/m2)補充給藥。病人I.診斷周邊T細胞淋巴瘤，IV期 人口資料48歲男性早先的治療CH0PX4療程(2002年七月-2002年i^一月)_難治療的ICE X 4療程(2002年十二月)_難治療的Campath (2003年三月-2003六月)-混合響應的預治療階段廣泛性疾病皮膚疾病研究治療PDX135mg/m2X I 劑量毒性3級口腔炎；3級中性白細胞減少；敗血癥響應通過PET掃描，基本上完全緩解注解該病人在從帶有革蘭氏陽性細菌的開放皮膚損害發展為菌血癥及敗血癥后最終死去。病人2.診斷成淋巴細胞性淋巴瘤，前體T細胞，IV階段人口資料65歲女性早先的治療L20_復合組合化學療法，自從2002年五月，用藥兩年多。曾從2002五月到2004年二月服用MTX。2004年十二月復發。預治療階段廣泛蔓延的復發研究治療甸4 周，PDX 30mg/m2X3 周。至今完成3個療程毒性無反應通過PET及CT掃描，完全緩解注解在ー劑量PDX之后,患有具廣泛性基于竇的疾病(extensive sinus baseddisease)的本質上耐氨甲喋呤的疾病的病人開始緩解。病人3.診斷HTLV相關的T細胞淋巴瘤人口資料38歲男性早先的治療EPOCH-infusional組合化學療法2003 年十月-2004 年二月。預治療階段留有腋下疾病研究治療每周PDX 30mg/m2X姆4周3次X 2療程毒性無反應完全緩解
注解到第一療程結束之時，臨床上明顯的疾病完全消失，耐受良好，沒有毒性。病人4 :診斷脂膜性T細胞淋巴瘤人口資料25歲男性早先的治療0ntak(難治療的)，9/02-11/02;Targretin 及 IFNa 1/03-10/03(持久的部份緩解)；CH0P4/04-6/04 ；ICE 6/04，CyPen 7/04-8/04，Targretin/MTX 9/04-2/05研究治療每周F1DX 30mg/m2X4
反應通過PET，臨床完全緩解毒性無注解治愈皮下病變，以及難以計數的、大的潰瘍性顆粒狀病變到目前為止,僅4例患有T細胞淋巴瘤的病人曾經用PDX治療,而且所有4人均滿足完全緩解標準，即使基于敏感的PET圖像技木。有趣地，以135mg/m2治療的病人僅僅接受對于治療具有顯著響應的單劑量藥物，而其它的已經僅僅接受在每周計劃表上的小的普通劑量。對于本發明中的應用，PDX被有益地配制為藥物制劑，其作為制劑的一部分。所述具體的劑型將取決于給藥的方法，但可以包括片劑、膠囊、ロ服液以及用于靜脈注射、肌肉注射或腹腔內給藥的可注射溶液。一個適宜的給藥劑量計劃表包括每兩周150mg/m2的給藥。當然可以標明較低的劑量水平，這取決于單個病人的耐受量，或者是否采用更頻繁的給藥。例如，在體表面積的40-120mg/m2/日左右的劑量水平是合適的。在給藥3周，每周30mg/m2的劑量之后停藥I周，在每周30mg/m2X6周之后停藥I周，或者在每周X6周的計劃表上逐步增加PDX的劑量，這也是適宜的。如果采用較不頻繁給藥，那么可以使用更高的劑量水平。因此，在一般意義上，30-275mg/m2的劑量適用于各種給藥劑量計劃表，例如135_275mg/m2用于每兩周的劑量，以及30-150mg/m2用于每周的劑量。所述適當的劑量的確定使用類似于美國專利號6，323，205中所描述的規程，其在此引入作為參考，是在所述領域的技術之內的。PDX可以與其他細胞毒性的及抗腫瘤的化合物結合使用，包括長春花生物堿例如長春堿、諾維本(navclbine)以及去こ酰長春酰胺；丙磺舒、核苷酸類似物例如吉西他濱(gemcitabine)、5_氟尿喃唳及阿糖胞苷；燒化劑例如環磷酰胺或異環磷酉先月安(ifosfamide);順氯氨鉬或卡鉬(carboplatin);亞葉酸；如紫杉醇或多西他賽(docetaxel)的紫杉烷類；抗-CD20單克隆抗體，有或者沒有放射性同位素，以及抗生素例如阿霉素及絲裂霉素。還可以使用PDX與若干這些其他抗腫瘤劑或與生長因子抑制劑以及抗血管生成劑的組合。PDX及其他藥劑可以被同時給藥或作為共同治療用藥法的部分以組合的方式使用，其中所述PDX和所述其他藥劑不同時給藥。例如，另ー藥劑可以在相對于所述PDX給藥的之前、隨即或一段時間(例如24小吋)之后給藥。因此，對于本申請的目的，除非另作說明，術語給藥一般是指所述藥物的同時給藥或者順序給藥，以及在有或者沒有所述藥物之間的時間間隔下在平行治療用藥法中以任ー順序給藥。PDX適宜于與葉酸及維生素B12的補充給藥結合使用以減小所述治療的副作用。例如，可以以葉酸(毎日lmg/m2，始于用PDX治療之前I周)及B12(毎月lmg/m2)治療病人。實施例I圖4給出根據本發明的在制備10-炔丙基-ΙΟ-dAM中有用的合成路線圖。將油分散體中的60% NaH(l. 06g，26. 5mmol)在18mL篩干燥的THF中的混合物冷卻到0°C。將該冷的混合物用高對苯ニ甲酸ニ甲酯(5. 0g,24mmol,圖4中的化合物I)在干燥THF(7mL)中的溶液處理，并且將所述混合物在(TC攪拌I小時。加入溴丙炔(26. 4mmol)，并且將該混合物在0°C攪拌另外I小時，然后在室溫下攪拌16小吋。將所得到的混合物用2. 4mL的50%こ酸處理，然后將其倒入240mL水中。用醚(2X150mL)提取所述混合物。將所述醚提取物合并，用Na2SO4干燥，并濃縮為橙黃色的油。通過以環己烷-EtOAc (8 I)洗脫的硅膠(230-400目，600mL)色譜法得到白色固體狀的α -炔丙基高對苯ニ甲酸ニ甲酯(化合物2)產物(4. 66)，其通過TLC (環己烷-EtOAe，3 I)顯現是単一的。但是，該產物的質譜數據 顯示其是所需的產物2和雙炔丙基化化合物的混合物。沒有檢測到起始原料I。HPLC顯示単-與雙-炔丙基化產物的比例為大約3 I。由于所述雙炔丙基化產物，不同于化合物1，不能在所述反應的下一歩中生成不需要的副產品，該原料適合于轉化為化合物3。為了避免在將加載的物料轉化為最終產物期間ΙΟ-dAM的連續形成，在進行所述合成過程所使用的產物中沒有原料化合物I是非常重要的，因為從10-炔丙基-Ι-dAM中完全除去ΙΟ-dAM是非常困難的。通過將O. 36g油分散體中的60% NaH(9mmol)與IOmL干燥的DMF混合形成混合物并將其冷卻到0-5°C。以第一反應的產物(化合物2) (2. 94g，12mmol)在IOmL干燥DMF中的溶液滴加處理該冷的混合物，然后在0°C攪拌30分鐘。在冷卻到_25°C之后，滴加2，
4,ニ氨基-6-(溴甲基)-蝶唳氫溴酸鹽-O. 2異丙醇(I. OOg, 2. 9mmol)在IOmL干燥DMF中的溶液，同時將溫度保持在接近_25°C。在2小時內，允許所述攪拌的混合物升溫至-10°C。在-10°C下的另外2小時后，允許所述溫度升至20°C ;在室溫下繼續攪拌2小時以上。然后通過添加固體CO2將所述反應調節到pH值為7，在真空濃縮去除溶劑之后，將所述殘余物用ニこ醚攪拌并收集不溶解于醚的物質，用水洗滌，并真空干燥從而得到I. 49g的粗產物。將該粗產物溶于CHCl3-MeOH(10 I)用于應用到硅膠柱。經過相同的溶劑體系洗脫得到
10-炔丙基-10-甲酷基-4-脫氧-4-氨基-10-去氮雜蝶酸甲基酯(化合物3)，對于TLC其是單ー的，收率40% (485mg)。將攪拌了的化合物3(400mg,0. 95mmol)在2_甲氧基こ醇(5mL)中的混懸液用水(5mL)處理，然后用10%氫氧化鈉溶液(3.9mL)處理。在室溫下攪拌該混合物4小時，在此期間得到溶液。用こ酸調節該溶液PH值至8并在高真空下將其濃縮。將所得到殘余物溶于15mL水并酸化至pH值5. 5-5. 8導致形成沉淀。收集所述沉淀，用水洗滌并真空干燥從而回收340mg化合物4(收獲率91% )。HPLC分析表明產物純度為90%。通過在115-120°C、在15mL的DMSO中將化合物4(330mg)加熱10分鐘進行脫羧。在10分鐘之后通過HPLC的試驗證實所述轉化基本上是完全的。通過在真空中(40°C恒溫浴)蒸餾去除DMS0。將所述殘余物用O. 5N的NaOH攪拌從而得到ー種透明溶液，用INHCl酸化至pH值5. O得到黃色固體狀的10-炔丙基-4-脫氧-4-氨基-10-去氮雜蝶酸(化合物5)，收率70%。HPLC表明此階段產物純度在90%。
在含有三こ胺(148mg，I. 46mmol)的DMF (IOmL)中，使用BOP試劑(苯并三唑-I-基氧三(ニ甲基氨基)勝翁六氟憐酸鹽(benzotriazole-l-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, 287mg, O. 65mmo丄，Aldrich Chemical Co.)將化合物5(225mg,0. 65mmol)與ニ甲基L-谷氨酸酯鹽酸鹽(137mg, O. 65mmol)偶聯。將該混合物在20-25°C攪拌3小時然后蒸干。將所述殘余物用水攪拌，以及收集所述水不溶的粗產物并真空干燥。通過以含有三こ胺(O. 25%，按體積)的CHCl3-Me0H(10 I)洗脫的硅膠色譜法純化該粗產物(350mg)從而回收165mg的10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤ニ甲酯(化合物6，50%收率)，其對于TLC(CHCl3-MeOH 5 I)是單ー的。將化合物6 (165mg, 0. 326mmol)懸浮于IOmL攪拌的MeOH中，該MeOH中被添加了
0.72mL(0. 72毫當量)IN的NaOH。在室溫下繼續攪拌直到數小時后得到溶液。將所述溶液保持在20-25°C持續8小時，然后用IOmL水稀釋。減壓蒸發去除所述甲醇，并將所述濃縮了的含水溶液在20-25°C放置另外24小吋。然后HPLC顯示所述酯水解是完全的。將該透 明含水溶液用こ酸酸化至PH值4. O從而沉淀淺黃固體狀的10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤，所收集的、水洗滌了的并真空干燥了的產物重量為122mg(79%收率)。通過元素分析、質子NMR及質譜的評價試驗都與所指定的結構完全一致。HPLC分析表明純度為98%而且確定所述產物中無10-去氮雜氨基蝶呤。
權利要求
1.10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤在配制用于治療T細胞淋巴瘤的藥物中的應用，其中所述T細胞淋巴瘤是成熟或周邊T細胞腫瘤或成淋巴細胞性淋巴瘤。
2.根據權利要求I的應用，其中所述10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤基本上無10-去氮雜氨基蝶呤。
3.權利要求I或2的應用，其中所述藥物被配制用于以每劑30-275mg/m2的量將10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤進行給藥。
4.權利要求13任一項的應用，其中所述周邊T細胞淋巴瘤是與HTLV相聯系的T細胞淋巴瘤。
5.權利要求1-3任一項的應用，其中所述周邊T細胞淋巴瘤是脂膜性T細胞淋巴瘤。
6.權利要求1-3中任一項的應用，其中所述藥物被配制為用于治療人類。
7.權利要求1-3中任一項的應用，其中所述藥物被配制為ロ服液或可注射的溶液。
全文摘要
通過給患有T細胞淋巴瘤的病人服用治療性有效量的10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤(deazaaminopterin)來治療T細胞淋巴瘤。以低至30mg/m2的每周給藥劑量水平，即使是耐藥的T細胞淋巴瘤，也在人類病人中觀察到癥狀緩解。通常，所述10-炔丙基-10-去氮雜氨基蝶呤被以每劑30-275mg/m2的量給藥。
文檔編號A61K31/525GK102824346SQ20121034283
公開日2012年12月19日 申請日期2005年5月31日 優先權日2004年5月30日
發明者O.A.澳康諾爾, F.西羅特納克 申請人:斯隆-凱特林癌癥研究所