專利名稱：一種鼠李糖乳桿菌及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的鼠李糖乳桿菌(Lactobaci I Iusrhamnosus )及其在制備食品、保健品或藥品中的用途。
背景技術(shù)：
人口老齡化是21世紀(jì)人類面臨的一個主要難題。與衰老有關(guān)的疾病，比如老年癡呆癥、帕金森氏綜合癥等，已逐漸成為人類健康的大敵和社會繁榮的沉重負(fù)擔(dān)。當(dāng)前，隨著衰老人群的擴(kuò)增，能提供益生作用，控制老化和延長壽命的功能性食品越來越受到青睞。乳酸菌尤其是乳桿菌作為一類公認(rèn)為安全的食用菌，對人體健康的調(diào)節(jié)與促進(jìn)作用在不斷發(fā)現(xiàn)與證實，其潛在的抗衰老作用逐漸引起廣泛的關(guān)注。近年來關(guān)于益生 菌降血脂、抗高血壓、降膽固醇等改善心血管健康的功能已得到證實，但對于益生菌抗衰老作用的研究很少。早在1905年，著名的微生物學(xué)家梅契尼科夫就發(fā)現(xiàn)高加索地區(qū)的居民飲用乳酸菌制作的酸奶可以長壽，但目前益生菌的抗衰老研究大多在嘗試?yán)脛游锬Ｐ瓦M(jìn)行，益生菌的體外抗衰老的研究正處于起步發(fā)展階段，大量食品科學(xué)研究所尤其是乳制品行業(yè)都開始對益生菌的抗衰老功能進(jìn)行菌種的篩選及成分分析。單胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO, ECL 4· 3· 4),全名為單胺氧化還原酶，它在大腦和周圍神經(jīng)組織中催化一些生物體產(chǎn)生的胺，氧化脫氨產(chǎn)生過氧化氫。根據(jù)底物選擇性和對抑制劑的靈敏度，單胺氧化酶被分為A和B兩種，單胺氧化酶A對底物5-羥色胺(5-hydroxy tryptamine)、去甲腎上腺素(Norepinephrine)、多巴胺(Dopamine)和選擇性抑制劑氯吉蘭(ClorgyI ine)具有高親和性；而單胺氧化酶B則對苯乙胺(Phenethylamine)、苯甲胺(Benzylamine)和抑制劑丙炔苯丙胺(Selegiline)具有高親和性。單胺氧化酶A和B分別由不同的基因編碼。單胺氧化酶(MAO)存在著兩種亞型，即A型MAO (ΜΑ0-Α)和B型MAO (MAO-B)0從MO致病角度的研究內(nèi)容有對帕金森病、抑郁癥、抗腫瘤、早老性癡呆等的研究。腦內(nèi)多巴胺的分解代謝主要依靠單胺氧化酶B (ΜΑ0-Β)，而單胺氧化酶A僅占作用的20%。MAO-B可將多巴胺分解為3，4- 二羥基苯乙酸和高香草酸，同時產(chǎn)生小分子H2O2，對神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用；也可使刺激多巴胺分泌、抑制多巴胺再攝取的β_苯乙胺脫氨基失去活性；還能將1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫嘧啶(MPTP)分解為具有神經(jīng)毒性的1_甲基_4_苯基吡啶離子(MPP+)。因此，抑制MAO-B的活性可減少多巴胺的降解和再攝取，提高腦內(nèi)多巴胺濃度，并通過降低Η202、ΜΡΡ+等神經(jīng)毒素水平延緩黑質(zhì)細(xì)胞的死亡過程。由于MAO-B抑制劑不僅能改善帕金森癥狀，而且還能起神經(jīng)保護(hù)作用，因此是目前抗帕金森病藥物研發(fā)的熱點。MAO-A主要以極性芳香胺為底物，如含有羥基的5-羥色胺和去甲腎上腺素，主要分布在外周胃腸道、肝臟、腎臟、肺；在腦內(nèi)主要分布在腎上腺素能神經(jīng)元內(nèi)。MAO-A的一個重要作用就是平衡大腦中5-羥色胺的分泌。MAO-A的高低直接影響個體的情緒水平，進(jìn)而對其行為產(chǎn)生影響。目前，MAO-A基因與暴力攻擊行為的關(guān)聯(lián)性也是研究的一個熱點。而MAO-A抑制劑可在一定程度上對個體的暴力情緒水平產(chǎn)生一定的影響。
從對MAO抑制角度的研究內(nèi)容有白僵菌代謝產(chǎn)物、干酪乳桿菌的篩選、蟬擬青霉代謝產(chǎn)物、小鼠肝勻漿產(chǎn)物等。而當(dāng)前，在絕大多數(shù)益生菌抗衰老研究中，衰老指標(biāo)常用抗氧化或免疫指標(biāo)作為代替，且其中以化學(xué)方法為主，這些方法只能間接反映出益生菌與衰老變化的相關(guān)性；就反應(yīng)體系的微環(huán)境而言，生物學(xué)方法則更能客觀地反映益生菌與衰老的關(guān)系。目前，已發(fā)表的與乳酸菌相關(guān)的產(chǎn)單胺氧化酶抑制劑菌株為一株干酪乳桿菌JH23，但是該菌株主要以MRS為發(fā)酵介質(zhì)，無法單獨在脫脂乳中生長，從而對將該菌株應(yīng)用于食品、膳食補(bǔ)充劑尤其是以乳為介質(zhì)的相關(guān)產(chǎn)品的制備造成了一定的障礙(王豪，郭本恒，吳正鈞，等.一株具有抑制單胺氧化酶作用的干酪乳桿菌篩選，微生物學(xué)報，2010，50(2) : 197-203.)。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明解決的技術(shù)問題是針對目前高產(chǎn)單胺氧化酶抑制劑菌株種類較為缺乏的問題，提供一種高產(chǎn)單胺氧化酶抑制劑的鼠李糖乳桿菌(Lactobaci I Iusrhamnosus )及其用途。·為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之一是一種鼠李糖乳桿菌(LactobaciIIusrhamnosus),其保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO. 6430。本發(fā)明所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)已于2012年8月13日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏號為=CGMCC NO. 6430。本發(fā)明所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)的16S rRNA基因序列如序列表中SEQ ID NO:1所示,該菌株的Tuf基因序列如序列表中SEQID NO: 2所示。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之二是所述鼠李糖乳桿菌(LactobaciIIusrhamnosus)在制備食品、保健品或藥品中的用途。其中所述食品較佳地為抗衰老食品，發(fā)酵食品或乳制品。其中所述乳制品為本領(lǐng)域常規(guī)乳制品，所述乳制品更佳地為發(fā)酵乳或乳酸菌飲料。所述發(fā)酵乳制品的制備方法為本領(lǐng)域常規(guī)發(fā)酵乳制備方法。其中所述保健品較佳地為抗衰老保健品。本發(fā)明所述鼠李糖乳桿菌(Lactobaci I Iusrhamnosus )更佳地作為保健飲料、保健食品、保健膳食補(bǔ)充劑以及抗衰老保健品的功能配料使用。其中所述衰老是以神經(jīng)退行性疾病為表征的一類現(xiàn)象的統(tǒng)稱，其中所述神經(jīng)退行性疾病是指大腦和脊髓的細(xì)胞神經(jīng)元喪失的疾病狀態(tài)。所述神經(jīng)退行性疾病較佳地包括阿茲海默癥(老年癡呆癥狀)，亨廷頓氏病，帕金森氏癥或多發(fā)性硬化癥。所述神經(jīng)退行性疾病更佳地為阿茲海默癥或帕金森氏癥。其中所述藥品較佳地為抗帕金森癥的藥物，抗抑郁癥的藥物。本發(fā)明所述抑郁癥是指由多種復(fù)雜原因所引起，以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征，且心境低落與其處境不相稱，嚴(yán)重者甚至可出現(xiàn)自殺念頭和行為的一種精神疾病。本發(fā)明所述藥品的制備較佳地包括以下步驟將所述鼠李糖乳桿菌(LactobaciIIusrhamnosus)或者其發(fā)酵產(chǎn)物作為活性成分,與藥學(xué)上可接受的輔料制成各種劑型。其中所述藥學(xué)上可接受的輔料是本領(lǐng)域常規(guī)的輔料。所述輔料是指生產(chǎn)藥品和調(diào)配處方時所用的賦形劑與附加劑。根據(jù)藥物不同的給藥方式，可以將本發(fā)明所述的鼠李糖乳桿菌(LactobaciIIusrhamnosus)或者其發(fā)酵產(chǎn)物制備成具有不同形態(tài)或類別的劑型。當(dāng)所述藥物組合物用于口服時，該藥物組合物劑型較佳地為固體劑型，所述固體劑型較佳地包括片齊U、粉劑或膠囊劑等。當(dāng)所述藥物組合物通過注射給藥時，該藥物組合物的劑型較佳地為注射液。當(dāng)所述藥物組合物通過吸入或腔道粘膜方式給藥時，該藥物組合物的劑型較佳地為氣霧劑。在上述各種藥物劑型中，鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)或者其發(fā)酵產(chǎn)物成分含量較佳地為O. 1% 99. 9%，更佳地為O.1 O. 5%，最佳地為O. 5%。其中所述的藥學(xué)上可接受的輔料添加量較佳地為99. 5 99. 9%，所述百分比為質(zhì)量百分比。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之三是一種發(fā)酵乳，由包括以下步驟的方法制備所得在原料乳中接種上述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus),接種量為I 5%，所述百分比為體積百分比，30 40°C發(fā)酵24 120小時即得。其中所述的原料乳較佳地為牛奶、羊奶或牛羊混合奶，更佳地為牛乳，優(yōu)選地為無菌脫脂乳。其中所述發(fā)酵的方法是常規(guī)發(fā)酵方法，本發(fā)明所述發(fā)酵的條件為發(fā)酵的溫度較佳地是30 40°C，更佳地是34 37°C，優(yōu)選地為34°C;所述脫脂乳濃度較佳地為2 12%，更佳地為8 12%，優(yōu)選地為10 12% ;所述發(fā)酵的時間較佳地是24 120h，更佳地為40 60h，優(yōu)選為48h ;所述接種量較佳地為I 5%，更佳地為2 5%，優(yōu)選3%，所述百分比為體積比。本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明提供了一種新的高產(chǎn)單胺氧化酶抑制劑的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus),采用本發(fā)明所述菌株制備的發(fā)酵乳對單胺氧化酶抑制率可達(dá)到52. 4至78. 8%，本發(fā)明所述鼠李糖乳桿菌(LactobaciIIusrhamnosus)菌株可作為生產(chǎn)具有抑制單胺氧化酶活性的飲料、乳制品及膳食補(bǔ)充劑的功能配料使用，還可用于制備抗衰老藥物或抗抑郁藥物。本發(fā)明通過特定模型篩選具有體外抗單胺氧化酶抑制作用的乳酸菌，開創(chuàng)了研究乳酸菌抗單胺氧化酶活性的新領(lǐng)域，尤其是以鼠李糖乳桿菌為代表的一類乳酸菌菌株對單胺氧化酶的抑制活性研究。同時，本發(fā)明采取與衰老直接相關(guān)的單胺氧化酶來模擬體內(nèi)的抗衰老機(jī)制體系，優(yōu)勢就更為突出。在此基礎(chǔ)上可將高產(chǎn)單胺氧化酶抑制劑菌株用于開發(fā)功能性食品、微生態(tài)制劑或新型藥物，在改善人類健康狀況，提高人類生活質(zhì)量的同時，必然會帶來巨大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。牛物材料保藏信息本發(fā)明提供的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)菌株，已于2012年08月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。該菌株的保藏編號為CGMCC NO. 6430。


以下結(jié)合

本發(fā)明的特征和有益效果。圖1為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)于MRS培養(yǎng)基的菌落形態(tài)圖。
具體實施例方式下面用實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。下述實施例中若無特別說明，百分比均為質(zhì)量百分比。本發(fā)明中所述的“室溫”是指進(jìn)行試驗的操作間的溫度，一般為25 °C。實施例1乳酸菌的分離和篩選1.乳酸菌的分離樣品的采集取樣于新疆自然發(fā)酵開菲爾乳，樣品裝入無菌螺口瓶，旋緊瓶蓋，進(jìn)行乳酸菌篩選操作。 MRS平板分離吸取樣品ImL于IOOmL無菌PBS (pH6. 8)緩沖溶液中振搖約lOmin，使其充分混合。吸取100 μ L該樣品，進(jìn)行十倍梯度稀釋，吸取10_4稀釋度的溶液100 μ L，均勻涂布于MRS (Merck, Germany)篩選瓊脂平板上，37°C厭氧培養(yǎng)48h，觀察菌落生長情況，并對單菌落制片進(jìn)行革蘭氏染色，挑取革蘭氏陽性菌作為初步目的菌株，轉(zhuǎn)接至MRS平板純化培養(yǎng)，4 °C保存。菌株平板純化無菌條件下，接種環(huán)挑取MRS平板上初步確定的革蘭氏陽性菌落，在MRS平板上劃線分離，37°C倒置厭氧培養(yǎng)48h，待菌落長出后，將細(xì)胞涂片染色后用顯微鏡檢查是否為單一微生物，直到獲得純培養(yǎng)。菌株的保存取ImL的凍存管，內(nèi)裝10% (v/w)脫脂乳300 μ L，分別挑取一個純化的
單菌落，震蕩均勻，真空冷凍干燥，-80°C保存，長期保存?zhèn)溆谩＝佑|酶實驗用接種環(huán)在平板上刮一環(huán)新鮮培養(yǎng)的菌苔，均勻涂抹在載玻片上，向上滴加一滴3%的過氧化氫溶液，觀察是否有氣泡產(chǎn)生。若無氣泡產(chǎn)生則表明該菌株不產(chǎn)過氧化氫酶，為接觸酶陰性菌。2.乳酸菌的篩選(I)制備待測樣品將所得實驗菌株經(jīng)活化后，挑取單菌落轉(zhuǎn)接于ImL已滅菌的10%脫脂乳中，37°C靜置培養(yǎng)24h。再以3%的接種量轉(zhuǎn)接于IOOmL已滅菌的10%脫脂乳中，37°C靜置培養(yǎng)48h。沸水浴20min, 8000rpm離心15min,獲取上清液。再采用lmol/L的NaOH將上清液調(diào)pH至6. 5 7. O之間，8000rpm離心15min獲取上清液,將所得上清液樣品凍干,配制成100mg/mL的溶液，并倍半稀釋為50、25、12. 5,6. 25,3. 125、1. 5625mg/mL，即為發(fā)酵產(chǎn)物待測液。(2)單胺氧化酶溶液(ΜΑ0溶液)的配制首先將Wistar雄性老年大鼠(中科院上海實驗動物中心)斷髓致死，在無菌條件下操作取出肝臟，放入預(yù)冷的磷酸鉀緩沖液(O. 2mol/LpH7. 4)中洗滌，在_85°C的條件下貯存待用。將肝組織(5g)以1:40 (w/v)的體積比置于0.3mol/L的蔗糖溶液中勻漿，勻至基本均勻，將此勻漿進(jìn)行低溫高速離心，IOOOXg離心lOmin，保留上清液，再將上清液經(jīng)10000 X g離心30min，保留沉淀，在整個過程中溫度控制應(yīng)在O 4°C范圍中。再將沉淀重懸于4mL0. 3mol/L的鹿糖溶液中，充分混勻后加入40mLl. 2mol/L的鹿糖溶液中，在53000 Xg下離心40min，得到純度較高的肝臟線粒體，此時MAO緊密結(jié)合在線粒體外膜上。最后用O. 2mol/L的磷酸鉀緩沖液將線粒體洗滌一次，最終懸浮在40mL的磷酸鉀緩沖液中，分裝ImL 一管，-85 °C儲存?zhèn)溆谩Ｋ脴悠窞閱伟费趸福碝AO溶液。(3)檢測發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制活性單胺氧化酶抑制率測定方為在96孔酶標(biāo)板中分別加入100 μ L磷酸鉀(O.1mol/L ρΗ7. 4)緩沖液，30 μ L供試樣品，20 μ L上述步驟制備所得MAO溶液和30 μ Llmmol/L的底物(犬尿胺，美國sigma公司)，混勻30s。在360nm波長下，分別測定開始時混合液的吸光值(A1)JTO保溫40min再測其吸光值(A2);空白對照的吸光值(Λ A0)是以30 μ L的樣品溶劑代替待測樣品。按下述公式計算對MAO的抑制作用MAO 相對抑制率(％) = I — [ (A1 — A2) / Λ A0] X 100%按照上述方法將步驟(I)所得待測樣品進(jìn)行測定，篩選不同乳酸菌脫脂乳發(fā)酵 產(chǎn)物的體外單胺氧化酶抑制活性，其中菌株BD00016表現(xiàn)出最強(qiáng)的單胺氧化酶抑制效率54. 5%。且菌株BD00016所得脫脂乳發(fā)酵產(chǎn)物凍干物的單胺氧化酶抑制率隨濃度增加而升高，當(dāng)其濃度由1. 5625mg/mL增至100mg/mL時，其對單胺氧化酶的抑制率由24. 7%上升至62. 9%，其 IC50 約為 35. lmg/mL。本發(fā)明所述菌株BD00016的細(xì)胞形態(tài)及理化鑒定試驗結(jié)果如表2所示表2菌株BD00016細(xì)胞形態(tài)及理化試驗指標(biāo)
試驗項目I結(jié)果I試驗項目pi~I試驗項目pi
革蘭氏染色陽性碳水化合物產(chǎn)酸碳水化合物產(chǎn)酸(續(xù))
細(xì)胞形態(tài)桿狀苦杏仁苷+ 甘露糖+
形成芽孢- 阿拉伯糖- 松三糖+
接觸酶- 纖維二糖+ 密二糖-
mm --
空氣中生長 ++L-鼠李糖+
45°C生長T半乳糖TD-核糖T
15°C生長T葡萄糖T水楊苷T
6.5%NaCl生長~~葡萄糖酸納+山梨醇+
PH9.6 生長~ICl+β+
ρΗ4. 5生長T麥芽糖T海藻糖T
甘露醇+D-木糖-
由于微生物中的rRNA結(jié)構(gòu)既具保守性又具高變性，是微生物屬種鑒定的分子基礎(chǔ)。16s rRNA基因大小約1. 5Kb，含有高度保守的基因片段，同時在不同的菌株間也含有變異的核酸片段。因其既能體現(xiàn)不同菌屬之間的差異，又能利用測序技術(shù)快速得到核酸序列，已成為理想的基因鑒定靶序列。通過對其序列的分析，可以判定不同菌屬、菌種間遺傳關(guān)系的遠(yuǎn)近(具體請參見16S rRNA基因在細(xì)菌菌種鑒定中的應(yīng)用，乳業(yè)科學(xué)與技術(shù)，2006年第5期)。本發(fā)明所述菌株BD00016的16S rRNA基因測序結(jié)果如序列表中SEQ ID NO:1所示，該菌株的Tuf基因測序結(jié)果如序列表中SEQ ID N0:2所示，上述測序結(jié)果表明，篩選所得菌株BD00016是一種新的鼠李糖乳桿菌(LactobaciIIusrhamnosus)菌株,將其命名為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)KF7,所述菌株在MRS培養(yǎng)基的菌落形態(tài)如圖1所示。該菌株已于2012年08月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。該菌株的保藏編號為CGMCC NO. 6430。
實施例2制備鼠李糖乳桿菌KF7發(fā)酵乳濃縮產(chǎn)物1.制備鼠李糖乳桿菌KF7發(fā)酵乳菌株的活化從-80°C深冷冰箱中取出保藏的鼠李糖乳桿菌KF7菌株，室溫解凍。在無菌條件下，取少許凍干菌粉用ImL無菌生理鹽水(O. 85%NaCl溶液)溶解后，接種環(huán)蘸取少許，在 MRS (Merck，Germany)平板上劃線分離，37°C厭氧培養(yǎng) 48h (N2 =H2 C02=85 10 :5)，連續(xù)活化2次。種子的制備10% (w/w)脫脂乳，118°C滅菌15min。從新鮮培養(yǎng)的MRS平板上挑取少量的菌苔，轉(zhuǎn)接到lmL10% (w/w)無菌脫脂乳中，37°C靜置培養(yǎng)24h，再按2% (v/v)的接種量在10% (w/w)無菌脫脂乳進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)至10mL。發(fā)酵脫脂乳的制備按2% (v/v)的接種量將種子轉(zhuǎn)接到10% (w/w)無菌脫脂乳中(每250mL三角瓶裝料lOOmL)，34°C靜置培養(yǎng)48h。待發(fā)酵完畢，將所得發(fā)酵樣品于100°C沸水浴加熱20min，待冷卻至室溫后，于4°C 8500rpm 離心 15min,取上清液。用 lmol/L NaOH 調(diào) pH 至 6. 8,再以 4°C 8500rpm 離心15min,取上清液，用0. 22 μ m濾膜過濾去除雜質(zhì)及菌體，作為待測樣品備用，用以體外測定其單胺氧化酶抑制率。2.制備鼠李糖乳桿菌KF7發(fā)酵乳粗濃縮物取步驟I所得發(fā)酵脫脂乳IOOmL,采用截留量為2KD的透析袋于蒸餾水中透析72h(4°C)，收集透析袋外液，減壓濃縮至20mL。或者將待測樣品采用截流量為2KD的膜進(jìn)行超濾，將分子量低于2KD的小分子物質(zhì)減壓濃縮至20mL，將濃縮產(chǎn)物進(jìn)行真空冷凍干燥即得發(fā)酵乳粗濃縮物。實施例3檢測鼠李糖乳桿菌KF7發(fā)酵乳粗濃縮物的單胺氧化酶抑制活性將實施例2步驟2所得發(fā)酵乳粗濃縮物配制成lOOmg/mL的溶液，并倍半稀釋為50,25,12. 5,6. 25,3. 125、1. 5625mg/mL，根據(jù)實施例1所述方法，檢測其單胺氧化酶抑制活性。檢測結(jié)果表明鼠李糖乳桿菌KF7發(fā)酵乳粗濃縮產(chǎn)物的單胺氧化酶抑制率隨著其濃度增高而升高，當(dāng)其濃度由1. 5625mg/mL增至100mg/mL時，其對單胺氧化酶的抑制率由28. 9% 上升至 63. 2%, IC50 約為 23. 5mg/mL。
實施例4制備鼠李糖乳桿菌KF7無添加發(fā)酵乳新鮮牛乳30°C 30Mpa下均質(zhì)，70°C殺菌30min后冷卻到25°C，接種實施例1制備所得鼠李糖乳桿菌KF7，接種量為3% &八)，371發(fā)酵2411，冷卻至10°C，裝瓶。發(fā)酵乳指標(biāo)鼠李糖乳桿菌KF71.1 X 109CFU/mL,按照實施例1所述方法，檢測發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制活性，其結(jié)果為所得發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制率是25. 8%。實施例5制備鼠李糖乳桿菌KF7乳酸菌飲料全脂新鮮牛乳預(yù)熱40°C，分離得到脫脂鮮乳，95°C滅菌lOmin，降溫至25°C ;以3%(v/v)的接種量接種實施例1制備所鼠李糖乳桿菌KF7，37°C發(fā)酵72h。三氯蔗糖溶解，并于95°C滅菌lOmin，將發(fā)酵液與水以1:1. 5混合均勻，并加入三氯蔗糖及單甘油脂肪酸酯，使兩者的終濃度分別為O. 06%。及1. 8%。，均質(zhì)，冷卻至10°C，無菌灌裝。 乳酸菌飲料指標(biāo)鼠李糖乳桿菌KF72. 5X 107CFU/mL,按照實施例1所述方法，檢測發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制活性，其結(jié)果為所得發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制率是31. 9%。實施例6制備鼠李糖乳桿菌KF7無添加發(fā)酵乳將2% (v/v)的脫脂牛乳30°C 30Mpa下均質(zhì)，90°C殺菌40min后冷卻到25°C，接種實施例1制備所得鼠李糖乳桿菌KF7，接種量為1% (V/V)，30°C發(fā)酵120h，冷卻至10°C，裝瓶。發(fā)酵乳指標(biāo)鼠李糖乳桿菌KF71. OX 109CFU/mL，按照實施例1所述方法，檢測發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制活性，其結(jié)果為所得發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制率是25. 4%。實施例7制備鼠李糖乳桿菌KF7無添加發(fā)酵乳將12% (v/v)的脫脂牛乳30°C 30Mpa下均質(zhì)，90°C殺菌30min后冷卻到25°C，接種實施例1制備所得鼠李糖乳桿菌KF7，接種量為3%(v/v)，34°C發(fā)酵48h，冷卻至10°C，裝瓶。發(fā)酵乳指標(biāo)鼠李糖乳桿菌KF70. 9X 109CFU/mL，按照實施例1所述方法，檢測發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制活性，其結(jié)果為所得發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制率是28. 6%。實施例8制備鼠李糖乳桿菌KF7無添加發(fā)酵乳將12% (v/v)的脫脂牛乳30°C 30Mpa下均質(zhì)，90°C殺菌30min后冷卻到40°C，接種實施例1制備所得鼠李糖乳桿菌KF7，接種量為5% (V/V)，40°C發(fā)酵48h，冷卻至10°C，裝瓶。發(fā)酵乳指標(biāo)鼠李糖乳桿菌KF71. 3X109CFU/mL,按照實施例1所述方法，檢測發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制活性，其結(jié)果為所得發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制率是26. 6%。本發(fā)明所述鼠李糖乳桿菌KF7可單獨在脫脂乳中生長，而且發(fā)酵速度良好，在生產(chǎn)具有抑制單胺氧化酶活性、抗帕金森綜合癥、抗抑郁或抗衰老功能的飲料、膳食補(bǔ)充劑的功能配料方面具有良好的應(yīng)用前景。應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus),其特征在于,其保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCN0. 6430。
2.如權(quán)利要求1所述的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)在制備食品、保健品或藥品中的用途。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述食品是乳制品。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述乳制品是發(fā)酵乳或乳酸菌飲料。
5.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述保健品是抗衰老保健品。
6.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述藥品是抗帕金森癥或抗抑郁癥的藥品。
7.一種發(fā)酵乳，其特征在于，所述發(fā)酵乳由包括以下步驟的方法制備所得在原料乳中接種如權(quán)利要求1所述的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus),接種量為I 5%, 所述百分比為體積百分比，30 40°C發(fā)酵24 120小時即得。
8.如權(quán)利要求7所述的發(fā)酵乳，其特征在于，所述原料乳為滅菌脫脂乳。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鼠李糖乳桿菌及其用途。本發(fā)明所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)，其保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.6430。該菌株以原料乳為生長介質(zhì)，所得發(fā)酵乳的單胺氧化酶抑制率可達(dá)到52.4%至78.8%。本發(fā)明所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)可作為生產(chǎn)具有抑制單胺氧化酶活性、抗帕金森綜合癥、抗抑郁或抗衰老功能的飲料、膳食補(bǔ)充劑的功能配料使用，還可應(yīng)用于制備抗帕金森綜合癥或抗抑郁癥的藥物。
文檔編號A61P25/16GK102994432SQ20121057702
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月26日
發(fā)明者季紅, 吳正鈞, 艾連中, 游春蘋, 郭本恒, 韓瑨, 陳衛(wèi) 申請人:光明乳業(yè)股份有限公司