一種安普霉素脂質體及其制備方法
【專利摘要】一種安普霉素脂質體，所述安普霉素脂質體是安普霉素被脂質體膜材包封，形成的具有雙層膜結構的球或橢球結構的組合物,制備方法包括以下步驟：1）將安普霉素和脂質體膜材用乙醇溶解得到混合溶液，混合溶液溶解于超臨界CO2中得到超臨界溶液，所述安普霉素與脂質體膜材的質量比為1:1～1:30，所述脂質體膜材為磷脂酰膽堿、或者磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物；2）將穩定劑溶于水相介質，得到穩定劑溶液；3）將所述超臨界溶液在膨脹壓力15～30MPa、預膨脹溫度323～343K下噴射至所述穩定劑溶液，經分散并沉析，獲得安普霉素脂質體混懸液。
【專利說明】一種安普霉素脂質體及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物制劑領域，具體涉及一種安普霉素脂質體及其制備方法。
【背景技術】
[0002]安普霉素是脂溶性物質，在體內溶出差，生物利用度低，造成給藥時間短、面積小，影響了給藥效果。因此，將其制成一種水溶性好、吸收快，并且具有肝靶向作用、長效、控制釋放的新劑型是十分必要的。脂質體是由磷脂、膽固醇等為膜材，將藥物包封于類脂質雙分子層而制得的超細粒子藥物載體制劑。脂質體具有靶向走位作用，進入體內優先被富含網狀內皮細胞的組織如肝、脾、骨髓等所攝取。根據肝器官給藥的特點，將安普霉素制備為脂質體，增加安普霉素在水中溶出度與生物利用度，使藥物在肝組織中緩慢釋放，提高安普霉素對局部給藥效果，有利于制劑更好地發揮胃部給藥的藥效。更為關鍵的是，安普霉素脂質體增強滲透與滯留，通過毛細血管上皮細胞間隙進入組織，在肝部治療中有很好的被動靶向作用。
[0003]脂質體采用的制備方法有薄膜分散法、薄膜-超聲波分散法、熔融法、凍融法、注入法、逆相蒸發法、復乳法等。由于這些方法需要使用大量的有機溶劑，需要進行復雜的后處理，加之安普霉素在長時間的熱處理過程中容易發生降解反應。按傳統方法制備的安普霉素脂質體存在穩定性差、包埋率低小、易聚集、靶向性不強等問題。
[0004]超臨界流體快速膨脹法是一種重要的超臨界流體技術，其過程是先將藥物溶解在SC-CO2中，再通過噴嘴霧化噴出，經快速膨脹減壓后，溶質因過飽和而析出固體微粒。由于磷脂必須分散在水溶液中才能自發形成脂質體，常規過程不適用脂質體形成，限制了其在脂質體形成的應用。中國專利“藥物靶向脂質體的制備方法”(CN 1218746C)先將SO藥物形成W/0的乳濁液后，再利用超臨界流體溶脹沉析藥物。中國專利“化妝品脂質體制各方法”(CN1254550A)、“脂質體的生產工藝及設備”(CN148596A)都是將磷脂等原料等溶解在超臨界CO2中后，釋放壓力之形成微粒后，在常壓下加入分散液中以形成脂質體。上述專利盡管使用到了超臨界CO2，但是脂質體膜材的溶解與分散是獨立的兩個步驟，未能充分利用超臨界CO2高流動性的優勢，反而使脂質體的制備過程更為復雜，過程因子更加難以控制。為充分發揮超臨界流體制備脂質體的優勢，實現超臨界CO2介質中脂質體膜材、被包封藥物的膨脹與分散一體化完成是十分必要的。而現階段存在的問題是，由于CO2與水極性相差很大，兩者分子間的作用力很小，直接在超臨界CO2介質中將脂質體膜材分散在水中是很困難的，獲得的脂質體粒徑較大、易團聚。基于此，利用表面活性劑為穩定劑，采用超臨界強制分散沉析新技術，將脂質體膜材與安普霉素溶解于超臨界CO2 /乙醇中，溶液經膨脹后分散在含有表面活性劑作為穩定劑的溶液中，形成脂質體溫懸液，為超臨界CO2介質中的安普霉素脂質體的自組裝和穩定化提供了一條新途徑。
[0005]利用超臨界流體技術制備安普霉素脂質體，相比于傳統方法具有優勢在于:A.使用化學惰性的CO2為溶劑，包封條件溫和，防止安普霉素降解；B.超臨界流體的快速質量傳遞性有利于超細、直至納米級，粒度均勻的脂質體的形成；C.脂質體的載藥性能與粒徑分布可調節超臨界參數來控制，表面活性劑對脂質體包封過程起到穩定化作用，能有效避免脂質體的團聚。該技術不使用有毒有機溶劑，所制備的安普霉素脂質體無溶劑殘留，穩定性好，增加安普霉素在水中溶出度與生物利用度，提高了脂質體的安全性，具有技術與應用的新穎性和創造性。

【發明內容】

[0006]本發明的目的在于提供一種生物利用度好、穩定性高的安普霉素脂質體及其制備方法。
[0007]為實現上述目的，本發明采取的技術方案是，一種安普霉素脂質體，所述安普霉素脂質體是安普霉素被脂質體膜材包封，形成的具有雙層膜結構的球或橢球結構的組合物。
[0008]所述安普霉素脂質體的制備方法，包括以下步驟:
1)將安普霉素和脂質體膜材用乙醇溶解得到混合溶液，混合溶液溶解于超臨界CO2中得到超臨界溶液，所述安普霉素與脂質體膜材的質量比為1:1~1:30，所述脂質體膜材為磷脂酰膽堿或者磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物；
2)將穩定劑溶于水相介質，得到穩定劑溶液；
3)將所述超臨界溶液在膨脹壓力15~30MPa、預膨脹溫度323~343K下噴射至所述穩定劑溶液，經分散并沉析，獲得安普霉素脂質體混懸液。
[0009]上述安普霉素脂質體混懸液可以進一步進行常規的冷凍干燥制備成粉末。
[0010]優選的，所述安普霉素與脂質體膜材的質量比為1:10~1:20。
[0011]所述磷脂酰膽堿與膽固醇的`混合物中，膽固醇的質量不大于磷脂酰膽堿的質量。
[0012]優選的，所述磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物中磷脂酰膽堿與膽固醇的質量比為5:1 ~3:1。
[0013]所述水相介質為磷酸鹽緩沖液。
[0014]所述穩定劑為泊洛沙姆、吐溫、烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)中的一種或幾種。
[0015]所述穩定劑溶液中穩定劑的濃度以質量分數計為I~10%，優選為2%~5%。
[0016]優選的，所述穩定劑為泊洛沙姆188，或泊洛沙姆188與吐溫80混合物，或者烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)與吐溫80混合物，或者泊洛沙姆188與DAS混合物；所述泊洛沙姆188與吐溫80混合物中，泊洛沙姆188與吐溫80的質量比為1:1~5:1 ;所述烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)與吐溫80混合物中，烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)與吐溫80的質量比為1:1~5:1 ;所述泊洛沙姆188與烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)混合物中，泊洛沙姆188與DAS的質量比為1:1 ~5:1。
[0017]所述超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾數之比為1: 5~I: 20。
[0018]所述超臨界溶液噴射至所述穩定劑溶液時的噴射速度為I~5L/min。
[0019]根據上述的安普霉素脂質體的制備方法制備的安普霉素脂質體混懸流液，所述安普霉素脂質體混懸液中安普霉素的含量以質量分數計為0.11~0.41%。
[0020]與現有技術相比，本發明的特點和優點在于:
I)利用表面活性劑為穩定劑，采用超臨界CO2強制分散沉析的新過程(RESS)制備安普霉素脂質體。在此過程中，穩定劑的作用:一是可以降低收集器內混合液的表面張力，強化了霧滴與水溶液的混合傳質作用，改善了通過噴嘴進行膨脹減壓時的霧化效果；二是吸附在磷脂分子表面，起到穩定磷脂分子的作用，減小了脂質體之間的相互碰撞，促進磷脂分子在水溶液中自組裝形成脂質體，解決了脂質膜材在緩沖液中不易擴散的問題，并顯著改善脂質體團聚現象，獲得了包封性能優越，粒度小且分布均勻的脂質體。
[0021]2)保證安普霉素的穩定性:采用超臨界CO2流體技術制備安普霉素脂質體，安普霉素在化學惰性的CO2介質中完成脂質體包封過程，不使用氯仿等有毒有機溶劑，包封條件溫和，能避免安普霉素的氧化，保持安普霉素的穩定性與生物潔性。
[0022]3)安普霉素脂質體制備過程中的穩定化作用:采用超臨界CO2膨脹并分散至表面活性劑溶液的新過程制備安普霉素脂質體，在表面活性劑的穩定作用下，利用超臨界流體的快速質量傳遞性，有利于形成超細、直至納米級的粒度均勻的脂質體，克服了傳統方法制各過程中脂質體容易團聚的缺陷，為利用安普霉素脂質體作為注射劑中間體創造了條件。
[0023]4)提高安普霉素脂質體的理化性質:所制備的安普霉素脂質體的包封率高，粒徑小，粒度分布窄而均勻對于充分保證發揮安普霉素的生理功效，擴大安普霉素的臨床與應用價值具有重要意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為根據本發明實施例1中方法制備的安普霉素脂質體的微觀結構的透射電鏡(TEM)圖。
【具體實施方式】
[0025]下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，但本發明的保護范圍不限于此。
[0026]實施例1
稱取磷脂酰膽堿3.75·g，購自于上海伯奧生物工程公司，分析純，批號BA20121206 ;膽固醇1.25g，上海伯奧生物工程公司提供，分析純，批號BA20121125 ;安普霉素0.25g，鄭州福瑞康化工產品有限公司，批號120115 ;將稱取的磷脂酰膽堿、膽固醇和安普霉素溶解于13mL無水乙醇中，混合均勻得到混合溶液，將所得混合溶液置入CO2流體反應器中，封蓋。
[0027]將泊洛沙姆188溶于pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液中，配成泊洛沙姆188的質量濃度為5%的穩定劑溶液IOOmL,將制備得到的穩定劑溶液置入CO2流體收集器中，封蓋。
[0028]打開CO2鋼瓶，CO2氣體經冷機冷卻成液體后，由高壓計量泵加壓后進入CO2流體反應器，CO2流體反應器的溫度由換熱器控制，在預膨脹壓力30MPa、預膨脹溫度338K下，磷脂酰膽堿、膽固醇與安普霉素溶解在超臨界CO2 /乙醇混合溶劑中得到超臨界溶液，超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾數之比為1: 5，待體系達到平衡后，快速釋放壓力，脂質材料溶液經噴嘴以2L/min的流速噴射進CO2流體收集器，使脂質體均勻分散在穩定劑溶液中，CO2經轉子流量計排空，收集制成的安普霉素脂質體混懸液。
[0029]安普霉素含量的測定:
儀器與條件:氣相色譜儀，Angient6890 ;色譜柱:HP_5MS，石英毛細管柱(30m X 250MmX0.25 Mm);進樣口溫度:250°C;FID檢測器溫度:280 °C;柱溫:80°C (Imin) — (12°C /min ) — 250 °C (5min);分流比 1:5。
[0030]測定方法:取本實施例的ImL上述安普霉素脂質體溫懸液置于50mL量瓶中，加入IOmL 20% (質量分數)TritonXlOO的乙醇溶液破乳，并用無水乙醇定容至刻度，用GC (氣相色譜)法測定安普霉素質量，得到混懸液中安普霉素的總含量為0.24%。
[0031]包封率的測定:
實驗儀器:葡聚糖凝膠G-50柱(2 X80cm)；
測定方法:用空白脂質體預先飽和葡聚糖凝膠G50柱，取ImL上述脂質體混懸液上柱，以PBS緩沖液為洗脫液，流速控制在lmL/min，棄去脂質體的流出液約15mL，收集游離安普霉素的濾液約40mL，用正己烷萃取，測得游離安普霉素的質量，根據脂質體中安普霉素的質量，計算得到安普霉素脂質體的包封率為81.25 %。
[0032]形態觀察與粒徑測定
實驗儀器:透射電鏡JEM1230TEM，日本電子公司；動態激光納米粒度分布儀:Malvernnanometer ,英國 Malvern 儀器公司；
粒徑測定方法:取安普霉素脂質體適量，稀釋后滴在銅網上，利用透射電鏡對脂質體微觀形態進行觀察并拍照。將脂質體混懸液稀釋至適當倍數，動態激光納米粒度分布儀測定脂質體的粒徑，經測定，脂質體的平均粒徑為124nm。
[0033]根據本發明實施例1中方法制備的安普霉素脂質體的微觀結構的透射電鏡(TEM)圖如圖1所示。
[0034]實施例2
稱取磷脂酰膽堿6g，購自于上海伯奧生物工程公司，分析純，批號BA20121206 ;安普霉素0.2g，鄭州福瑞康化工產品有限公司，批號120115 ;將稱取的磷脂酰膽堿和安普霉素溶解于15mL乙醇(質量分數為20%的水溶液)中，混合均勻得到混合溶液，將所得混合溶液置入CO2流體反應器中，封蓋。
[0035]將泊洛沙姆188、吐溫80溶于pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液中，配成穩定劑溶液IOOmL,穩定劑溶液中泊洛沙姆188、吐溫80質量濃度均為5%，將制備得到的穩定劑溶液置入CO2流體收集器中，封蓋。
[0036]打開CO2鋼瓶，CO2氣體經冷機冷卻成液體后，由高壓計量泵加壓后進入CO2流體反應器，CCV流體反應器的溫度由換熱器控制，在預膨脹壓力15MPa、預膨脹溫度323K下，磷脂酰膽堿與安普霉素溶解在超臨界CO2 /乙醇混合溶劑中得到超臨界溶液，超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾數之比為1: 20，待體系達到平衡后，快速釋放壓力，脂質材料溶液經噴嘴以5L/min的流速噴射進CO2流體收集器中，使脂質體均勻分散在穩定劑溶液中，CO2經轉子流量計排空，收集制成的安普霉素脂質體混懸液。
[0037]測定結果:安普霉素脂質體混懸液中安普霉素的總含量為0.41% ;安普霉素脂質體的包封率為85.25 %;脂質體的平均粒徑為114nm。
[0038]實施例3
稱取磷脂酰膽堿6g，購自于上海伯奧生物工程公司，分析純，批號BA20121206 ;安普霉素0.6g，鄭州福瑞康化工產品有限公司，批號120115 ;將稱取的磷脂酰膽堿和安普霉素溶解于20mL乙醇(質量分數為90%的水溶液)中，混合均勻得到混合溶液，將所得混合溶液置入CO2流體反應器中，封蓋。
[0039]將泊洛沙姆188、烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)溶于pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液中，配成穩定劑溶液IOOmL,穩定劑溶液中泊洛沙姆188、烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)質量濃度均為5%，將制備得到的穩定劑溶液置入CO2流體收集器中，封蓋。[0040]打開CO2鋼瓶，CO2氣體經冷機冷卻成液體后，由高壓計量泵加壓后進入CO2流體反應器，CO2流體反應器的溫度由換熱器控制，在預膨脹壓力20MPa、預膨脹溫度343K下，磷脂酰膽堿與安普霉素溶解在超臨界CO2 /乙醇混合溶劑中得到超臨界溶液，超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾數之比為1: 10，待體系達到平衡后，快速釋放壓力，脂質材料溶液經噴嘴以lL/min的流速噴射進CO2流體收集器中，使脂質體均勻分散在穩定劑溶液中，CO2經轉子流量計排空，收集制成的安普霉素脂質體混懸液。
[0041]測定結果:安普霉素脂質體混懸液中安普霉素的總含量為0.11% ;安普霉素脂質體的包封率為78.25 % ;脂質體的平均粒徑為104nm。
[0042]實施例4
稱取磷脂酰膽堿2g，購自于上海伯奧生物工程公司，分析純，批號BA20121206 ;安普霉素2g，鄭州福瑞康化工產品有限公司，批號120115 ;將稱取的磷脂酰膽堿和安普霉素溶解于20mL乙醇(質量分數為50%的水溶液)中，混合均勻得到混合溶液，將所得混合溶液置入CO2流體反應器中，封蓋。
[0043]將烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)、吐溫80溶于pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液中，配成穩定劑溶液IOOmL,穩定劑溶液中烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)、吐溫80質量濃度均為5%，將制備得到的穩定劑溶液置入CO2流體收集器中，封蓋。
[0044]打開CO2鋼瓶，CO2氣體經冷機冷卻成液體后，由高壓計量泵加壓后進入CO2流體反應器，CO2流體反應器的溫度由換熱器控制，在預膨脹壓力25MPa、預膨脹溫度328K下，磷脂酰膽堿、膽固醇與安普霉素溶解在超臨界CO2 /乙醇混合溶劑中得到超臨界溶液，超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾 數之比為1: 15，待體系達到平衡后，快速釋放壓力，脂質材料溶液經噴嘴以3L/min的流速噴射進CO2流體收集器中，使脂質體均勻分散在穩定劑溶液中，CO2經轉子流量計排空，收集制成的安普霉素脂質體混懸液。
[0045]將安普霉素脂質體混懸液進行冷凍干燥，制備得到安普霉素脂質體固體粉末。
[0046]實施例5
稱取磷脂酰膽堿5g，購自于上海伯奧生物工程公司，分析純，批號BA20121206 ;膽固醇Ig,上海伯奧生物工程公司提供，分析純，批號BA20121125 ;安普霉素0.4g，鄭州福瑞康化工產品有限公司，批號120115 ;將稱取的磷脂酰膽堿、膽固醇和安普霉素溶解于16mL無水乙醇中，混合均勻得到混合溶液，將所得混合溶液置入CO2流體反應器中，封蓋。
[0047]將泊洛沙姆188、吐溫80溶于pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液中，配成穩定劑溶液IOOmL,穩定劑溶液中泊洛沙姆188、吐溫80質量濃度分別為2%、8%，將制備得到的穩定劑溶液置入CO2流體收集器中，封蓋。
[0048]打開CO2鋼瓶，CO2氣體經冷機冷卻成液體后，由高壓計量泵加壓后進入CO2流體反應器，CO2流體反應器的溫度由換熱器控制，在預膨脹壓力26MPa、預膨脹溫度333K下，磷脂酰膽堿、膽固醇與安普霉素溶解在超臨界CO2 /乙醇混合溶劑中得到超臨界溶液，超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾數之比為1: 12，待體系達到平衡后，快速釋放壓力，脂質材料溶液經噴嘴以4L/min的流速噴射進CO2流體收集器中，使脂質體均勻分散在穩定劑溶液中，CO2經轉子流量計排空，收集制成的安普霉素脂質體混懸液。
[0049]將安普霉素脂質體混懸液進行冷凍干燥，制備得到安普霉素脂質體固體粉末。
[0050]實施例6稱取磷脂酰膽堿4g，購自于上海伯奧生物工程公司，分析純，批號BA20121206 ;膽固醇lg，上海伯奧生物工程公司提供，分析純，批號BA20121125 ;安普霉素0.2g，鄭州福瑞康化工產品有限公司，批號120115 ;將稱取的磷脂酰膽堿、膽固醇和安普霉素溶解于16mL無水乙醇中，混合均勻得到混合溶液，將所得混合溶液置入CO2流體反應器中，封蓋。
[0051]將烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)、吐溫80溶于pH7.2的PBS磷酸鹽緩沖液中，配成穩定劑溶液IOOmL,穩定劑溶液中烷基聯苯醚磺酸鹽(DAS)、吐溫80質量濃度分別為7%、2%，將制備得到的穩定劑溶液置入CO2流體收集器中，封蓋。
[0052] 打開CO2鋼瓶，CO2氣體經冷機冷卻成液體后，由高壓計量泵加壓后進入CO2流體反應器，CO2流體反應器的溫度由換熱器控制，在預膨脹壓力27MPa、預膨脹溫度332K下，磷脂酰膽堿、膽固醇與安普霉素溶解在超臨界CO2 /乙醇混合溶劑中得到超臨界溶液，超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾數之比為1: 12，待體系達到平衡后，快速釋放壓力，脂質材料溶液經噴嘴以3.5L/min的流速噴射進CO2流體收集器中，使脂質體均勻分散在穩定劑溶液中，CO2經轉子流量計排空，收集制成的安普霉素脂質體混懸液。
[0053]測定結果:安普霉素脂質體混懸液中安普霉素的總含量為0.3% ;安普霉素脂質體的包封率為80.2 % ;脂質體的平均粒徑為112nm。
【權利要求】
1.一種安普霉素脂質體，其特征在于，所述安普霉素脂質體是安普霉素被脂質體膜材包封，形成的具有雙層膜結構的球或橢球結構的組合物。
2.一種如權利要求1所述的安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:1)將安普霉素和脂質體膜材用乙醇溶解得到混合溶液，混合溶液溶解于超臨界CO2中得到超臨界溶液，所述安普霉素與脂質體膜材的質量比為1:1~1:30，所述脂質體膜材為磷脂酰膽堿或者磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物；2)將穩定劑溶于水相介質，得到穩定劑溶液；3)將所述超臨界溶液在膨脹壓力15~30MPa、預膨脹溫度323~343K下噴射至所述穩定劑溶液，經分散并沉析，獲得安普霉素脂質體混懸液；4)將安普霉素脂質體混懸液冷凍干燥，即得所述安普霉素脂質體。
3.如權利要求2所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述安普霉素與脂質體膜材的質量比為1:10~1:20。
4.如權利要求2所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物中，膽固醇的質量不大于磷脂酰膽堿的質量。
5.如權利要求4所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述磷脂酰膽堿與膽固醇的混合物中，磷脂酰膽堿與膽固醇的質量比為5:1~3:1。
6.如權利要求2所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述水相介質為磷酸鹽緩沖液。
7.如權利要求2所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述穩定劑為泊洛沙姆、吐溫、烷基聯苯酶磺酸鹽中的一種或幾種。
8.如權利要求2所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述穩定劑在穩定劑溶液中的濃度以質量分數計為1~10%。
9.如權利要求2所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述超臨界溶液中乙醇與CO2的摩爾數之比為1: 5~1: 20。
10.如權利要求2所述安普霉素脂質體的制備方法，其特征在于，所述超臨界溶液噴射至所述穩定劑溶液時的噴射速度為1~5L/min。
【文檔編號】A61K47/34GK103565746SQ201310584564
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月20日 優先權日:2013年11月20日
【發明者】孫江宏, 管倩, 楊震豪 申請人:河南牧翔動物藥業有限公司