本發明屬于醫療止血海綿領域，具體的涉及一種膠原蛋白/氧化微晶纖維素復合材料的制備。

背景技術：

一項成功外科手術依賴于有效的止血方法，因此，各種各樣的止血劑和止血方法不斷的被開發出來。口腔的解剖結構比較復雜，手術中出血很難控制，因此口腔手術往往面臨著較高的風險。以膠原為基礎的止血劑憑借其優秀的生物相容性、可吸收性和高效的止血性能，被越來越廣泛的應用于上頜骨手術等各種精細手術中，并且在細胞調控中發揮重要的功能性作用。但單一組分的生物材料在處理術中和術后的快速出血是有局限性的，往往不能達到理想的止血效力和生物學影響。尤其在口腔和上頜手術中，是否能夠快速止血更是成為了手術成敗的關鍵，因此，可應用于臨床的、能夠快速止血的可吸收生物材料具有非常重要的地位。臨床反應多數的海綿材料更新太慢，并且很容易粘在手術器械上，因此，眾多的生物材料和止血劑在臨床上被聯合使用，如使用微纖維膠原和明膠海綿聯用、藍紫色發光二極管照射聯合使用止血明膠海綿等方法，以提高手術質量。然而，這類方法明顯的提高了手術的成本，并且增加了手術的難度。因此，制備經過一系列物理化學處理、逐步進行改性以符合各種生物學要求的復合材料成為本領域不斷研發的課題。而目前為止使用氧化微晶纖維素(OMC)和膠原復合制作的止血海綿還未見報道。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種新型高效復合止血海綿及其制備方法即一種氧化微晶纖維素/膠原蛋白復合止血海綿及其制備方法，該復合止血海綿，是將氧化微晶纖維素及I型膠原蛋白按一定比例進行交聯，所制備的止血海綿加速了止血進程，且無生物毒性、能在體內迅速降解。

本發明采用的技術方案為：

一種氧化微晶纖維素/膠原蛋白復合止血海綿，采用膠原蛋白和氧化微晶纖維素復合；按重量百分比，氧化微晶纖維素的含量為0.25-1％。

一種氧化微晶纖維素/膠原蛋白復合止血海綿的制備方法，包括如下步驟：

1)制備膠原蛋白海綿的備用；

2)制備氧化微晶纖維素備用；

3)制備復合止血海綿：將步驟1)制備的膠原蛋白海綿配制成膠原蛋白溶液，向膠原 蛋白溶液中加入步驟2)制備的氧化微晶纖維素，攪拌均勻進行交聯反應；再將交聯產物冷凍干燥，得到復合止血海綿即氧化微晶纖維素和膠原蛋白的復合材料。

所述的制備方法，步驟1)制備膠原蛋白海綿具體包括如下步驟：

1.1)分離除脂：將新鮮牛跟腱除去雜質、油脂，用蒸餾水浸泡、洗滌，切碎后，充分勻漿；用質量分數為0.05％-0.2％的碳酸鈉溶液浸泡過夜，過濾，得去脂處理的牛跟腱；

1.2)提取：取去脂處理的牛跟腱，加入無花果酶和醋酸水溶液，在0-4℃下攪拌3-4天，高速離心，取上清液；

1.3)鹽析：向離心后的上清液中，攪拌下，加入NaCl顆粒至氯化鈉的濃度達到2-3M，待沉淀析出后靜置12-18h，過濾，取沉淀備用；

1.4)透析：將白色粘稠狀的沉淀用0.1M Tris-HCl溶液溶脹10-18h，之后裝入截留分子量為7000-10000的透析袋中，以醋酸作為透析外液進行透析，最后使用蒸餾水透析，得到膠原溶液；

1.5)干燥：將透析后的膠原溶液放入容器中，冰箱預凍后，放入冷凍干燥機中，冷凍干燥24-48h，得到膠原蛋白海綿。

所述的制備方法，步驟1.2)中無花果酶的加入量為，每100克去脂處理的牛跟腱，加入無花果酶3-5g。

所述的制備方法，步驟1.4)以醋酸作為透析外液，依次使用不同濃度的醋酸進行梯度透析，最后使用蒸餾水透析，每種濃度分別透析2-3天。

所述的制備方法，步驟2)制備氧化微晶纖維素具體包括如下步驟：

2.1)將微晶纖維素用蒸餾水洗滌3-5次，50℃干燥4-6h；

2.2)將經干燥處理后的微晶纖維素加入二氧化氮四氯化碳溶液中，于18-21℃度下攪拌2-4天，得到氧化產物；

2.3)采用真空過濾的方式使用四氯化碳過濾氧化產物數次，再用50％的乙醇洗滌一次，隨后再用100％的乙醇洗滌一次；

2.4)將洗滌后的產物真空干燥24h，得到干燥的氧化微晶纖維素。

所述的制備方法，步驟2)中將經干燥處理后的微晶纖維素以1:27.5-36.2的比例加入19-35％的二氧化氮四氯化碳溶液。

所述的制備方法，步驟3)中按照每10ml乙酸水溶液加入0.06g膠原蛋白海綿，配制膠原蛋白溶液；乙酸水溶液的濃度為1％，v/v。

所述的制備方法，步驟3)中將步驟2)制備的氧化微晶纖維素加入到膠原蛋白溶液 中，在常溫下，磁力攪拌至粉末分散均勻，再將交聯產物冷凍干燥20-24h。

本發明具有以下有益效果：

本發明從牛跟腱中提取膠原蛋白溶液后，引入氧化微晶纖維素粉末，制成不同比例的Col/OMC止血復合材料。通過表面結構觀察，理化性能分析，生物安全性和有效性分析，使新型Col/OMC止血復合材料止血效果優于商品化膠原止血海綿和自制止血海綿，對人體無毒無害，并快速氧化微晶在體內降解。

COL和OMC均具有良好的止血性能，因此我們預測這兩種安全材料的復合物能夠更加快速的止血，預防血液過多損失，并且擁有可控的降解速度以及良好的力學性能，不對機體造成過多的負擔。因此，這種材料在體內的降解速度應該小于一個月，并且受損組織能夠盡可能快速的愈合。因此這種新型的Col/OMC復合材料有望成為良好的止血材料。

微晶纖維素(MCC)可以通過對天然纖維素的稀酸水解、純化獲取，MCC是由β-1,4-葡萄糖苷鍵結合的直鏈式多糖類物質，可自由流動的極細微的短棒狀或粉末狀多孔狀顆粒,顏色為白色或近白色,無臭、無味,不溶于水、稀酸、有機溶劑和油脂,這種物質纖維含量少、具有良好的吸濕性和穩定性。除此之外，MCC因其具有極佳的生物安全性被列為GRAS之內，同樣，其在歐洲也被認定為安全的食品添加劑。氧化再生纖維素(ORC)是一種公認的可吸收止血材料，能夠通過接觸激活作用促進凝血的進行。MCC和再生纖維素具有相似的化學結構，根據再生纖維素的氧化過程推測，MCC C6上的羥基在NO2/CCl4氧化體系中很可能被高度選擇性的氧化。氧化的實質是在纖維素上引入羧基以改變其化學特性。微晶纖維素的氧化產物，稱之為氧化微晶纖維素(OMC)，當其羧基比為16～24％時，具有非常優異的止血性能。除此之外，OMC具有良好的可塑性，這種特性有利于材料在齒科手術中的應用。OMC分子中存在的眾多氫鍵在壓力下能夠形成氫鍵結合，當有效成分進入、聚集于這些結構中后，血小板會被包圍并通過氫鍵作用固定，加速凝血過程的進行。OMC比表面積大、聚合度低、生物安全性高，且成本較低，可成為高效無毒的止血材料。

附圖說明

圖1是氧化微晶纖維素/膠原蛋白復合止血海綿數碼照片。

圖2是對照組，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，和實施例1-實施例3制備的復合止血海綿的SEM圖；其中：(A)對照組為創爾膠原蛋白海綿，500×，(a)200×；(B)Col為實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，500×，(b)200×；(C)Col-0.25％OMC為實施例2制備的復合止血海綿，500×，(c)200×；(D)Col-0.5％OMC為實施例3制備的復合止血海綿，500×，(d)200×；(E)Col-1％OMC為實施例4制備的復合止血海綿，500×，(e)200×；(F) 膠原蛋白海綿和不同/氧化微晶纖維素含量的復合止血海綿的孔徑分布圖。

圖3是對照組，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，和實施例1-實施例3制備的復合止血海綿的紅外譜圖。

圖4是對照組，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，和實施例1-實施例3制備的復合止血海綿對ACC-M細胞的細胞毒性。

圖5是對照組，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，和實施例1-實施例3制備的復合止血海綿的力學強度(A)、接觸角(B)、孔隙率(C)、吸水率(D)測試結果。

圖6示出對照組，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，和實施例1-實施例3制備的復合止血海綿的止血性能。

圖7示出對照組，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，和實施例1-實施例3制備的復合止血海綿血小板釋放反應中(A)β-TG因子和(B)PF4因子濃度變化圖、以及(C)GPIIb/IIIa和(D)FXIIa濃度變化圖。

圖8是在兔耳動脈和肝損傷模型中，Col和不同含量Col/OMC復合止血海綿的出血量。

圖9是不同材料分別植入兔腿部1天，7天，14天和28天后的局部組織病理圖(HE染色)。

具體實施方式

實施例1一種氧化微晶纖維素/膠原蛋白復合止血海綿

其制備方法如下：

1)膠原蛋白(Col)海綿的制備

1.1)分離除脂：將新鮮牛跟腱除去雜質、油脂，用蒸餾水浸泡、洗滌，切碎后，充分勻漿；用質量分數為0.2％的碳酸鈉溶液浸泡過夜，過濾，得去脂處理的牛跟腱；

1.2)提取：取去脂處理的牛跟腱100g，加入無花果酶4.5g和0.1M的醋酸水溶液，在4℃下攪拌3天，高速離心，取上清液；

1.3)鹽析：向離心后的上清液中，在攪拌下，加入NaCl顆粒至氯化鈉的濃度達到3M，待沉淀析出后靜置12h，過濾，取沉淀備用；

1.4)透析：將白色粘稠狀的沉淀用0.1M Tris-HCl溶液溶脹18h，之后裝入截留分子量為10000的透析袋中，依次使用不同梯度的醋酸(0.1M，0.05M，0.02M)作為透析外液，最后使用蒸餾水透析，得到膠原溶液。(每種濃度分別透析2天。)

1.5)干燥：將透析后的膠原溶液放入容器中，冰箱預凍后，放入冷凍干燥機中，冷凍干燥36h，得到膠原蛋白(Col)海綿，備用。

2)氧化微晶纖維素(OMC)的制備

2.1)將微晶纖維素用蒸餾水洗滌3次，50度干燥6h。

2.2)將經干燥處理后的微晶纖維素以1:36.2的比例加入35％的二氧化氮四氯化碳溶液中，于19.5度下攪拌2-4天，得到氧化產物。

2.3)采用真空過濾的方式，使用四氯化碳過濾上述氧化產物數次，再用50％的乙醇洗滌一次，隨后再用100％的乙醇洗滌一次。

2.4)將上述洗滌后的產物真空干燥24h，得到干燥的氧化微晶纖維素(OMC)，備用。

3)復合止血海綿的制備

復合材料Col-0.25％OMC的制備：按照每10ml乙酸水溶液(1％v/v)加入0.06g膠原蛋白(Col)海綿，配制膠原蛋白溶液。取100g膠原蛋白溶液，加入0.25g的氧化微晶纖維素(OMC)，冷凍干燥24h后，得到復合止血海綿，即膠原蛋白(Col)和氧化微晶纖維素(OMC)的復合材料Col-0.25％OMC。

實施例2

步驟同實施例1，僅改變膠原蛋白溶液中氧化微晶纖維素的加入量，即取100g膠原蛋白溶液，加入0.5g的氧化微晶纖維素(OMC)，冷凍干燥24h后，得到復合止血海綿，即膠原蛋白(Col)和氧化微晶纖維素(OMC)的復合材料Col-0.5％OMC。

實施例3

步驟同實施例1，僅改變膠原蛋白溶液中氧化微晶纖維素的加入量，即取100g膠原蛋白溶液，加入1.0g的氧化微晶纖維素(OMC)，冷凍干燥24h后，得到復合止血海綿，即膠原蛋白(Col)和氧化微晶纖維素(OMC)的復合材料Col-1％OMC。

效果實驗

1、圖2顯示了(A）對照組(陰性對照，創爾膠原蛋白海綿）、(B）實施例1步驟1）制備的膠原蛋白海綿、(C）實施例1制備的復合止血海綿Col-0.25%OMC、(D）實施例2制備的復合止血海綿Col-0.5%OMC、和(E）實施例3制備的復合止血海綿Col-1%OMC的表面形態，圖中高光部分顯示了膠原的網狀結構，暗部為材料的微孔。由圖可知對照組的平均孔徑為120±25μm(圖2(A)和(a))，圖2(B)和(b)中實施例1步驟1）制備的膠原組表面平滑，網狀結構較為均一。圖2(C)和(c)Col-0.25%OMC組表面結構和膠原組類似，但孔徑為234±38.35μm，明顯增大。箭頭所示為OMC粉末，穿插在膠原網狀纖維之間。Col-0.5%OMC組在膠原網狀結構中存在更多的OMC粉末，均一的嵌入膠原結構中，其孔徑為140.67±47.25μm，如圖2(D)、(d)。Col-1%OMC組中OMC的含量增加，形成了較為明顯 的結節，膠原的網狀結構仍然存在，部分網絡被破壞(圖2(E)和(e))。材料孔徑大小對其生物學效應具有重要的影響，Col-0.25%和Col組均有較大的孔隙，分別為234±38.35μm和208±41.04μm(圖1)。

Lie Ma等研究表明用于皮膚組織工程的膠原海綿應該具有合適的微觀結構，如孔徑大小在100～200μm之間，孔隙率大于90％。然而，對于植入材料，大孔隙是否適合還存在爭議。S.Nehrer發現膠原海綿內的合成活動與孔隙有關，當孔隙較小時(20-85μm)，合成活動較為活躍。但之前的研究表明166～334μm的孔徑更加適合。我們的研究中，擁有大孔隙的Col-0.25％OMC和Col海綿表現出突出的止血能力和生物降解能力。這是因為大孔徑的材料更利于細胞和血小板的聚集和積累，大的孔隙適合細胞的新陳代謝以及傷口的愈合。材料的孔徑可以通過控制溫度和壓力和凍干的程序而改變，這意味著我們可以改變材料的孔徑以適應更多的應用需求。

2、圖3為對照組、實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿、實施例1-實施例3制備的復合止血海綿(Col-0.25％OMC,Col-0.5％OMC and Col-1％OMC)以及OMC粉末的紅外圖譜。從紅外譜圖中我們可以看出，3335cm-1處的峰是分子間氫鍵OH伸縮振動。-NH一般在3540～3180cm-1有兩個弱而尖吸收峰。1632cm-1,1543cm-1以及1235cm-1處的峰分別代表收縮振動在1680～1630cm-1的C＝O(酰胺Ⅰ帶)，收縮振動在1570～1510cm-1的酰胺Ⅱ帶，以及收縮振動在1335～1200cm-1的酰胺III帶。根據化學分子式和FT-IR光譜對OMC官能團的分析表明：(1)在3420cm-1處的特征峰-OH的收縮振動，一般在3400～3450cm-1之間出現；(2)在1728cm-1處的峰代表羧基C＝O的收縮振動，C＝O通常在3000cm-1左右會有個小峰，在1700cm-1會有強峰；(3)1016cm-1處的峰是CH2OH中C-O的收縮振動。對比Col和Col/OMC的FT-IR光譜，除了在1728cm-1處輕微的羧基C＝O吸收振動外，無新的波峰出現。隨著OMC粉末在Col/OMC復合物中含量的增加，1080cm-1處峰的強度和1728cm-1處羧基C＝O的峰肩逐漸增加。這表明膠原蛋白和OMC之間發生了特殊的分子間相互作用，但仍需進一步證明。1080cm-1處的峰在復合材料里可能是仲醇上C-O伸縮振動，也可能是膠原蛋白里與氨基相連的碳的C-H伸縮振動峰。1724cm-1處的峰是OMC的酯鍵上C＝O伸縮振動特征峰，1314cm-1處的峰可能是亞甲基的彎曲振動，也可能是酯的C-O伸縮振動，而1080cm-1峰在復合材料里可能是仲醇上C-O伸縮振動，在膠原蛋白里則可能是與氨基相連的碳的C-H伸縮振動峰。隨著OMC含量的增加，1728cm-1以及1080cm-1處的峰越來越明顯，Col-1％OMC該處的峰最尖最突出，而1080cm-1處的峰逐漸減弱，推測1080cm-1處的峰是在膠原蛋白里與氨基相連的 碳的C-H伸縮振動峰的可能更大。

3、圖4為對照組、實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿、實施例1-實施例3制備的復合止血海綿(Col-0.25％OMC,Col-0.5％OMC and Col-1％OMC)對ACC-M細胞的細胞毒性。以各材料浸提液作用于ACC-M細胞1d，3d，和5d進行MTT實驗檢測，分組為：對照組Col，含不同質量分數OMC(0.25％,0.5％和1％)的膠原蛋白復合材料，空白對照(未做任何處理)，陽性對照(64g/L苯酚)。結果以隨時間變化的相對細胞活性表示，空白對照組細胞培養1d時的細胞活性作為對照。圖4顯示，第1、3、5天使用各組材料浸提液培養的ACC-M細胞活力并無顯著性差異，表明Col和Col/OMC材料沒有細胞毒性，而陽性對照組細胞毒性明顯，證明實驗結果準確。

4、圖5顯示了對照組、實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿、實施例1-實施例3制備的復合止血海綿(Col-0.25％OMC,Col-0.5％OMC and Col-1％OMC)膠原海綿的力學強度(A)、接觸角(B)、孔隙率(C)、吸水率(D)測試結果。拉伸強度實驗用于測試材料在軸向拉伸負荷下的性能。圖5(A)顯示，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，可以承受最大的拉伸強度為4.27±0.65N。對照組的值最小1.03±0.3N。Col-0.25％OMC的拉伸強度2.65±0.29N比Col低，但是比Col-0.5％OMC(1.77±0.12N和Col-1％OMC 1.43±0.2N高。原因是氧化微晶纖維素纖維導致一部分膠原蛋白網狀結構損傷。Col力學性能最佳是因為其拉伸力最大，在復合物中，隨著氧化微晶纖維素質量分數的增加，材料的拉伸性能逐漸降低，即Col-0.25％OMC次之，對照組最小。圖5(B)顯示，接觸角從低到高分別為62.33±2.52°(Col)，65.33±4.16°(Col-0.25％OMC)，73.33±2.52°(對照)，75±3°(Col-0.5％OMC)和80.33±4.04°(Col-1％OMC)。圖5(C)顯示，Col-0.25％OMC的孔隙率為89.88±3％，其值高于Col 87.81±2％，Col-1％OMC的孔隙率為79.56±4％，處于Col-0.5％OMC(82.93±1％)和對照組(75.70±1％)之間。圖5(D)顯示了各組材料的吸水性，Col-0.25％OMC能夠吸收自重16.43(SD＝0.65)倍的水，Col能夠吸收自重14.22±1.96倍的水分，Col-0.5％OMC吸水量為12.25±0.97倍自重，Col-1％OMC能夠吸收11.18±0.9倍的自重,對照組組的吸水量為自重的11.88±0.54倍。總的來看，隨著OMC組分的增加，材料的抗張強度、孔隙率、吸水量逐漸減小，相反，接觸角的值增加。

5、對照組、實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿、實施例1-實施例3制備的復合止血海綿(Col-0.25％OMC,Col-0.5％OMC and Col-1％OMC)膠原海綿的止血性能如表1和圖6所示。表1顯示，Col and Col/OMC材料的止血時間均低于對照組，且具有顯著性差異。Col-0.25％OMC的止血時間最短，兔耳動脈損傷模型中止血時間為35.33±6.02s，肝損傷模 型中止血時間為25.33±3.08s。Col-0.5％OMC也具有良好的止血性能，兔耳動脈損傷模型中止血時間為36.5±4.46s。此外，Col肝臟止血時間為26.17±3.76s，止血效果較為明顯。

如圖6所示，Col/OMC材料和對照組、膠原組不同模型的出血量均有顯著水平的差異，Col-0.25％OMC組不僅止血時間最短，出血量也最少，該組兔耳動脈損傷模型出血量為57.73±9.29mg，肝損傷模型出血量為49.78±5.28mg。

6、通過檢測對照組，實施例1步驟1)制備的膠原蛋白海綿，實施例1-實施例3制備的復合止血海綿(Col-0.25％OMC,Col-0.5％OMC and Col-1％OMC)膠原海綿血小板釋放反應中β-TG因子和PF4因子的濃度可以觀察被激活的血小板，如圖7A、B所示，對照組β-TG和PF4為733.76±22.11pg/ml和6.01±0.22ng/ml，與其他組有顯著性差異(P<0.05)。Col-0.25％OMC組β-TG and PF4釋放量最大，其值為1955.3±24.87pg/ml(β-TG)和12.35±0.24ng/ml(PF4)。此外，血小板糖蛋白也能夠反應血小板粘附、聚集及釋放反應的強度。血小板被激活后，血小板糖蛋白的量會隨之改變，在膜表面形成GPIIb/IIIa復合物。GPIIb/IIIa在Col-0.25％OMC組的濃度為22.88±0.38ng/ml，相比于對照組(10.28±0.39ng/ml)，有顯著水平的差異(P<0.05)。并且高于其他任何實驗組(圖7C)。factor XIIa標志著人體凝血過程的開端，如圖7D，Col-0.25％OMC group FXIIa濃度(100.72±2.58U/L)以及Col-0.5％OMC組FXIIa濃度(103.99±3.25U/L)明顯高于對照組和OMC組。總之，Col和Col-0.25％OMC組能夠通過影響血小板的促凝活性提高止血效率。首先，多孔的支架材料能夠為血小板的粘附和聚集提供良好的支架，第二，Col和Col-0.25％OMC能夠促進血小板的釋放反應以及凝血酶和纖維蛋白的形成。它能夠促進釋放因子如β-TG,PF4and GPIIb/IIIa的釋放，促進凝血過程的進行，并且能夠通過提高GVPI的濃度直接影響血小板的凝血活性。第三，Col和Col-0.25％OMC能夠激活內源性凝結通路，引發FXIIa因子濃度的提高(圖7D)。此外，β-TG,PF4and GPIIb/IIIa的最大濃度均發生在Col-0.25％OMC組，證明其止血性能高于Col組。

7、圖8和圖9分別顯示了不同材料分別植入兔腿部1d，7d，14d和28d后的組織學圖像和超聲圖像。如圖8所示，在植入部位可以檢測到異常的拱形彎曲，植入材料的形貌可以較為清晰的觀測到。從圖8a-c可以看到,植入的第一天，對照組組，Col組和Col-0.25%OMC組植入部位出現水腫和壞疽，并且能夠觀測到炎癥細胞的浸潤。在隨后的超聲檢測中，D1,D2and D3代表對照組組,Col組and Col-0.25%OMC組材料在體內的直徑，分別為5.1mm,4.6m and 4.7mm。從圖9A-C可以觀測到信號異常區域的炎性水腫伸展到肌肉下層。第7天時，對照組組材料引起真皮、皮下和肌肉組織中肉芽的增殖，如圖8d。同時，Col組和Col-0.25%OMC組同時觀測到了在真皮組織下的膠原纖維化、壞疽以及中性粒細胞的浸潤(圖8e、f)。圖9D-F顯示，材料的直徑相比第一天明顯減小，分別為2.3mm,2.1mm和8mm，同時，炎癥水腫也明顯減輕。在移植后的14天時，可見組織增殖和炎癥細胞的浸潤，對照組,Col和Col-0.25%OMC組植入材料的直徑分別為1.6mm,1.3mm和1.0mm(圖8g-i)。移植后的28天，所有組別均無炎癥及增生組織并觀測到毛囊，表明移植區域恢復正常(圖8j-l)。與此同時，此區域的超聲信號連續正常，表明炎癥反應已經消失(圖9J-L)。與之前的研究相比，Col和Col-0.25%OMC的降解時間(4周）明顯小于Microfibrillar Collagen(8周），殼聚糖海綿的降解時間更長，并且會引起更加嚴重的組織反映。用于止血、填充、修復的生物材料的降解時間是評價材料性能的重要因素。Col和Col/OMC均屬于高分子材料，擁有良好的生物學特性，其降解過程包括化學水解及酶降解。其中，體內的膠原酶能夠降解植入的膠原材料。膠原海綿在水解和酶解的作用下，從高聚物逐步變為寡肽或氨基酸，最終被人體吸收。我們推測在向Col內加入OMC后，Col/OMC的分解過程會歷經OMC鏈縮短、進入血漿后進一步分解為小片段，如糖醛酸、葡萄糖等。OMC是MC的氧化產物，MC是生物可降解的，推測其氧化產物應該具有相似的分解機制。

由以上結果表明：FT-IR光譜結果表明結果顯示，隨著OMC組分的增加，1031cm-1-1724cm-1的峰密度增加明顯，相反1080cm-1處峰減小，推測1080cm-1處峰為膠原氨基C-H伸縮振動峰，加入OMC粉末后，二者相互作用導致1031cm-1and 1724cm-1處峰強度的改變。研究表明，氧化過程會導致MC羧基的改變。當其羧基量達到16％～24％時，OMC具有最佳的止血效果。當羧基暴露在表面時，其所帶電荷能夠有效吸附血小板。1724cm-1為典型的羧基伸縮振動峰，我們的材料同樣在此處測得了吸收峰，因此我們推測羧基能夠對材料的止血性能有一定的影響。表1顯示，隨著OMC組分的增加，止血時間減少，符合上 述推測。與對照組相比，自制Col和Col/OMC復合物具有卓越的止血性能。Col-0.25％OMC具有最佳的止血性能，在兔耳動脈止血實驗中，其出血量和出血時間分別為57.73±9.29mg及35.33±6.02s。研究顯示，多數止血海綿的止血時間為2-5分鐘，本課題組之前的研究驗證了氧化纖維素的止血性能，兔耳實驗中OMC-Na-3和Surgicel的止血時間分別為102s和126s，肝損傷實驗中其數值為138s和176s。這些材料的止血性能均遜于Col和Col-0.25％OMC材料，其原因可能是以下幾條：1、Col和Col-0.25％OMC材料具有特殊的多孔結構，能夠迅速吸收血液，；2、OMC具有優異的止血性能，能夠促進凝血塊的形成。3、二者的復合物能夠促進血小板的粘附、聚集、釋放，加速血液凝固過程。Col-0.25％OMC不僅可以快速吸收血液，還可以通過影響凝血因子直接參與止血過程，該材料的止血效果大幅提升，并可以在植入體內28天后完全降解，對周圍組織無明顯異常影響。綜上所述，此復合材料可以作為止血填充體廣泛用于口腔頜面外科手術中，具有廣闊的應用前景。