本發明涉及魚藤酮在制備藥物中的應用，具體是魚藤酮在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的新應用。

背景技術：

隨著中國經濟的快速發展，國人的生活水平得到了大幅度提高，生活方式也發生了巨大的改變，與之相對應的是心血管疾病的發生率和死亡率大大增高，這不但嚴重影響了患者的壽命及生活質量，也給國家和患者家庭帶來極大的經濟負擔。有效防治心血管疾病已經成為中國乃至世界性的一個難題。動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性動脈疾病，它是冠心病、腦中風以及外周血管疾病的主要病理基礎，因此，開發新型治療動脈粥樣硬化藥物依然是治療心血管疾病的關鍵。動脈粥樣硬化的病變先從內膜開始，內膜損傷后機體會啟動內膜損傷修復，局部浸潤的巨噬細胞會攝取 ox-LDL，形成泡沫細胞，血管平滑肌會增殖遷移到內膜，在這些過程中，不但需要大量的能量供應，還會伴發產生大量代謝相關的損傷性產物，比如超氧陰離子等。

魚藤酮（又稱毒魚藤，英文名 tubatoxin），存在于豆科魚藤屬植物的種子、莖部和根部，不溶于水，溶于醇、丙酮、氯仿、四氯化碳、乙醚等。主要用作農用殺蟲劑，也可防治人畜體外寄生蟲和生化研究。防治對象有：蚜蟲、飛虱、黃條跳甲、薊馬、黃守瓜、猿葉蟲、菜青蟲、斜紋夜蛾、甜菜夜蛾、小菜蛾等。在毒理學上是一種專屬性很強的物質，對昆蟲尤其是菜粉蝶幼蟲、小菜蛾和蚜蟲具有強烈的觸殺和胃毒兩種作用。早期的研究表明魚藤酮主要是與NADH 脫氫酶與輔酶 Q之間的某一成分發生作用，使害蟲細胞的電子傳遞鏈受到抑制，從而降低生物體內的 ATP水平最終使害蟲得不到能量供應，然后行動遲滯、麻痹而緩慢死亡。

目前，尚無關于魚藤酮用于治療動脈粥樣硬化的任何報道。

技術實現要素：

為了克服現有技術的不足，本發明目的在于提供魚藤酮治療動脈粥樣硬化的應用，提供了一種新的治療候選藥物。補充了現有治療藥物的不足。

本發明采用的技術方案如下：

發明人的設想：適度的抑制線粒體功能，一方面可以減少能量的供應，減輕血管損傷部位過度的增殖性修復，同時也可以減少超氧陰離子等損傷性產物的生成，進而減輕動脈粥樣硬化的形成和進展。基于該設想，發明人在動脈粥樣硬化小鼠模型中使用了魚藤酮，其為一種特異性線粒體復合體-1抑制劑，具有很強的脂溶性，可以直接通過細胞膜進入胞質，特異性地抑制線粒體呼吸鏈復合物I，從而降低生物體內ATP的水平，減少能量的供應，也同時減少了超氧陰離子等副產物的生成。

發明人在ApoE缺陷小鼠喂養高脂高膽固醇飼料誘發動脈粥樣硬化小鼠模型，應用小劑量（100 ppm）魚藤酮治療后，發現心臟流出道及主動脈血管中斑塊得到顯著改善；在體外實驗，魚藤酮有效降低了巨噬細胞CD36的表達（CD36介導脂質攝入及泡沫細胞形成）及血管平滑肌細胞的遷移，顯示通過小劑量魚藤酮適度限制線粒體活性，可能是一種治療動脈粥樣硬化性血管疾病的有效手段。

附圖說明

圖1: 魚藤酮可以降低ApoE敲除小鼠心臟流出道斑塊面積（鏡下圖）；

圖2：魚藤酮可以降低ApoE敲除小鼠心臟流出道斑塊面積（散點圖）；

圖3： 魚藤酮可以降低ApoE敲除小鼠主動脈斑塊面積（實物圖）；

圖4： 魚藤酮可以降低ApoE敲除小鼠主動脈斑塊面積（柱狀圖）；

圖5：魚藤酮可以降低巨噬細胞清道夫受體CD36（柱狀圖）；

圖6: 魚藤酮可以降低平滑肌細胞的遷移（鏡下圖）；

圖7: 魚藤酮可以降低平滑肌細胞的遷移（柱狀圖）。

具體實施方式

以下將結合實施例和附圖具體說明本發明的技術方案：

本發明以下實施例中使用的魚藤酮購置于Sigma；

ApoE敲除小鼠購置于北京大學醫學部實驗動物中心；

小鼠原代腹腔巨噬細胞取自南京大學模式動物中心購買的C57B6小鼠；

小鼠平滑肌細胞購置廣州吉妮歐生物科技有限公司。

實施例1 魚藤酮可以降低ApoE敲除小鼠心臟流出道斑塊面積

將高脂高膽固醇飼料喂養的ApoE缺陷小鼠分為對照組和魚藤酮治療組，每組6只，治療組小鼠飼料中添加100ppm的魚藤酮，連續喂養8周。實驗結束后取小鼠心臟流出道，冰凍包埋后切片，冰凍切片進行油紅O 染色，統計小鼠心臟流出道斑塊面積。如圖1、2所示魚藤酮治療組小鼠的流出道斑塊面積小于對照組，具有統計學差異（p＝0.0368）。

實施例2 魚藤酮可以降低ApoE敲除小鼠主動脈斑塊面積

將高脂高膽固醇飼料喂養的ApoE缺陷小鼠分為對照組和魚藤酮治療組，每組3只，治療組小鼠飼料中添加100ppm的魚藤酮，連續喂養8周。實驗結束后取小鼠主動脈，剝離干凈主動脈周圍的脂肪和結締組織，油紅O 染色，統計主動脈染色斑塊面積比例。如圖3、4所示，魚藤酮治療組小鼠主動脈斑塊面積比列小于對照組，具有統計學差異（p＝0.0159）。

實施例3魚藤酮可以降低巨噬細胞清道夫受體CD36

C57B6小鼠腹腔注射3ml的3%巰基乙酸鹽，三天后取腹腔巨噬細胞，接種到6孔板中，貼壁4小時后，換新鮮培養基，0.1μM魚藤酮預處理2小時，后加入50μg/ml的氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL），24小時后，提取細胞RNA，Q-PCR檢測巨噬細胞清道夫受體CD36的情況，如圖5所示，魚藤酮可以降低ox-LDL對CD36的誘導，提示可能降低了泡沫細胞的形成。

實施例4 魚藤酮可以降低平滑肌細胞的遷移

小鼠平滑肌細胞接種到12孔板中，貼壁過夜后，給予不同濃度的魚藤酮(0.1μM，0.4μM，0.8μM)處理2小時，后加入50μg/ml的氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），24小時后，對細胞進行消化重懸，細胞計數后，調整細胞濃度為15000個細胞/200μl, 取200μl細胞懸液加到遷移小室中，小室下方的培養孔中加入600μl完全培養基，24小時后，結晶紫染液染色，拍照后，進行染色細胞統計分析，結果如圖6、7所示，魚藤酮可以降低平滑肌細胞的遷移，在低濃度0.1μM的魚藤酮處理下就已經表現出降低平滑肌遷移的能力，并且具有濃度依賴性。